仿制药一般流程专家讲座

仿制药普通研发流程

.10.10仿制药一般流程专家讲座第1页一个完整制剂研发流程应该包含基本内容一、文件调研和专利查询二、处方前研究三、原辅料相容性研究四、处方工艺筛选和优化五、影响原因试验六、小试稳定性样品制备和稳定性研究七、中试放大和中试稳定性研究八、药品申报工作（资料撰写、统计台账样品整理）仿制药一般流程专家讲座第2页文件药品注册情况调研和专利查询（一）药品注册情况查询：SFDA、FDA、EMEA（二）文件检索：国内数据库：CNKI、维普、万方国外数据库：Reaxys、Pubmed、CA、SciFinder等（三）专利查询：中国专利局、欧洲专利网、美国专利网、注意：1、在进行3.1类申报时，FDA资料普通比较详细，会得到很多有用信息。尤其要注意查询。仿制药一般流程专家讲座第3页处方前研究1、原料药理化性质2、原料药生物学性质3、剂型选择仿制药一般流程专家讲座第4页1、原料药理化性质包含原料药色泽、嗅味、pH值、pKa、粒度、晶型、比旋度、光学异构体、熔点、水分、溶解度、脂水分配系数、溶剂化/或水合状态，以及原料药在固态和/或溶液状态下对光、热、湿、氧等条件下稳定性情况。有些性质能够经过文件查询仿制药一般流程专家讲座第5页对制剂影响较大一些理化性质pH值—注射剂时要重点考虑pKa—能够了解药品在一定pH下解离状态，粗略地预计口服药品体内吸收粒度—影响药品溶出速率和溶解度，难溶性药品要尤其关注晶型—影响药品溶出速率和溶解度，可能会影响体内吸收溶解度—影响制剂体内吸收脂水分配系数（logP）—影响制剂体内吸收仿制药一般流程专家讲座第6页需要给出研究汇报一些理化性质粒度研究：主要针对难溶性药品，能够先考查不一样粒度原料药溶出速率影响，进而考虑是否在处方设计时，控制原料药粒度。晶型研究：以前重视程度不够，现在应该引发足够重视。因为化合物晶型对药品稳定性、溶解度和溶出速率有很大影响，另外当前存在很多化合物晶型专利，有时需要绕开保护晶型选择另一个有效晶型。溶解度和溶出速率研究：溶解度分为特征溶解度和表观溶解度（平衡溶解度），我们当前测定药品在不一样pH值下溶解度都属于表观溶解度。仿制药一般流程专家讲座第7页3、剂型选择仿制药要尽可能选择与原研药相同剂型，假如确实要改变剂型，一定要给出充分理由，说明新剂型突出优点。仿制药一般流程专家讲座第8页

原辅料相容性试验方法：HPLC、DSC等

原辅料相容性选择那些辅料？仿制药一般流程专家讲座第9页

SFDA指导标准与影响原因条件相同。辅料用量较大（如稀释剂等），可按主药：辅料=1：5百分比混合，若用量较小（如润滑剂等），可按主药：辅料=20：1百分比混合，取一定量，放置在高湿、高温、光照条件下10天，重点考查性状、相关物质等等，必要时，可用原料药和辅料分别做平行对照试验，以判别是原料药本身改变还是辅料影响。仿制药一般流程专家讲座第10页

