高二生物人教版选修三教师用书2-2-2动物细胞融合与单克隆抗体

2．2.2动物细胞融合与单克隆抗体一、动物细胞融合(eq\a\vs4\al(阅读教材P52))1．概念：两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。2．原理：膜的流动性。3．诱导方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。4．结果：形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。5．意义(1)突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。(2)是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。(3)为制备单克隆抗体开辟了新途径。二、单克隆抗体(eq\a\vs4\al(阅读教材P52～54))1．单克隆抗体的制备及优点(1)杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。(2)制备过程：(3)单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。2．单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于治疗疾病和运载药物。[共研探究]植物体细胞杂交技术，可以跨越植物种属间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。科学家经过长期的探索，也实现了用不同种动物的体细胞进行杂交。参考图示，回答问题。1．动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性。2．与诱导植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合特有的方法是用灭活的病毒处理细胞。3．动物细胞融合的实质是核融合。动物细胞融合完成的标志是两个或多个细胞核融合为一个细胞核。4．杂交细胞的特点：杂交细胞具有两个(或多个)细胞的遗传信息，能表现出两个(或多个)亲本的性状。[总结升华]植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较类型项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的增殖融合前处理先除去细胞壁先使细胞分散开使用的酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶诱导手段物理法：离心、电激、振动；化学法：聚乙二醇等除物理法和化学法外，也可用灭活的病毒诱导过程结果杂种植株杂交细胞应用培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体意义克服了远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合[对点演练]1．自然界中的生殖细胞融合能产生有性后代，细胞工程中体细胞杂交技术被广泛应用于培育杂种植株和生产单克隆抗体等方面。请回答以下相关问题：(1)若a、b分别为动物的精子和卵细胞，则产生a、b的分裂方式是________。(2)若a、b表示植物体细胞，两者融合完成的标志是__________________，由d细胞形成杂种植株的原理是________________，其中使用了植物组织培养技术，该技术的中心环节是形成愈伤组织，然后诱导它再分化形成植株，再分化的原理是________________，植物体细胞杂交的意义是该技术能克服_________________________。(3)生产单克隆抗体时一般不直接培养效应B细胞，主要原因是____________________，若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞器中出现的先后顺序是__________________________________。解析：(1)若a、b分别为动物的精子和卵细胞，动物产生生殖细胞的分裂方式为减数分裂。(2)在植物体细胞杂交过程中，两个植物细胞融合完成的标志是形成新的细胞壁，由杂种细胞形成杂种植株需要进行植物组织培养，该技术的原理是植物细胞的全能性。植物组织培养技术的中心环节是形成愈伤组织，然后诱导它再分化形成植株，再分化的原理是基因选择性表达，植物体细胞杂交的意义是该技术能克服有性(远缘)杂交不亲和的障碍。(3)生产单克隆抗体时一般不直接培养效应B细胞，主要原因是效应B细胞不能无限增殖。由于抗体属于分泌蛋白，分泌蛋白合成与分泌的过程是：核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→内质网“出芽”形成囊泡→高尔基体进行再加工形成成熟的蛋白质→高尔基体“出芽”形成囊泡→细胞膜胞吐释放，因此放射性物质在细胞器中出现的先后顺序是核糖体、内质网、高尔基体。答案：(1)减数分裂(2)形成新的细胞壁植物细胞的全能性基因选择性表达有性(远缘)杂交不亲和的障碍(3)效应B细胞不能无限增殖核糖体、内质网、高尔基体[共研探究]1．传统抗体的制备(1)制备过程：向动物体内注射抗原，使之产生抗体→从动物血清中分离抗体。(2)缺点：产量低、纯度低、特异性差。2．单克隆抗体的制备(2)解决思路：将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为杂交瘤细胞。3．1975年，英国科学家米尔斯坦(C.Milstein)和德国科学家科勒(G.Köhler)设计了一个极富创造性的实验方案，得到了大量的单克隆抗体，制备过程如图所示。根据图示回答下面的问题：(1)为什么要对小鼠注射抗原？提示：以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞(浆细胞)。诱导融合的B淋巴细胞是经免疫产生的，未经免疫的B淋巴细胞不能产生抗体。(2)细胞融合形成的杂交细胞有多种，若仅考虑两两融合的情况，形成的融合细胞有三种，AA型、BB型、AB型。只有AB型才是所需要的杂交细胞。(3)单克隆抗体的制备过程中经过两次筛选①由于B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞有多种，因此第一次筛选的目的是选出杂交瘤细胞，淘汰掉未融合的或同种细胞融合形成的细胞。②由于从小鼠体内提取的B淋巴细胞可能有多种，因此第一次筛选到的杂交瘤细胞可能有多种，通过克隆化培养和抗体检测进行第二次筛选，以选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。