细菌的分离培养技术（动物微生物与免疫）

细菌的分离培养技术（一）目录/CONTENTS1分离培养的注意事项3细菌分离培养方法2待检材料的处理菌落菌苔分离培养的目的在含有多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。01分离培养的注意事项分离培养的注意事项采集待检材料时的无菌操作不论任何待检材料(包括动物的组织、体液，分泌物、渗出物、排泄物环境，设备，饲料或饮水等)必须在无菌操作下，用灭菌的器械采取，样品放入灭菌的容器中待检。分离培养的注意事项接种培养基时的无菌操作接种用的器械如接种环、棉棒或其他用具，在取材料接种之前必须予以灭菌，接种培养基时，要尽一切可能防止外界微生物的进入。分离培养的注意事项选择适宜的培养基如果培养基选用的不当，则材料中的细菌就可能分离不出来，为此，在从待检材料中进行性质不明的细菌初次分离培养时，一般尽可能地多用几种培养基。分离培养的注意事项考虑细菌所需的大气条件对于性质不明的细菌材料最好多接种几份培养基，分别放在普通大气、无氧环境内或含有5%-10%二氧化碳的容器中培养。分离培养的注意事项考虑培养温度和时间一般病原菌在37℃温度培养即可，经24-72h培养后大多数病原菌都可以生长出来，少数须培养较长时间后，可见其生长，但要注意防止培养基变干。02待检材料的处理待检材料的处理加热处理通过革兰氏染色镜检，当怀疑病料中存在有芽胞的病原菌时，可将待检组织加入灭菌生理盐水中磨碎做成1:5-1:10的稀释液，放在50-75℃水浴中加热20-30min，以便在这样的温度下，将抵抗力弱的微生物杀死，而有芽胞的细菌仍存活，然后，将这种材料接种到适当培养基上，即可能得到纯培养。待检材料的处理通过敏感试验动物处理

在待检材料中存在有某种可疑的病原菌时，可感染对该种病原菌最易感动物，待试验动物发病或死亡后，取它的血液或组织器官材料接种到培养基上。一方面可以由混有腐生杂菌的材料中分离病菌；另一方面可以确定病原菌的病原性或毒力。待检材料的处理化学药品处理有些药品对于某些细菌有极强的抑制力，而对另一些细菌则没有。因此，可将其加入到培养基中分离某些细菌。03细菌分离培养方法细菌分离培养方法材料中细菌的分离最常用的方法是固体培养基分离法，即取少许待检材料，在固体填养基表面，逐渐稀释分散，使成单个细菌细胞经培养后，形成单个菌落，从而得到细菌的统培养，具体操作有很多种，其中平板划线法、稀释平板法和菌落分纯法较为多用。细菌的分离培养技术（二）目录/CONTENTS1纯培养菌的挑选方法3细菌生长表现的检查法2纯培养菌的移植接种法01纯培养菌的挑选方法纯培养菌的挑选方法先用肉眼观察有无细菌菌落生长，如有，须进一步观察长出的菌落是单一的、还是混杂的。纯培养菌的挑选方法凡培养基中沿涂布划线处长出较多的一种菌落是材料中的病原菌的可能性较大，少数零散的菌落多为在操作过程中由外界进入的杂菌。纯培养菌的挑选方法将长出的各种菌落各选一二个，用蜡笔在平皿底加以标记，置低倍显微镜下观察菌落的结构。02纯培养菌的移植接种法纯培养菌的移植接种法移植于固体平板培养基方法同平板划线分离培养法纯培养菌的移植接种法移植于斜面培养基中(1)用左手握住菌种管和斜面培养管底部，右手持接种针(环)。(2)用右手小指与手掌，小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。(3)用接种针(环)伸入菌种管内挑取移种之菌落。(4)伸入斜面培养管内，从斜面底部到顶端直接自下而上地“Z”字形划线。(5)将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部然后沿原穿刺线退出接种针。(6)接种完火焰灭菌管口塞上棉塞，置于37℃培养。纯培养菌的移植接种法移植于半固体培养基中(1)以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿原穿刺线退出接种针。(2)其他操作与斜面接种类似。纯培养菌的移植接种法移植于液体培养基(1)用灭菌接种环挑取菌落或标本。(2)在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌混匀在液体培养基中。纯培养菌的移植接种法移植于液体培养基(1)用灭菌接种环挑取菌落或标本。(2)在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌混匀在液体培养基中。纯培养菌的移植接种法移植于疱肉培养基接种时将疱肉培养基表面凡士林加热熔化，斜持试管片刻，使凡士林黏附于管壁侧，然后以接种环取培养物或用灭菌毛细管取液体培养物种入凡士林层下面的培养基内再将凡土林块稍加热熔化覆盖于培养基表面，置于37℃培养后，观察结果。03细菌生长表现的检查法细菌生长表现的检查法琼脂平板表面上菌落特征肉眼观察有无单独菌落形成，进而观察菌落的形状大小、颜色、湿润度、隆起度及透明度，并用接种环轻轻触及菌落，以检查其质度。细菌生长表现的检查法菌落特征的描述可参考用以下术语(1)形状：圆形、针尖状(直径在1.0mm以内者)、不规则根状。(2)大小：以毫米(mm)计算。(3)隆起度：扁平、高起、隆起，圆顶状。(4)表面：光滑、粗糙同心圆状、放射状、乳突形、脐形。(5)构造：颗粒状(细、中、粗)、丝状、卷曲状等。(6)边缘：整齐、波状、锯齿状、卷发状等。(7)颜色：无色、灰白色及产生各种色素。(8)透明度：透明、半透明、不透明。(9)质度：奶油状、黏性、质脆等。(10)乳化性：易、难。液体培养基中的生长表现肉眼观察细菌的生长量培养物的混浊度、表面生长情况、有无沉淀物等。细菌生长表现的检查法细菌生长表现的检查法液体培养物特征的描述可参考以下术语(1)生长量：无生长、贫瘠、中等、丰盛。(2)混浊度：是否混浊，轻度、中等或强度混浊，混浊情况为全管均匀一致还是混有颗粒、絮片或丝状生长物。(3)表面生长：培养基表面是否形成菌膜，菌膜的厚度(薄膜、厚膜)，菌膜表面的情况(光滑、粗糙、颗粒状)。(4)沉淀：有无、