FDA相关指导标准

主药：填充剂1：10主药：崩解剂/粘合剂1：1主药：润滑剂10：1条件为（1）40℃、RH75%开口；（2）40℃、RH75%闭口；（3）60℃闭口。于两周、四面取样检验外观性状及相关物质仿制药一般流程专家讲座第11页处方工艺研究―处方设计无专利专利保护了关键技术和辅料，只能采取相近技术和可替换辅料实现我们目标处方筛选过程重点要找出评价指标？仿制药一般流程专家讲座第12页基本要求筛选之前要有方案试验过程要有统计--真实、及时、完整处方优化要有比较和设定关键指标试验结果要有分析和总结仿制药一般流程专家讲座第13页处方筛选和优化单原因考查，原因较多时能够采取正交设计和均匀设明确处方筛选和优化评价指标，如溶出度、释放度、相关物质等假如研究过程中发觉影响制剂质量、稳定性、药效主要原因，如原料药水分或辅料一些指标，应进行重点控制，确保药品质量仿制药一般流程专家讲座第14页制剂工艺研究处方筛选后进行工艺研究。普通同时进行，但在资料中须分条理整理。普通须研究粘合剂用量范围，制粒设备参数，原料粒径控制，干燥方式及时间，整粒方式及参数，混合强度及时间，压片速度，硬度等。普通依据经验值作微调即可，或是对关键步骤进行考查，无须全部详细考查。对于常规工艺，经过多批样品验证即可。仿制药一般流程专家讲座第15页工艺设计依据剂型特点，结合已掌握药品理化性质和生物学性质，设计几个基本合理制剂工艺假如药品存在多晶型现象，要注意制剂工艺过程中粉碎、制粒、包衣过程对药品晶型影响。原料药单独晶型研究比较轻易，与辅料一起进行晶型研究难度较大。假如药品对湿不稳定，应注意对生产环境湿度进行控制，制备工艺尽可能防止水分影响，可采取干法制粒。粉末直接压片工艺等。易氧化药品可将溶剂加热放冷后再溶解药品，能够加惰性气体保护，溶剂除氧易挥发性药品，最终加入，防止制备过程损失仿制药一般流程专家讲座第16页影响原因研究样品批次和规模

影响原因样品需要采取最终确定处方工艺，制备批量满足测定要求，普通制备一批，固体制剂批量为1000个制剂单位左右，注射剂则依据详细放样和测定要求，普通在几十个制剂单位。影响原因批可与小试三批中一批共用样品进行试验。仿制药一般流程专家讲座第17页放置条件

普通将制剂除去外包装，分散放置于适宜容器中（惯用培养皿），分别进行高温、高湿和光照试验。高温条件为40℃和60℃；高湿条件为RH90%±5%和RH75%±5%；光照条件为4500Lx±500Lx。分为在以上试验条件下放置10天，在第5天和第10天取样检测。若供试品性质稳定，高温试验可只进行60℃条件，高湿试验可只进行RH90%±5%。仿制药一般流程专家讲座第18页小试稳定性样品制备和稳定性研究样品批次和规模