[总结升华]植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备类别项目植物体细胞杂交单克隆抗体的制备原理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖融合前处理酶解法(纤维素酶、果胶酶)去除细胞壁注射特定抗原，免疫处理正常小鼠促融方法①物理法：离心、振动、电激等；②化学法：聚乙二醇(PEG)①物理法、化学法：与植物细胞融合相同；②生物法：灭活的病毒意义和用途克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围①制备单克隆抗体；②诊断、治疗、预防疾病[对点演练]2．近年来，我国死于狂犬病的人数有上升趋势。狂犬病病毒的核酸是RNA，机体感染病毒后产生的特异性IgG抗体，能消除狂犬病病毒，这是接触狂犬病病毒后及时注射疫苗和特异性抗体的重要依据。我国利用地鼠的肾细胞培养狂犬病疫苗，已取得良好效果。请根据上述材料，回答下列问题：(1)巴斯德利用固定毒株制成减毒活疫苗，预防狂犬病，制成减毒活疫苗需要用________培养。(2)特异性抗体获取可用单克隆抗体制备。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程技术是______________________。(3)下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：①图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是________细胞，该细胞能够产生________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是________。②图中B过程是细胞融合，该过程需要用____________、聚乙二醇或电激等诱导。③特异性抗体获取的方法也可以采用向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。与这种方法制备的抗体相比，单克隆抗体具有_________________________等优点。(4)动物细胞体外培养需要满足的环境条件有___________________________。(5)单克隆抗体的制备还有哪些用途？_____________________________________________。解析：(1)病毒是营寄生生活的，所以体外培养只能利用活细胞进行。(2)单克隆抗体制备应用的动物细胞工程技术是动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。(3)①图中A过程从小鼠的脾脏中获取的“小鼠细胞”是免疫的B淋巴细胞，该细胞能够产生抗体，是受到相应抗原刺激后才产生的。②诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的促融剂是聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。③单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高，并可大量制备的优点。(4)动物细胞的培养需要在无菌、无毒、温度和pH适宜、充足的O2、营养物质充足的条件下进行。(5)单克隆抗体可作为诊断试剂以及用于治疗疾病和运载药物。答案：(1)活细胞(2)动物细胞融合技术和动物细胞培养技术(3)①免疫的B淋巴抗体抗原(或狂犬病病毒)②灭活的病毒(或仙台病毒)③特异性强、灵敏度高，并可以大量制备(4)无菌、无毒、适宜温度和pH、充足的气体、营养物质(5)作为诊断试剂、运载药物(或“生物导弹”)等1．下列关于动物细胞融合的说法，错误的是()A．动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程B．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞C．常用的诱导动物细胞融合的因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电激、紫外线照射D．细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能解析：选C紫外线照射常用于人工诱变，可诱发基因突变，而不是诱导细胞融合的因素。2．下列有关植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较，正确的是()A．两者应用的原理都是高度分化的细胞具有全能性B．两者都可用聚乙二醇(PEG)诱导细胞融合C．两者成功的标志都是形成融合细胞核D．两者的目的都是用于大量生产分泌蛋白解析：选B植物体细胞杂交的原理是细胞膜具有流动性和植物细胞具有全能性，动物细胞融合的原理是细胞膜具有流动性和细胞增殖；聚乙二醇(PEG)既可诱导动物细胞融合，也可诱导植物原生质体融合；植物原生质体融合完成的标志是杂种细胞再生出细胞壁，动物细胞融合完成的标志是形成融合细胞核；植物体细胞杂交的目的是产生杂种植株，动物细胞融合可用于大量生产分泌蛋白。3．甘草酸是中药甘草中的主要活性成分。为了快速检测甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图。相关叙述正确的是()A．过程①注射相应抗原后应立即从小鼠脾脏中提取细胞甲B．过程②诱导细胞融合，利用了细胞膜的选择透过性C．过程③、④的筛选方法相同，细胞丙、丁遗传物质相同D．过程⑤无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖解析：选D过程①注射相应抗原后，需要机体发生相应免疫反应，使B淋巴细胞增殖分化产生具有免疫能力的B淋巴细胞，才可以从小鼠脾脏中提取细胞甲；过程②诱导细胞融合，利用了细胞膜的流动性；过程③用选择性培养基获得杂交瘤细胞，过程④用抗体检测和克隆化培养得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞；杂种细胞既能够增殖又能产生抗体，过程⑤无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖。4．人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题：(1)制备单克隆抗体常用的动物细胞工程技术有________和________________。