小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的防治及安全性研究,兽医硕士论文

小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的防治及安全性研究,兽医硕士论文鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的一种传染病，临床表现为急性败血症、肠炎、气囊炎、心包炎、肝周炎等。近年来随着规模化养殖的发展，该病发病率逐年增高，在世界范围内，给养禽业造成严重经济损失。当前治疗鸡大肠杆菌病主要是依靠抗生素，但随着抗生素的滥用，畜禽等动物性食品安全遭到了极大影响，耐药性也不断增加。当代药理学研究证明中药在抗菌、抗病毒等方面具有重要作用，且能够抑制细菌耐药性的产生，这对于解决致病性大肠杆菌严重的耐药性问题、有效防治畜禽感染性疾病具有重要意义。小柴胡汤，首见于东汉医家张仲景的(伤寒杂病论〕，由柴胡、黄芩、半夏、参、生姜、大枣组成，具有清热解毒、燥湿止痢的成效。当前对小柴胡汤抑制鸡大肠杆菌病作用尚未见报道，鉴于此，本研究建立了一个稳定的鸡大肠杆菌病模型，探究小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的防治作用及安全性研究，为防控鸡大肠杆菌病和小柴胡汤复方中药开发提供数据支持。通过胸肌注射108cfu/mL的菌液0.4mL，建立鸡大肠杆菌病模型，鸡群死亡率到达60%。攻毒雏鸡会产生全身性的病变和脏器损伤；在攻毒后36h，鸡群的体温显着下降，死亡率最高，且在这里时发现不同脏器菌载量和血液中细菌含量到达峰值；雏鸡的生化指标AST和ALT在攻毒后48h到达峰值，且显着高于空白组。在成功建立鸡大肠杆菌病模型的基础上，对小柴胡汤的有效剂量进行挑选。通过使用4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg剂量的小柴胡汤对模型雏鸡进行治疗。结果表示清楚，各剂量给药组雏鸡临床异常感觉和状态均有不同程度的好转，4g/kg、2g/kg、1g/kg、0.5g/kg剂量组均获得较好疗效，经多方面考量，最终选择1g/kg作为小柴胡汤的临床推荐剂量。为进一步验证小柴胡汤对于鸡大肠杆菌病的治疗作用，进行临床试验，将160只12日龄雏鸡随机分为8组，分别为空白对照组、模型组、小柴胡汤2g/kg组、小柴胡汤1g/kg组、小柴胡汤0.5g/kg组、预防组〔1g/kg〕、同时给药组〔1g/kg〕和西药组。结果显示：小柴胡汤各剂量组对鸡大肠杆菌病的疗效良好，小柴胡汤2g/kg、1g/kg、0.5g/kg组雏鸡存活率可达90%以上，均高于西药治疗组。病鸡生长发育状况良好，小柴胡汤给药组能够显着提高病鸡增重水平，且以预防组增重效果最佳；高剂量的小柴胡汤能够极显着降低生化指标和血清炎性因子分泌；小柴胡汤各给药组均能够抑制由鸡大肠杆菌病引起的各器官指数升高；且与模型组相比，各给药组均能够降低脏器中的细菌载量。最后对小柴胡汤对鸡的安全性进行了评估，在上述试验的基础上，以临床推荐剂量的1倍、5倍、10倍剂量的小柴胡汤对雏鸡进行给药，连续用药7天后，继续观察7天。期间观察各组鸡的临床表现，检测鸡的血液学指标、血液生化指标和病理组织学变化等，对小柴胡汤的安全性进行综合评价。结果显示1倍、5倍、10倍剂量的小柴胡汤没有能引起雏鸡死亡和其它毒性反响，各项血液学指标和血清生化指标未见异常，病理组织学观察各脏器也未见不良影响。表示清楚小柴胡汤在临床上较高的安全性。综上所述，本试验建立了一个稳定的鸡大肠杆菌病模型，通过该模型验证了小柴胡汤能够有效预防和治疗鸡大肠杆菌病，证明小柴胡汤在临床上有较高的安全性。结果表示清楚，小柴胡汤对鸡大肠杆菌病具有明显的临床防治效果和较高的安全性，在防治鸡大肠杆菌病具有良好的应用价值。本文关键词语：鸡大肠杆菌病；小柴胡汤；治疗效果；安全性评价。AbstractChickencolibacillosisisaninfectiousdiseasecausedbyAvianpathogenicEscherichiacoli.Itsclinicalmanifestationsareacutesepticemia,enteritis,ballooninflammation,pericarditis,pericarditisandsoon.Inrecentyears,withthedevelopmentoflarge-scalefarming,theincidenceofthediseasehasincreasedyearbyyear,whichhascausedseriouseconomiclossesinthepoultryindustryallovertheworld.Atpresent,thetreatmentofchickencolibacillosismainlydependsonantibiotics,butwiththeabuseofantibiotics,animalfoodsafetysuchaslivestockandpoultryhasbeengreatlyaffected,anddrugresistanceisalsoincreasing.ModernpharmacologicalstudieshaveprovedthattraditionalChinesemedicineplaysanimportantroleinantibacterialandantiviral,andcaninhibittheproductionofbacterialdrugresistance,whichisofgreatsignificanceforsolvingtheseriousproblemofdrugresistanceofpathogenicEscherichiacoliandeffectivelypreventinginfectiousdiseasesoflivestockandpoultry.XiaochaihuDecoctionwasfirstseenintheTheoryoftyphoidandMiscellaneousDiseaseswrittenbyZhangZhongjing,aphysicianoftheEasternHanDynasty.ItiscomposedofBupleurum,Scutellariabaicalensis,Pinelliaternata,Codonopsispilosula,GingerandJujube.Atpresent,theinhibitoryeffectofXiaochaihuDecoctiononchickencolibacillosishasnotbeenreported.Inviewofthis,thisstudyestablishedastablemodelofchickencolibacillosistoexplorethepreventionandcontroleffectandsafetyofXiaochaihuDecoctiononchickencolibacillosis,soastoprovidedatasupportforthepreventionandcontrolofchickencolibacillosisandthedevelopmentofcompoundtraditionalChinesemedicinewithXiaochaihuDecoction.Themodelofchickencolibacillosiswasestablishedbyinjecting108cfu/mLofbacteriasolution0.4mL,intothechestmuscle,andthemortalityrateofchickensreached60%.At36hoursafterchallenge,thebodytemperatureofchickensdecreasedsignificantly,andthemortalitywasthehighest,anditwasfoundthatthebacterialloadindifferentorgansandthecontentofbacteriainbloodreachedthepeakatthistime,andthebiochemicalindexesASTandALTreachedthepeakat48hoursafterchallenge,whichweresignificantlyhigherthanthoseintheblankgroup.Onthebasisofsuccessfulestablishmentofchickencolibacillosismodel,theeffectivedoseofXiaochaihuDecoctionwasscreened.ThemodelgroupchickensweretreatedwithXiaochaihuDecoctionatthedoseof4g/kg,2g/kg,1g/kg,0.5g/kgand0.25g/kg.Theresultsshowedthattheclinicalsymptomsofchickensineachdosegroupwereimprovedinvaryingdegrees,and4g/kg,2g/kg,1g/kgand0.5g/kggroupsallachievedgoodcurativeeffect.Aftervariousconsiderations,1g/kgwasselectedastherecommendedclinicaldoseofXiaochaihuDecoction.InordertofurtherverifythetherapeuticeffectofXiaochaihuDecoctiononcolibacillosisinchickens,16012-day-oldChickenwererandomlypidedinto8groups:blankcontrolgroup,modelgroup,XiaochaihuDecoction2g/kggroup,XiaochaihuDecoction1g/kggroup,XiaochaihuDecoction0.5g/kggroup,preventiongroup(1g/kg),simultaneousadministrationgroup(1g/kg)andwesternmedicinegroup.TheresultsshowedthateachdoseofXiaochaihuDecoctionhadagoodeffectonchickencolibacillosis.Thesurvivalratesofchicksin2g/kg,1g/kgand0.5g/kggroupswasmorethan90%,whichwashigherthanthoseinwesternmedicinetreatmentgroup.Thegrowthanddevelopmentofchickensisgood,whichcansignificantlyimprovetheweightgainlevelofdiseasedchickens,andtheweightgaineffectofpreventiongroupisthebest;highdoseofXiaochaihuDecoctioncansignificantlyreducebiochemicalindexesandseruminflammatoryfactorsecretion;XiaochaihuDecoctioncaninhibittheincreaseoforganindexcausedbyEscherichiacoli,andcomparedwiththemodelgroup,eachadministrationgroupcanreducethebacterialloadinorgans.Finally,thesafetyofXiaochaihuDecoctiontochickenswasevaluated.Onthebasisoftheaboveexperiments,thechickensweregivenXiaochaihuDecoctionwith1time,5timesand10timesoftherecommendedclinicaldose.aftercontinuousadministrationfor7days,thechickenswereobservedfor7days.Duringthisperiod,theclinicalmanifestationsofeachgroupofchickenswereobserved,andthehematologicalindexes,bloodbiochemicalindexesandhistopathologicalchangesofchickensweredetected,andthesafetyofXiaochaihuDecoctionwascomprehensivelyevaluated.Theresultsshowedthatthe1-,5-and10-folddosesofXiaochaihuDecoctioncouldnotcausechickendeathandothertoxicreactions,andnoabnormalserologicalandserumbiochemicalindexeswerefound,andnoadverseeffectswerefoundinvariousorgansunderhistopathologicalobservation.ItshowsthatXiaochaihuDecoctionissafeinclinic.Tosumup,thisexperimentestablishedastablemodelofchickencolibacillosis,whichverifiedthatXiaochaihuDecoctioncaneffectivelytreatchickencolibacillosis,andprovedthatXiaochaihuDecoctionhashighclinicalsafety.XiaochaihuDecoctionhasobviousclinicalcontroleffectandhighsafetyonchickencolibacillosis,andhasgoodapplicationvalueinthepreventionandtreatmentofchickencolibacillosis.Keywords:Chickencolibacillosis;XiaochaihuDecoction;Therapeuticeffect;Safetyevaluation.。前言鸡大肠杆菌病是当前养鸡业中死亡率高、危害极大的一种疾病，在禽业生产中广泛发生，且该病经常与其他病并发或者继发，故防治较难。尤其近年来，随着规模化、集约化养鸡业的蓬勃发展，鸡大肠杆菌病的发生率持续上升，在世界范围内对养鸡业造成严重的经济损失，成为禽类养殖最主要的疫病之一。应用抗生素仍然是当前治疗鸡大肠杆菌病最有效的措施，但是由于临床生产中的盲目用药和不合理用药：如剂量使用不当，投药途径不当，不注意轮换用药等。使大肠杆菌耐药严重，导致治疗效果降低或者无治疗效果。所以，研发愈加安全有效的药物已成为迫切需求，而中药因其无残留、不易产生耐药性的特点，越来越被人们所接受。小柴胡汤由柴胡、黄芩、半夏、参、生姜、大枣组成，首见于(伤寒论〕，而在(鸡谱〕中也有记载，可用于治疗鸡的疫病，由于当前尚未有当前对小柴胡汤抑制大肠杆菌作用的研究，也没有临床治疗的案例，故在本研究中对小柴胡汤对鸡大肠杆菌病的有效性和安全性进行评价，为开发愈加安全、有效的中药制剂防治鸡大肠杆菌病提供理论根据。文献综述1、鸡大肠杆菌病概述。鸡大肠杆菌病是一种由鸡致病性大肠杆菌局部或全身感染引起的急性或慢性传染病，由于感染鸡的日龄、抵抗力、大肠杆菌的致病性和感染途径不同，导致很多异常感觉和状态和不同病型的产生，是鸡类养殖的常见病和高发病。全球80%鸡大肠杆菌病是由鸡致病性大肠杆菌〔AvianpathogenicEscherichiacoli，APEC〕的流行血清型O1、O2、O18和O78引起的，感染后会造成鸡群死淘率增加，饲料转化率降低，雏鸡生长受阻，发育不良，产蛋鸡无产蛋高峰或产蛋高峰期时间较短等现象，给世界范围内养鸡业造成严重经济损失。1.1、病原研究。大肠杆菌属革兰氏阴性短杆菌，两端钝圆，单个或成双存在，无芽孢，大多数菌株具有鞭毛和菌毛，能运动，通常无可见荚膜，但常有微荚膜。大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并可发酵葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖等产酸产气，在麦康凯琼脂培养基上呈红色菌落[1]。大肠杆菌抗原主要有O、K、H三种根据菌体抗原，能够将大肠杆菌分为若干血清型，根据鞭毛抗原〔H〕和荚膜抗原〔K〕，再将之分为若干亚型[2]，构成了大肠杆菌丰富的血清型。当前为止已确定的大肠杆菌O抗原有173种，K抗原有80种，H抗原有56种，F抗原有17种，并且随着研究的深切进入，这些数字有可能逐年增加[3][4]。大肠杆菌在自然界中广泛存在，也是畜禽肠道的正常栖居菌，很多菌株无致病性，而且对机体有益，能合成B族维生素和维生素K供宿主利用，并对很多病原菌有抑制作用。大肠杆菌中一部分血清型的菌株具有致病性，当鸡体健康、抵抗力强时不致病，而当机体健康状况下降，十分是在应激情况下就表现出致病性，使感染的鸡群发病。1.2、流行病学。当前致病性大肠杆菌的血清型诸多，分为Ol、O2、O35、O78等60余种[5]，不同地区的优势血清型差异较大，且同一地区的流行优势血清型也并不完全一样。贾雪波等[6]研究结果表示清楚，2021年在安徽、山东部分地区分离的大肠杆菌，主要的致病血清型仍然是O1、O2和O78，这与国内外的报道一致；杨立军等[7]在对福建省的150个分离菌株的血清型检测结果表示清楚，大肠杆菌O1、O2和O78不是流行的优势血清型，表示清楚大肠杆菌优势血清型存在地域差异；于学辉等[8]从四川、云南和重庆地区分离出的大肠杆菌优势血清型包括O76、O78、O92和O93。大肠杆菌血清型诸多，但是当前鸡大肠杆菌病疫苗所包含血清型种类却有限，不能到达预期的免疫效果，造成免疫失败[9]。发病鸡和带菌鸡是主要传染源，通过水平传播〔消化道和呼吸道〕和垂直传播〔经卵传播〕，对于不同品种和不同日龄的鸡对本病易感性差异不明显。鸡大肠杆菌病常与鸡的其他呼吸道疾病和支原体疾病互相继发促进，大肠杆菌作为动物肠道内的共生菌，能够通过与其他致病菌发生基因水平转移和基因重组而获得致病力[10]。自20世纪80年代起，鸡大肠杆菌病呈单纯感染，而在90年代后期则转变为混合感染。就当前国内情况看，大