制备批量普通为三批，固体制剂批量为1000个制剂单位，注射剂则依据放样和测定要求放样，普通每个批次在几十个制剂单位。仿制药一般流程专家讲座第19页放置条件分为长久和加速条件放样，分别采取拟上市包装三批进行试验。加速试验普通选择40℃±2℃、75%±5%条件进行6个月试验，在第0、1、2、3、6个月末取样测定。若6个月内样品经检测有不符合质量标准现象，应在30℃±2℃、65%±5%条件下同法进行6个月试验。长久试验普通选择25℃±2℃、60%±5%条件进行36个月试验，在第0、3、6、9、12、18、24、36个月末取样测定。仿制药一般流程专家讲座第20页药品申报工作内容申报资料撰写研发原始统计整理样品制备批统计、中控统计、检验统计整理研发仪器和设备台帐整理稳定性样品留取样台账整理样品、对照品使用情况统计及剩下样品整理样品出入库台账仿制药一般流程专家讲座第21页制剂质量研究项目性状判别检验含量均匀度溶出度释放度杂质残留溶剂其它含量2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第22页性状制剂性状是考查样品外形和颜色。片剂应描述是什么颜色压制片或包衣片（包薄膜衣或糖衣），除去包衣后片芯颜色，以及片子形状，如异形片（长条形，椭圆形，三角形等）；片面有没有印字或刻痕或有商标识号等也应描述。硬胶囊剂应描述内容物颜色、形状等。注射液普通为澄明液体（水溶液），但也有混悬液或粘稠性溶液，需注意对颜色描述，还应考查贮藏过程中性状是否有改变。23仿制药一般流程专家讲座第23页判别通常采取灵敏度较高、专属性较强、操作较简便、不受辅料干扰方法对制剂进行判别。普通采取HPLC法：在含量测定项下统计色谱图中，供试品溶液中主峰保留时间与对照品溶液中主峰保留时间一致2023/4/2424仿制药一般流程专家讲座第24页检验口服片剂、胶囊剂除按制剂通则检验外，普通还应进行溶出度、杂质（或已知杂质）等检验；缓控释制剂、肠溶制剂、透皮吸收制剂等应进行释放度检验；小剂量制剂（主药含量低）应进行含量均匀度检验；注射剂应进行pH值、颜色（或溶液颜色）、杂质（或已知杂质）检验；注射用粉末或冻干品还应检验干燥失重或水分；大致积注射液检验重金属与不溶性微粒等。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第25页含量均匀度化学药品质量标准建立规范化过程技术指导标准含量均匀度系指小剂量口服固体制剂、粉雾剂或注射用无菌粉末等制剂中每片（个）含量偏离标示量程度；片剂、胶囊剂或注射用无菌粉末，规格小于10mg（含10mg）品种或主药含量小于每片（个）重量5%品种；其它制剂，标示量小于2mg或主药含量小于每个重量2%品种；复方制剂应对符合上述条件组分进行含量均匀度检验。对于药品有效浓度与毒副反应浓度比较靠近品种或混匀工艺较困难品种，每片（个）标示量小于25mg者，应进行含量均匀度研究。版中国药典附录XE含量均匀度系指小剂量或单剂量固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂每片（个）含量偏离标示量程度。片剂、硬胶囊剂或注射用无菌粉末，每片（个）标示量小于25mg或主药含量小于每片（个）重量25%者；内容物非均一溶液软胶囊、单剂量包装口服混悬液、透皮贴剂、吸入剂和栓剂；复方制剂仅检验符合上述条件组分；凡检验含量均匀度制剂，普通不再检验重（装）量差异2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第26页含量均匀度程度取10片（个）计算：A+1.80S≤15.0，供试品符合要求；A+S>15.0，不符合要求；如A+1.80S>15.0，A+S≤15.0，另取20片（个）复试。依据30片（个）数据计算：A+1.45S≤15.0，符合要求；A+1.45S>15.0，不符合要求。单剂量包装口服混悬剂、内充混悬物软胶囊剂、胶囊型或泡囊型粉雾剂、单剂量包装眼用、耳用、鼻用混悬剂、固体或半固体制剂，其程度应为±20%；透皮贴剂、栓剂程度应为±25%.2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第27页溶出度凡检验溶出度制剂，不再进行崩解时限检验。溶出度研究应测定最少三批样品，考查其溶出曲线和溶出均一性。对易溶于水药品，在质量研究中亦应考查其溶出度，但溶出度检验不一定订入质量标准。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第28页释放度缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂、透皮贴剂均应进行释放度研究。通常应测定最少三批样品，考查其释放曲线和释放均一性，并对释药模式（零级、一级、Higuchi方程等）进行分析。

凡检验释放度制剂，不再进行崩解时限检验。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第29页溶出度/释放度对测定方法进行方法学验证，主要从以下几方面进行考虑：1、溶出及释放方法，主要考查溶出介质选择、溶出条件选择（桨法或转篮法）、转速选择，主要经过溶出曲线进行评价。

2、对溶出检测方法进行验证，从专属性和准确性进行评价

（1）需要进行辅料干扰试验

（2）进行检测方法系统适用性试验

（3）进行回收率试验

3、对试验方法进行验证

（1）需要进行进样精密度试验

（2）进行溶出液稳定性试验

4、对批内及批间差异进行验证

（1）进行溶出重复性试验

（2）进行溶出均一性试验2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第30页溶出度/释放度溶出度/释放度方法确实立方法学验证2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第31页方法确实立