(2)在制备单克隆抗体过程中，首先要将纯化的HCG注入小鼠体内，其目的是从产生免疫反应小鼠的脾脏中获得__________。(3)在图中特定选择培养基上，只有________细胞才能生长，培养该细胞除了充足的营养、适宜的温度和pH，还需要有________的环境和适宜的气体环境。(4)选出的杂交瘤细胞的特点是既能________________，又能产生________，经过选择培养的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和______________，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需特异性抗体的细胞。最后将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内，从__________或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体。解析：(2)在制备单克隆抗体过程中，首先要将纯化的HCG注入小鼠体内，其目的是从产生免疫反应小鼠的脾脏中获得B淋巴细胞。(3)在图中特定选择培养基上，只有杂交瘤细胞才能生长，培养该细胞除了充足的营养、适宜的温度和pH，还需要有无菌无毒的环境和适宜的气体环境。(4)选出的杂交瘤细胞的特点是既能无限增殖，又能产生专一的抗体，经过选择培养的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和专一抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需特异性抗体的细胞。最后将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体。答案：(1)动物细胞培养动物细胞融合(两空顺序可颠倒)(2)B淋巴细胞(3)杂交瘤无菌无毒(4)无限增殖专一的抗体(专一抗体)检测细胞培养液[基础题组]1．动物细胞融合主要的用途是()A．克服远缘杂交不亲和B．制备单克隆抗体C．培育新物种D．生产杂交细胞解析：选B植物体细胞杂交技术主要是为了克服远缘杂交不亲和，以培育新物种。另外，动物细胞作为整体，它的全能性受到限制，目前只见到高度分化的细胞核在去核卵母细胞中表现出全能性，还未见到融合细胞表现出全能性的例子，因此动物细胞融合不能用来培育新物种。生产杂交细胞，不是细胞融合的主要目的，杂交细胞只是细胞融合完成后所形成的结构的名称。2．下列关于单克隆抗体制备过程的叙述，正确的是()A．制备过程中不需要动物细胞培养技术B．杂交瘤细胞具有B淋巴细胞与癌细胞的所有特点C．经选择培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可用于单克隆抗体的生产D．单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂解析：选D单克隆抗体的制备是将骨髓瘤细胞与已免疫的B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞，经过选择培养基的筛选并经单一抗体检测后获得所需杂交瘤细胞，培养能产生特定抗体的杂交瘤细胞即可得到单克隆抗体；杂交瘤细胞能无限繁殖但不具有癌细胞的转移能力。3．利用动物细胞融合技术可以获得杂交瘤细胞，下列针对单个杂交瘤细胞的叙述，错误的是()A．需经筛选过程方可获得B．具有双亲细胞的遗传物质C．可分泌多种特异性抗体D．体外培养条件下可大量繁殖解析：选C由单个杂交瘤细胞获得的抗体是单克隆抗体，其抗体只有一种。4．如图是两种生物细胞融合技术的示意图，关于该图的有关叙述，完全正确的一组是()①a过程必须除去细胞膜；b过程需要通过细胞识别②若X是抗体，则甲、乙细胞是肿瘤细胞和经抗原刺激产生的B淋巴细胞③若X是苹果梨幼苗，则c过程是细胞分裂、分化④细胞融合技术的缺点是不能克服远缘不亲和性A．①B．①②C．②③D．②③④解析：选C动物细胞融合不需要去除细胞膜，两个细胞的细胞膜融合可以不需要识别，①错误；若X是抗体，则甲、乙细胞是肿瘤细胞和经抗原刺激产生的B淋巴细胞，二者融合后的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生专一抗体，②正确；若X是苹果梨幼苗，则甲、乙细胞是苹果细胞和梨细胞，c过程是细胞分裂、分化，③正确；细胞融合技术打破了生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍，④错误。5．以下关于动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较，正确的是()①诱导融合的方法完全相同②所用的技术手段不相同③所采用的原理完全相同④都能形成杂种细胞A．①②B．①③C．②④D．③④解析：选C植物体细胞杂交诱导原生质体融合的方法有物理法和化学法，动物细胞融合的诱导方法有物理法、化学法和生物法，①错误；所用的技术手段不相同，植物体细胞杂交还需要采用植物组织培养技术，而动物细胞融合不需要，②正确；所采用的原理不完全相同，植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性，而动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，③错误；两者都能形成杂种细胞，④正确。6．下列是应用动物细胞工程技术获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，其中对单克隆抗体制备的相关叙述，错误的是()①将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞②从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞③利用促细胞融合因子使细胞发生融合④将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔培养⑤筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑥从腹水中提取抗体A．实验顺序应该是①②③⑤④⑥B．④过程中产生的多个杂交瘤细胞也为克隆C．③过程获得的细胞均可无限增殖D．③～⑤的过程中通常要经过两次筛选解析：选C利用促细胞融合因子使细胞发生融合，若只考虑两个细胞发生融合，则有三种情况：两个骨髓瘤细胞融合，两个能产生抗X抗体的B淋巴细胞融合和杂交瘤细胞。两个能产生抗X抗体的B淋巴细胞融合不能无限增殖。7．下列关于单克隆抗体的生产和应用，叙述错误的是()A．对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞B．融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养产生遗传物质改变后才能进行传代培养C．特定的单克隆抗体可制成试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染D．治疗癌症的“生物导弹”原理之一是单克隆抗体能特异性识别癌细胞解析：选B单克隆抗体的制备需对小动物注射特定抗原以获取所需的B淋巴细胞；单克隆抗体制备需要细胞融合并筛选特定的杂交瘤细胞，原代培养和传代培养的区分并不是遗传物质的改变与否，传代培养的细胞遗传物质不一定改变；单克隆抗体可以作为诊断试剂，用于检测人体是否受某种抗原的感染；抗体能识别特定的抗原，治疗癌症的“生物导弹”原理之一是单克隆抗体能特异性识别癌细胞，能把药物带到癌细胞所在部位，杀伤癌细胞，而不损伤健康细胞。8．用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是()A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞B．用氯化钙作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合C．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体D．该杂交瘤细胞株的增殖方式和产物分别是有丝分裂和单克隆抗体解析：选BB淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合需要灭活的病毒、聚乙二醇或物理因素来诱导，氯化钙不能作为诱导剂。[能力题组]9．下列关于细胞工程的叙述，错误的是()A．电激或聚乙二醇均可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合B．去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C．小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可形成杂交瘤细胞D．某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与甲乙两品种有性杂交后代的染色体数目相同解析：选D电激或聚乙二醇均可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合；去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理，前者需要用纤维素酶和果胶酶处理，后者需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理；小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可形成杂交瘤细胞；某种植物甲乙两品种的体细胞杂交后代与甲乙两品种杂交后代的染色体数目不同，前者是后者的两倍。10．制备单克隆抗体的过程示意图如下，下列相关说法错误的是()A．⑥过程为动物细胞培养过程B．②可以利用聚乙二醇诱导促进细胞融合C．④中的筛选是通过抗原—抗体反应进行的D．③既可以无限增殖，也能产生特定抗体解析：选D⑥过程为体外培养杂交瘤细胞过程，为动物细胞培养过程。诱导动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。如果要筛选能产生特定抗体的细胞群，可以通过检测抗原—抗体反应。融合细胞⑤具有双亲的特点，既能无限增殖又能产生单一抗体；③中有多种杂交瘤细胞，不能产生特定抗体。11．用a表示骨髓瘤细胞，b表示浆细胞，则细胞融合过程中前两次筛选的目的分别为()A．a、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→abB．a、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→abC．a、aa、ab、bb、b→ab→产生特定抗体的abD．a、aa、ab、bb、b→aa→能无限增殖的aa解析：选C第一次筛选是选出杂交瘤细胞(即ab)，第二次筛选是选出产生特异性抗体的ab。12．如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图，下列有关叙述正确的是()A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群解析：选D①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应B细胞(浆细胞)；胰蛋白酶常用在动物细胞培养过程中，其作用是使组织分散成单个细胞，图示②中应使用促融剂如聚乙二醇(PEG)；图示③为杂交瘤细胞，其同时具有浆细胞产生抗体的特性和骨髓瘤细胞无限增殖的特性；图示④是经筛选获得的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。13．人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题：(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有______________________________。(2)若要分析杂交瘤细胞中的染色体，可通过__________________等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是____________________，在HAT培养基上存活的细胞可能包括________(填下列序号)。①无抗体分泌的细胞②抗HPV抗体的分泌细胞③其他无关抗体的分泌细胞(3)对于抗体检测呈________性的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液________mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是__________________。(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路。__________________________。解析：(2)利用显微镜观察有丝分裂过程中的染色体，需先制作临时装片；杂交瘤细胞中含有浆细胞和骨髓瘤细胞的染色体，所以比普通淋巴细胞的染色体数目多一倍；在HAT培养基上生存的细胞均为杂交细胞，这些杂交细胞中有分泌HPV抗体的细胞，有分泌其他抗体的细胞，也有不能分泌抗体的细胞。