参考上市产品溶出度测定条件溶出方法选择：篮法、浆法、小杯法溶出介质筛选：自制与参比制剂在pH1.0盐酸、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、纯化水中溶出曲线要相同，用相同因子（f2）判断。不一样溶出介质中溶出曲线，并非溶出越快越好，而应该是对产品有较强区分能力，而亦能在一定程度上反应体内实际吸收情况

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第32页方法确实立溶出介质体积选择：使药品符合漏槽条件漏槽条件：即所用介质体积应到达被测物质在37℃时在此介质中到达饱和溶液浓度体积3～10倍。指溶出到介质中药品很快被介质稀释带走，药品溶出不受溶出介质中药品浓度影响，亦即浓度差不是药品溶出限速步骤。转速选择：普通从50转开始，若速度提升须有充分理由。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第33页方法确实立溶出度指标制订：在选择方法及溶出介质和预选转速下测定不一样时间溶出量，建立溶出曲线，从图谱上来确定取样液时间，普通溶出曲线拐点处后推10-15分钟。溶出度均匀性试验（批内）：确定工艺稳定性在确定条件下测定6片（粒）样品溶出曲线，6条溶出曲线进行比较，应基本均匀一致。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第34页方法确实立溶出曲线试验（重现性，批间）：考查方法设定取样时间以及程度是否合理。经过溶出曲线也能够看出药品在何时能到达最大释放，以及是否能到达最大释放。

2023/4/24溶出曲线RSD要求时间点溶出结果RSD第一时间点<20%自第二时间点至最终时间点<10%仿制药一般流程专家讲座第35页方法学验证--只考查一个介质HPLC法或UV法若用UV须进行紫外方法学考查：最大吸收波长扫描、辅料干扰试验、滤膜吸附、线性、回收率试验、进样精密度、溶液稳定性试验

若用HPLC测定须进行HPLC方法学考查：色谱条件、滤膜吸附、线性、进样精密度、回收率试验、溶液稳定性试验

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第36页辅料干扰试验测定方法：取对照品溶液扫描，一份同等浓度样品或样品浓度略低于对照品溶液。假如没有干扰，二条紫外扫描图基本重合，假如有干扰，供试品扫描图会高于对照品溶液。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第37页滤膜吸附试验注意事项：(1)过滤时滤膜与主成份间存在着一个吸附饱和过程，滤膜吸附一定量后到达饱和，不再吸附。(2)吸附量2%以下时可忽略不计；超出2%应注意。(3)0.45μm滤膜吸附率高于0.80μm。(4)煮沸1.5h处理提升微孔滤膜通透性,减小吸附作用效果好于浸泡24h。方法：（1）取溶出液，分别过滤不一样体积初滤液后测定，观察响应值改变情况，以知晓被测药品与滤膜吸附情况。

(2)取样后一份不过滤，直接采取高速离心，取上清液，与过滤掉一定体积后另一份续滤液比较，观察二者间测定数据是否存在显著性差异。判定自动取样溶出仪固有滤膜是否存在吸附时，普通采取该法。

(3)对照品溶液，经滤膜过滤一定体积后，与原溶液进行比较，观察测定前后数据改变情况。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第38页线性要求：溶出度测定以释放量10%～120%间选取≥5个点即可,每个浓度进3针。☆可接收标准(常量):R≥0.998(0.990),Y轴截距在100％响应值2%(25%)以内,响应因子RSD≤2.0%(10%)。Y＝KX+b假如和含量测定方法一样，可不做；假如和含量测定浓度不一样，增加线性范围；假如和含量定方法不一样，要求要做此项。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第39页分别配制浓度为80％、100％和120％供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率☆可接收标准：98.0～102.0%RSD≤2.0(n=9)每个样品进3针，共9针

2023/4/24回收率试验仿制药一般流程专家讲座第40页当和含量溶剂不一样时，须重新考查。主成份溶解于溶出介质后，因进行稳定性考查。(1)如不稳定，则应在标准中注明取样后马上测定；(2)溶液不稳定时普通采取对照品平行操作法。每个样1针