(3)抗体检测呈阳性，说明该杂交瘤细胞可产生所需抗体；为保证每个小孔不多于一个细胞，根据浓度可推断加入细胞稀释液的量：设加入细胞稀释液的最大量是X，则10个/mL×X＝1个，X＝0.1mL。(4)小鼠形成的抗体与人体抗体不同，故在人体内可引起免疫反应，所以上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。(5)根据所给信息可知，还可通过转基因技术或核移植技术获得既能大量增殖，又能产生特定抗体的杂交细胞。答案：(1)动物细胞培养、动物细胞融合(2)解离、漂洗、染色和制片染色体数目加倍①②③(3)阳0.1(4)小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应(5)通过基因工程向浆细胞中导入prG；利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖的细胞中(答对其一即可)14．人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和单克隆抗体制备的流程之一如图所示。请回答下列问题：(1)过程①代表的是________。(2)过程②构建A基因表达载体时，必须使用________和____________________两种工具酶。(3)过程③采用的实验技术是________，获得的X是______________________。(4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的________所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行________比对；或用图中的_________________________________进行特异性结合检测。解析：(1)在中心法则中，对于少数以RNA为遗传物质的病毒，其遗传信息的传递过程需要补充的过程有RNA的逆转录和RNA的复制过程，图中过程①代表的是逆转录。(2)基因工程的步骤是：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测和鉴定，其中构建基因表达载体中需要限制酶来切割以获取目的基因，同时需要相同的限制酶切割载体以获取与目的基因相同的黏性末端，再通过DNA连接酶连接目的基因和载体。(3)过程③是将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的过程，获得的杂交瘤细胞具备骨髓瘤细胞无限增殖和B淋巴细胞产生抗体的特性，从而能制备单克隆抗体。(4)该RNA病毒表面的A蛋白为主要的抗原，故可选用通过基因工程生产的A蛋白制备疫苗；确诊时为判断该病毒是否为题目中的RNA病毒，可以进行核酸序列的比对，也可以利用单克隆抗体具备的特异性，利用抗A蛋白的特异性单克隆抗体与患者体内分离的病毒能否特异性结合判断病毒表面是否有A蛋白的存在，进一步进行检测是否为目的RNA病毒。答案：(1)逆转录(2)限制酶DNA连接酶(3)细胞融合杂交瘤细胞(4)A蛋白核酸(基因)序列抗A蛋白的单克隆抗体15．如图为科研工作者利用小鼠制备H7N9禽流感病毒单克隆抗体的过程，请据图回答有关问题：(1)图中将H7N9病毒的抗原基因导入受体细胞常用的方法是____________。(2)在受体细胞的培养过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的____________________，其培养液与植物组织培养的培养基相比，特有的天然成分是________________。(3)图中X细胞一般选用________，与植物体细胞杂交相比，诱导X细胞和Y细胞融合还可采用__________。(4)单克隆抗体的制备过程需要经过多次筛选，首先用特定的选择培养基筛选出________，最终获得足够数量的________________的细胞，选出符合要求的细胞后，可在体外条件下或注射到____________进行增殖培养。(5)利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者，这种诊断运用了__________杂交技术，这体现了单克隆抗体_______________________________的特性。解析：(1)将抗原基因通过基因表达载体导入动物受体细胞常用的方法是显微注射技术。(2)动物细胞培养过程中，要在培养基中加入抗生素以防止杂菌污染。由于人们对动物细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，同植物组织培养相比，培养液中还需加入动物血清。(3)图中Y细胞是从经过免疫的小鼠体内提取的B淋巴细胞，与之融合的是小鼠的骨髓瘤细胞，可以用灭活的病毒诱导细胞融合。(4)骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合，形成的杂交细胞有多种，通过多次筛选获取能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，获取的杂交瘤细胞在体外培养或注入小鼠腹腔内，最终从细胞培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。(5)用单克隆抗体诊断H7N9病毒，运用的是抗原—抗体杂交技术，该过程体现了单克隆抗体特异性强、灵敏度高的特性。答案：(1)显微注射技术(2)抗生素动物血清(3)骨髓瘤细胞灭活的病毒(4)杂交瘤细胞能分泌所需抗体小鼠腹腔内(5)抗原—抗体特异性强、灵敏度高阶段质量检测(二)细胞工程(时间：60分钟；满分：100分)一、选择题(每小题2.5分，共50分)1．下列植物细胞工程与动物细胞工程中所用技术或方法与原理不相符的是()A．植物组织培养和单克隆抗体的制备——细胞的全能性B．用纤维素酶、果胶酶处理植物细胞壁——酶的专一性C．植物原生质体融合和动物细胞融合——细胞膜的流动性D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞培养——细胞增殖解析：选A植物组织培养依据的原理是细胞的全能性，单克隆抗体的制备依据的原理是细胞膜的流动性和细胞增殖；纤维素酶、果胶酶处理植物细胞壁利用了酶的专一性；植物原生质体融合与动物细胞融合依据的原理是细胞膜的流动性；紫草细胞和杂交瘤细胞的培养原理都是细胞增殖。2．下列关于细胞全能性的叙述，正确的是()A．受精卵的全能性比生殖细胞的全能性小B．动物细胞与植物细胞一样具有全能性，所以才有多利羊的诞生C．细胞的全能性是指已经分化的细胞都具有进一步分化的潜能D．细胞全能性通常在离体的条件下才能表现解析：选D受精卵的全能性比生殖细胞的全能性大；动物细胞的全能性受到限制，多利羊的诞生说明了高度分化的动物细胞的细胞核也具有全能性；细胞的全能性是指已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能；细胞全能性通常在离体的条件下才能表现。3．下列属于动物细胞培养与植物组织培养区别的是()A．动物细胞培养所用的培养基的成分与植物的不同B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C．动物细胞培养过程中可发生基因重组，而植物组织培养不能D．植物组织培养和动物细胞培养都体现了细胞的全能性解析：选A动物细胞培养所用的培养基是液体培养基，其中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等，植物组织培养所用的培养基是固体培养基，其中通常含有蔗糖、氨基酸、无机盐和植物激素等。动物细胞培养与植物组织培养过程中均需要灭菌处理，并且需要在无菌条件下进行。动物细胞培养与植物组织培养过程中均不发生基因重组。植物组织培养的结果是植物体，体现了细胞的全能性；动物细胞培养的结果是细胞或细胞产物，原理是细胞增殖，没有体现细胞的全能性。4．下列有关细胞工程的说法，正确的是()A．植物体细胞融合实际上是不同植物体细胞的细胞核的融合过程B．胡萝卜的愈伤组织继续培养，重新分化成根和芽等器官的过程叫脱分化C．在动物细胞的原代培养过程中，要定期使用胰蛋白酶D．动物细胞融合与植物细胞融合的原理不同解析：选C植物体细胞融合实际上是原生质体的融合；脱分化指已分化的植物细胞重新具备分化能力的过程；动物细胞融合与植物细胞融合的原理相同，操作过程的具体技术不同。5．下列有关细胞工程的叙述，正确的是()A．在植物细胞工程中通常用CaCl2处理植物细胞，以增大细胞壁的通透性B．某一种浆细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后培养，获得特异性强的单克隆抗体，但当相应抗原位于靶细胞内时，该抗体不能与之发生特异性结合C．用以治疗癌症的“生物导弹”就是以单克隆抗体作抗癌药物定向杀死癌细胞的D．用聚乙二醇处理大量混合在一起的两种植物细胞的原生质体，所获得的融合细胞都具有双亲的遗传特性解析：选B植物细胞壁是全透性的，在植物体细胞杂交时可用酶将其除去。抗原与抗体结合具有特异性，而且该过程是在体液中进行的，如果抗原位于靶细胞内，必须将靶细胞破坏，才能实现抗原与抗体的结合。“生物导弹”一般是定向追踪、识别癌细胞，将抗癌药物携带至癌变部位，提高抗癌药物的作用效果；部分抗癌药物可能是单克隆抗体，但不是所有的抗癌药物都是单克隆抗体。用聚乙二醇处理大量混合在一起的两种植物细胞的原生质体，所获得的融合细胞既有同种植物细胞的融合细胞，也有不同种植物细胞的融合细胞，所获得的融合细胞并不都具有双亲的遗传特性。6．生物工程的兴起，标志着人类从探索生命活动的奥秘到按照人们的愿望改造生物的巨大飞跃。下列有关生物工程的叙述，错误的是()A．细菌质粒是基因工程常用的载体B．植物组织培养是植物细胞工程的基础C．动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体D．人工诱变、基因工程等都能对微生物进行定向改造解析：选D人工诱变是不定向的，不能对微生物进行定向改造，产生不定向的变异后要进行人工选择。7．对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列叙述错误的是()A．在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B．动物细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸C．为了防止动物细胞培养过程中的污染，可向培养液中加入适量的抗生素D．在合成培养基中，通常需加入血清、血浆等天然成分解析：选B动物细胞培养一般用液体培养基，添加5%CO2的主要目的是维持培养液的pH，使之适合动物细胞的生存，而非刺激细胞呼吸。8．下列说法正确的是()A．植物组织培养是指离体的植物器官或细胞在无人为干预的情况下经脱分化形成新个体B．动物克隆可通过动物体细胞核移植技术来实现C．人工诱变、细胞工程、基因工程等技术只能应用于对微生物进行改造D．动物细胞融合技术最重要的用途是培养具有双亲优良性状的经济动物解析：选B植物组织培养需要在人工控制条件下进行；基因工程和细胞工程有多种用途；动物细胞融合最重要的用途是制备单克隆抗体。9．紫草素是紫草细胞的代谢产物，可作为生产治疗烫伤药物的原料。研究人员欲用植物组织培养技术通过培养紫草细胞生产紫草素。下列相关操作不合适的是()A．对作为外植体的紫草叶片进行消毒处理既保证其活性也可减轻污染B．培养基中要加入植物激素以保证已分化的植物细胞脱分化形成愈伤组织C．调节植物激素的种类和比例以保证愈伤组织再分化为胚状体D．在培养细胞的过程中要不断通入无菌空气以保证氧气的充足供应解析：选C植物组织培养需要无菌无毒的条件，对作为外植体的紫草叶片进行消毒处理既保证细胞活性也可减轻污染；决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，所以培养基中加入植物激素可以保证已分化的植物细胞脱分化形成愈伤组织；本题植物组织培养的目的是获得细胞代谢产物，而不是完整植株，培养到愈伤组织阶段就可以；植物细胞培养过程需要充足的氧气。10．下列有关单克隆抗体制备及其应用的叙述，错误的是()A．利用生物导弹治疗癌症就是利用单克隆抗体杀死癌细胞B．需要从杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的细胞C．杂交瘤细胞的培养可以通过体内和体外两种途径D．制备单克隆抗体运用的技术有动物细胞融合和动物细胞培养解析：选A利用生物导弹治疗癌症就是利用了单克隆抗体的定位导向作用将药物带到癌细胞所在的位置；制备单克隆抗体过程是先将浆细胞(效应B细胞)和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，接着筛选出能产生抗体的杂交瘤细胞进行体内和体外培养，提取单克隆抗体，则运用的技术有动物细胞融合和动物细胞培养。11．下列有关细胞工程的叙述，正确的是()A．PEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合B．用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂C．骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体D．