2023/4/24溶液稳定性试验仿制药一般流程专家讲座第41页精密度同含量测定连续进6针

2023/4/24精密度仿制药一般流程专家讲座第42页含量测定方法学验证HPLC法考查：系统适用性、专属性、线性、进样精密度、溶液稳定性、耐用性、重复性、回收率。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第43页系统适用性是一份样品连续进样6针，在没有特殊要求条件下，普通是取相关物质项下供试品溶液连续进样6针，主峰峰面积RSD<2.0%，主峰保留时间RSD<1.0%。另外，主峰拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须到达基线分离，主峰理论塔板数应符合质量标准要求。共6针

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第44页专属性（阴性对照试验）配制空白辅料，与样品相同溶剂溶解，考查辅料是否干扰主药测定。可接收标准为：空白对照应无干扰，主成份与各相关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰纯度因子应大于980。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第45页系统适用性与专属性区分和联络联络：建立方法时候，必须要经过系统实用性及专属性试验。系统适用性中也有对分离度进行要求，不过是主要峰；专属性试验中也对分离度等进行了要求，比置系统实用性中要求更全方面和严格。区分：系统实用性在每次检测时，必须要做，而且要必须合格。

专属性则在方法建立及方法学中研究，做一次即可。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第46页线性对照品配制，线性范围最少5个点以上，浓度范围可为供试浓度50%-150%（或者80％-120％），最少包含回收率最低和最高浓度，分别测定其主峰面积，计算对应含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。可接收标准为：回归线相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值2％以内，响应因子相对标准差应小于2.0%。每个样进3针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第47页进样精密度详细操作：普通可取线性关系试验项下中间浓度溶液，连续进样。可接收标准为：RSD<2.0%。进6针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第48页溶液稳定性取供试品溶液，要求条件下放置8h，分别于0、2、4、6、8h进样，统计色谱图，观察主峰面积（及主要杂质及总杂质峰面积）改变，并计算RSD。可接收标准为：RSD<2.0%。每个样进1针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第49页耐用性分别考查流动相百分比改变±5％、流动相pH值改变±0.2、柱温改变±5℃、流速相对值改变±20％时，仪器色谱行为改变。可接收标准为：主峰拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须到达基线分离；各条件下含量数据（n=6）RSD<2.0%。每个条件进1针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第50页重复性（用中试样品）是配制6份含量测定项下供试品溶液，分别进样，并计算每针含量，并计算其RSD。可接收标准为：RSD<2.0。进8针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第51页回收率验证时普通要求分别配制浓度为80％、100％和120％供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。可接收标准为：各浓度下平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据相对标准差（RSD）应小于2.0%。每个样进3针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第52页定量限：主峰与噪音峰信号强度比应不得小于10

。检测限：主峰与噪音峰信号强度比应不得小于3。都能够不做

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第53页杂质药品中杂质按其理化性质普通分为三类：有机杂质、无机杂质及残留溶剂。有机杂质包含工艺中引入杂质和降解产物等，可能是已知或未知。因为这类杂质化学结构普通与活性成份类似或具渊源关系，故通常又可称之为相关物质。无机杂质是指在原料药及制剂生产或传递过程中产生杂质，这些杂质通常是已知，主要包含：反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其它残留金属、无机盐、助滤剂、活性炭等。残留溶剂是指在原料药及制剂生产过程中使用有机溶剂。制剂中杂质考查重点是降解产物。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第54页相关物质方法学验证--已知杂质（定量）参考标准用HPLC法测定系统适用性、专属性、线性、检测限与定量限、精密度、溶液稳定性、回收率、耐用性2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第55页已知杂质（定量）采取HPLC法，须采取峰面积法，详细定量方法有：外标法（杂质对照品法）加校正因子主成份本身对照法不加校正因子主成份本身对照法峰面积归一化法。①法定量比较准确，采取时应对对照品进行评定和确认，并制订质量要求。②法应对校正因子进行严格测定，仅适合用于已知杂质控制。③法前提是假定杂质与主成份响应因子基本相同。普通情况下，如杂质与主成份分子结构相同，其响应因子差异不会太大。④法简便快捷，但因各杂质与主成份响应因子不一定相同、杂质量与主成份量不一定在同一线性范围内、仪器对微量杂质和常量主成份积分精度及准确度不相同等原因，所以在质量标准中采取有一定不足。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第56页系统适用性配置6份相同浓度杂质对照品溶液进行分析，该杂质峰面积RSD<2.0%，主峰保留时间RSD<1.0%。另外，分离度应大于2.0或符合要求、拖尾因子应0.8-1.2或符合要求。共6针2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第57页专属性空白溶剂干扰试验

取溶解样品用溶剂，进样。空白辅料干扰试验（有辅料时做）降解试验：酸、碱、热、光照、氧化降解对照品溶液：取样品，按相关物质供试品浓度配制溶液已知杂质定位试验取已知杂质配成一定浓度，进样。取降解对照品溶液，加入少许已知杂质对照品进样。可接收标准：空白对照应无干扰，主峰与杂质峰应完全分离，已知杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第58页强制降解试验酸降解试验：普通选择0.1N盐酸，在室温或加热条件下进行考查。普通破坏24h。再用碱中和。碱降解试验：普通选择0.1N氢氧化钠溶液，在室温或加热条件下进行考查。普通破坏24h。再用酸中和。高温降解试验：可分别在固体和溶液状态下进行考查，详细考查温度与时间均可依据详细品种。比如，在110℃考查24小时。光降解试验：

4000Lx+（-）500Lx照度下放置10天。氧化降解试验：主要在溶液状态下进行考查，用10％或15％双氧水溶液双氧水破坏24小时。制剂和空白辅料同时做2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第59页进行破坏性试验时关注点和存在问题在选定破坏条件下，药品应有一定量降解。以主成份计算，普通降解10％左右。分离度与峰纯度分析：破坏性试验产生降解产物个数比较多，采取HPLC法测定时，需考虑主成份与降解产物之间、降解产物相互之间分离度，确保降解产物峰与主峰、降解产物峰之间有良好分离度。推荐色谱分析时采取梯度洗脱，以有效分离降解产物。相关物质浓度考虑：如浓度太大，峰面积平头，将样品用流动相稀释至峰高为100mA或峰面积为1~2万之间。0.1N浓度酸碱对于一些较为稳定药品来说，是破坏不出什么东西，做法有两种：

1.梯度性增加酸碱浓度，如：0.5N、1.0N、1.5N等

2.用水浴加热辅助。但这种加热法存在一个问题，破坏出来杂质是算热破坏还是纯粹是酸碱破坏呢？个人以为是都有，所以杂质又变得不专属了。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第60页线性从定量限浓度起，至杂质对照品溶液浓度120%或更高，配制6份浓度不一样供试液。可接收标准为：回归线相关系数（R）不得小于0.990。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第61页检测线与定量限定量限：杂质峰与噪音峰信号强度比应不得小于10。检测限：杂质峰与噪音峰信号强度比应不得小于3。另外：配制6份最低定量限浓度溶液，所测6份溶液杂质峰保留时间相对标准差应小于2.0%，峰面积相对标准差应小于5.0%。（线性最低点，也可作为进样精密度）