核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体解析：选DPEG是促细胞融合剂，但是不能直接诱导植物细胞融合，植物细胞需要先去除细胞壁形成原生质体才能融合；制备人工种子，需要用完整植物细胞，借助植物组织培养技术来实现；能产生抗体的是浆细胞，骨髓瘤细胞不能产生抗体；核移植克隆的动物，需要供核一方和供质一方(一般用处于减数第二次分裂中期的卵母细胞的细胞质)，其线粒体DNA来自供卵母体。12．如图所示为白菜—甘蓝的培育流程，下列叙述错误的是()A．过程①用到的酶是纤维素酶和果胶酶B．过程②常用的化学试剂是聚乙二醇C．过程④细胞的全能性提高D．过程⑤细胞的全能性降低，最终失去全能性解析：选D植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以去除细胞壁应用纤维素酶和果胶酶；过程②诱导原生质体融合常用聚乙二醇；杂种细胞是已经分化的细胞，而愈伤组织是未分化的细胞，所以愈伤组织的全能性要高于杂种细胞；无论是分化还是未分化的植物细胞都具有全能性。13.某小鼠生活过程中被多种病原体感染过，科学家却能够以该小鼠为实验材料，通过细胞工程技术获得抗某种病原体的高纯度单克隆抗体，这是因为()A．小鼠体内只有一种抗体B．小鼠体内只有一种B淋巴细胞C．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后只产生一种杂交瘤细胞D．可以通过克隆培养法和抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞解析：选D小鼠生活过程中被多种病原体感染过，说明小鼠体内可以产生多种抗体；每种抗体由相应的浆细胞产生，浆细胞由B淋巴细胞产生，所以小鼠体内有多种B淋巴细胞；多种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞两两融合，产生多种杂交瘤细胞；通过抗体检测筛选出产生特异性抗体的杂交瘤细胞，再进行体外或体内培养，提取大量单克隆抗体。14．下列有关细胞工程的叙述，正确的是()A．再分化过程中有细胞形态、结构的变化，而脱分化过程中没有B．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型不一定相同C．灭活病毒通过溶解磷脂双分子层诱导动物细胞融合D．单克隆抗体制备过程中，一次筛选所得的杂交瘤细胞都能够产生所需的抗体解析：选B离体的、已分化的组织细胞经脱分化形成愈伤组织的过程中，细胞的形态、结构发生了变化。同一株绿色开花植物的生殖细胞和体细胞经培养获得的愈伤组织基因型不相同。灭活病毒是通过改变细胞膜上的蛋白质分子和磷脂分子的排布，使细胞膜打开，诱导细胞融合。单克隆抗体制备过程中，一次筛选所得的杂交瘤细胞不一定都能产生所需抗体，还需二次筛选出能够产生所需抗体的杂交瘤细胞。15．如图表示利用棉花叶肉细胞原生质体培养进行遗传改良的过程，据图分析错误的是()A．①过程需在适宜条件下用纤维素酶和果胶酶的混合物处理B．②过程能定向诱导原生质体产生优良性状的突变C．③过程中叶肉细胞失去了其特有的结构和功能D．④过程需用适宜配比的生长素和细胞分裂素处理解析：选B植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，故可用纤维素酶和果胶酶处理，使细胞壁水解；②过程的原理是基因突变，它不能实现定向诱导。16．某科学家培育出世界上第一只克隆猫，这只小猫毛色花白，看上去完全不像生养它的花斑猫妈妈，也不完全像为它提供细胞核的基因猫妈妈。对该克隆猫毛色的解释合理的是()①发生了基因突变②提供卵母细胞的雌猫细胞质基因进行了表达③表现型是基因型与环境共同作用的结果④代孕花斑猫妈妈的基因进行了表达A．①B．①②③C．②③④D．①②③④解析：选B克隆猫的基因主要来自重组细胞的细胞核提供者，其细胞质基因来自卵母细胞提供者，代孕者不提供遗传物质。生物的表现型也会受到环境的影响，并且在发育过程中也可能发生基因突变等。17．在现代生物科技的应用中，不需要进行检测与筛选的是()A．对植物的离体组织进行培养，大规模培育优良品种B．将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，制备单克隆抗体C．利用植物体细胞杂交技术培育“萝卜—甘蓝”D．将抗虫基因导入植物细胞，培育具有抗虫特性的新植株解析：选A植物组织培养技术不需要进行检测和筛选；利用植物体细胞杂交技术培育“萝卜—甘蓝”时，需筛选出杂种细胞；制备单克隆抗体至少进行两次筛选；用基因工程技术培育抗虫植株需进行检测和筛选。18．如图表示利用高秆抗锈病玉米(基因型为AaBb，两对基因独立遗传)的花粉细胞生产人工种子的过程。下列叙述错误的是()A．通过①过程两两融合得到的细胞基因型有9种B．②过程需要避光处理，③过程需要适宜的光照C．④过程需用秋水仙素处理才能获得可育的人工种子D．人工种子的种皮中加入植物生长调节剂可促进胚状体的发育解析：选C高秆抗锈病玉米的基因型为AaBb，能产生四种配子，即AB、Ab、aB、ab，通过①过程两两融合得到的细胞基因型有9种；②过程脱分化需要避光，③过程再分化需要光照；花粉细胞杂交形成的植株可育，不需要用秋水仙素处理；人工种子的种皮中加入植物生长调节剂可促进胚状体的发育。19．利用细胞工程方法，以H7N9病毒的核衣壳蛋白为抗原制备单克隆抗体，下列相关叙述正确的是()A．用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体B．体外培养单个已免疫的B淋巴细胞可以获得大量抗H7N9病毒的单克隆抗体C．将等量已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞D．利用该单克隆抗体与H7N9病毒的核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出H7N9病毒感染者解析：选D用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，小鼠能产生抗体，但不是单克隆抗体；B淋巴细胞在体外培养条件下不能大量增殖，故不能获得大量抗H7N9病毒的单克隆抗体；将等量已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后，有些细胞并不发生融合，即使发生融合，也未必是B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞；H7N9病毒感染者体内有病毒核衣壳蛋白，用相应的单克隆抗体与之发生特异性结合的方法可加以诊断。20.如图表示植物细胞或动物细胞融合的简略过程，下列有关叙述错误的是()A．在将a和b两种植物细胞进行体细胞杂交前，必须先利用酶解法去除细胞的有关结构B．