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第62页精密度重复性：分别配置杂质对照品贮备液与供试品贮备液，然后取供试品贮备液适量稀释定容，平行制备6份杂质浓度（普通为0.1%），进样，再进杂质对照品，计算含量及RSD，RSD<2.0%。中间精密度：配制6份杂质浓度（普通为0.1%）相同供试品溶液，分别由两个分析人员使用不一样仪器进行测试，所得含量数据相对标准差应小于2.0%。进样精密度注：0.1%指单个杂质，假如某一单个杂质量大于0.1％，普通会被要求做判定。定量测定基础是杂质“含量”，既用杂质对照品测定杂质含量，此时重复性与含量重复性做法一致。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第63页溶液稳定性与含量测定同一个色谱条件只做杂质浓度。取杂质对照品溶液，要求条件下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时进样，观察杂质峰面积改变并计算RSD。可接收标准为：杂质含量绝对值在±0.1％以内，并不得出现新大于汇报程度杂质。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第64页回收率普通采取加样回收率来做。LOQ、100%、120%是比较理想，实际操作中LOQ这个点不太好做，我们普通要求程度50%（或更低，比如：20%）直接作为定量限（S/N>10就能够了）、100%、120%（能够高点），普通提议和线性对应，这么范围更明确。普通做50%，100%，150%也能够接收要。比如某杂质程度为0.2%，取已知杂质含量样品适量9份（普通为样品取样量二分之一），分别加入该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％杂质溶液，稀释到相关物质供试品溶液浓度。另取杂质对照品，按照标准配制成杂质对照品溶液，分别测定其含量，计算回收率。该项目标可接收标准为：各浓度下平均回收率均应在80%-120%之间，相对标准差应小于10%。回收率最低点为定量限时，可放宽至70%-130%。

回收率=（（测得对照品量+样品中已知含量）-样品中已知含量）/加入对照品量x100%=测得对照品量/加入对照品量x100%2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第65页耐用性分别考查流动相百分比改变±5％、流动相pH值改变±0.2、柱温改变±5℃、检测波长改变±5nm、流速相对值改变±20％以及采取三根不一样批号色谱柱进行测定时，仪器色谱行为改变，每个条件下各测试两次。可接收标准为：各杂质峰拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其它成份峰必须到达基线分离；各条件下杂质含量数据（n=6）相对标准差应小于2.0%，杂质含量绝对值在±0.1％以内。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第66页相关物质方法学验证—未知杂质（程度检验）用HPLC法测定系统适用性、专属性、检测限、精密度、溶液稳定性、耐用性2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第67页系统适用性取样品，按照相关物质供试品浓度配制溶液，进样。可接收标准为：理论踏板数应符合要求，分离度应大于2.0或符合要求，拖尾因子应0.8-1.2或符合要求。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第68页专属性空白溶剂干扰试验

取溶解样品用溶剂，进样。空白辅料干扰试验（有辅料时做）降解试验：酸、碱、热、光照、氧化降解对照品溶液：取样品，按相关物质供试品浓度配制溶液可接收标准：空白对照应无干扰，主峰与杂质峰应完全分离。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第69页检测线检测限：杂质峰与噪音峰信号强度比应不得小于3。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第70页精密度重复性：取样品，配置成本身对照浓度，由同一人员在相同操作条件下进样6次，计算含量及RSD，RSD<2.0%。中间精密度进样精密度

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第71页溶液稳定性与含量测定同一个色谱条件只做杂质浓度。取本身对照液溶液，要求条件下放置8小时，分别于0、2、4、6、8小时进样，观察杂质及总杂质峰面积改变并计算RSD。可接收标准为：杂质含量绝对值在±0.1％以内，并不得出现新大于汇报程度杂质。

2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第72页耐用性分别考查流动相百分比改变±5％、流动相pH值改变±0.2、柱温改变±5℃、检测波长改变±5nm、流速相对值改变±20％以及采取三根不一样批号色谱柱进行测定时，仪器色谱行为改变，每个条件下各测试两次。可接收标准为：各杂质峰拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其它成份峰必须到达基线分离；各条件下杂质含量数据（n=6）相对标准差应小于2.0%，杂质含量绝对值在±0.1％以内。2023/4/24仿制药一般流程专家讲座第73页制剂杂质程度对于仿制已经有国家标准药品，能够依据已经有标准制订对应杂质程度。假如该标准中未要求杂质程度，应与已上市同品种药品（提议首选原研发企业在使用期内产品）进行全方面质量对比研究，分析其杂质种类与含量，依据研究结果，以及稳定性考查结果，决定是否需在质量标准中对杂质进行控制。假如难以取得已上市同品种标准，但有相同原料药其它剂型上市，则在制订杂质程度时，可参考此上市产品质量标准，对杂质进行控制。2023/4/24仿制药一般