若该过程是制备人抗某病毒的单克隆抗体的过程，则在培养d细胞的培养液中通常要加入一定量抗生素、血清、血浆等物质C．细胞融合技术与传统的有性杂交相比，其优越性在于能定向地改造生物的性状D．人工诱导动物细胞融合可用灭活的病毒作诱导剂，而植物细胞融合不能解析：选C若是植物体细胞杂交，必须先利用酶解法——纤维素酶和果胶酶去除细胞的细胞壁。若是制备人抗某病毒的单克隆抗体，则a细胞和b细胞分别是人的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，在d细胞的培养液中通常要加入一定量抗生素、血清、血浆等物质。细胞融合技术与传统的有性杂交相比，其优越性在于能克服远缘杂交不亲和的障碍；而基因工程能定向地改造生物的性状。人工诱导动物细胞融合与诱导植物细胞融合的方法基本相同，两者都可利用物理方法和化学方法；此外动物细胞融合还可用灭活的病毒作诱导剂，植物体细胞杂交不能。二、非选择题(除注明外，每空1分，共50分)21．(8分)应用植物组织培养技术，不仅可实现种苗的快速繁殖、培育无病毒植株，也可加快作物及苗木育种。下面是培育柑橘耐盐植株的实验流程：回答下列问题：(1)愈伤组织是由离体的茎段经________过程形成的，此时愈伤组织细胞________(填“具有”或“不具有”)细胞的全能性。(2)对愈伤组织进行了两次处理，处理1中γ射线照射的目的是______________________________________，用γ射线不直接处理茎段而是处理愈伤组织，原因是________________________；处理2中添加的物质X为________。(3)植物组织培养技术也被广泛应用于其他作物的育种中。在培育白菜—甘蓝、三倍体无子西瓜、农杆菌转化法获得抗虫棉中，必需用到植物组织培养技术的是______________________。解析：(1)离体的茎段经过脱分化过程形成愈伤组织，此时愈伤组织具有未分化的特点，其依然具有细胞的全能性。(2)对愈伤组织进行了两次处理，处理1中γ射线照射的目的是诱发基因突变。愈伤组织细胞处于不断的分生状态，易受到培养条件和外界压力的影响而产生突变，因此通常用γ射线处理植物的愈伤组织能获得较好效果。利用该技术最终可培育柑橘耐盐植株，因此处理2中添加的物质X为NaCl，起选择作用，具有能适应一定浓度盐的愈伤组织才可以生长，不适应的愈伤组织死亡。(3)三倍体无子西瓜的培育不需要植物组织培养技术。答案：(8分)(1)脱分化具有(2)诱发基因突变愈伤组织细胞分裂能力强，易诱发基因突变(2分)NaCl(或盐)(3)白菜—甘蓝、抗虫棉(2分)22．(8分)自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。(1)图中过程①②③④是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程________(填序号)。(2)孤雌生殖克隆猪由于缺失________方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，给研究者提供了很好的材料。(3)孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞__________________________，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。(4)体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择__________________期的卵母细胞，并用微型吸管吸出________________________________。解析：(1)由图可知，图中①②③④过程是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，而⑤⑥③④是获得核移植克隆猪的技术流程。(2)孤雌生殖克隆猪没有父方亲本基因。(3)孤雌激活处理的实质是要激活卵母细胞增殖分化，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。(4)核移植时，需要选择去核卵母细胞作为受体细胞，通过显微操作去除卵母细胞中的核，由于减数第二次分裂中期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核和第一极体。答案：(8分)(1)⑤⑥③④(2分)(2)父(3)细胞核的全能性(或增殖分化)(2分)(4)减数第二次分裂中细胞核和第一极体(2分)23．(12分)通过细胞工程技术，利用甲、乙两种植物的各自优势(甲耐盐、乙高产)，培育高产耐盐的杂种植株。请完善下列实验流程并回答问题：(1)A是________________酶，B是________________，D是具有________优良性状的幼芽。D长成的幼苗需要选择的原因是________________________________。(2)由C形成植株的过程利用了________技术，形成愈伤组织需要经过________过程，愈伤组织形成D需要经过________过程。整个培养过程要在________的条件下进行。(3)植物体细胞融合成功的标志是_________________________。目前，植物体细胞杂交还存在许多问题没有解决，如______________，尽管如此，这项新技术在________________等方面取得的重大突破还是震撼人心的。(4)已知甲、乙植物分别为四倍体、二倍体，则“甲—乙植株”属于________倍体植株。解析：(1)由植物细胞变成原生质体，需要去掉细胞壁，植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，因为酶具有专一性，所以应用纤维素酶和果胶酶处理细胞壁。两个原生质体经PEG诱导后融合，再生出细胞壁后成为杂种细胞，利用植物组织培养技术可得到愈伤组织、丛芽结构和试管苗，并非每个细胞都能表达出耐盐性状，需要利用含盐培养基进行筛选。(2)由C形成植株需要利用植物组织培养技术，经过脱分化过程和再分化过程。在题图杂种植株培育的过程中，无菌操作非常重要。(3)植物细胞融合时，核质应该都进行融合，当细胞壁再生时，说明融合后的细胞核与细胞质已经进行正常的新陈代谢了，即融合成功。植物体细胞杂交虽然克服了远缘杂交不亲和的障碍，但让杂合子表达出两种植物的优良性状有时还比较困难。(4)“甲—乙植株”属于异源六倍体。答案：(12分)(1)纤维素酶和果胶融合的原生质体耐盐有耐盐高产和耐盐不高产两种幼苗(2)植物组织培养脱分化再分化无菌(3)再生出新的细胞壁不能按照人的意愿表达两个亲本的性状克服远缘杂交不亲和的障碍(