薄层层析TLC通用显色剂

薄层层析TLC通用显色剂40%硫酸中.薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.(3)碘:检查一般有机物.方法:a层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕b层析谱放碘蒸气中5分钟(或喷5％碘的氯仿溶液)取出置空气中待过量的碘蒸气醋酸(1：1)酸至强碱性.(7)硫酸:检查生物碱及含碘化合物喷洒后处理:观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.r升.可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.(12)三氯化铁:检查酚类及酸.绿色斑点.芳香胺类及还原性物质.喷洒剂:1%铁氰化钾水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.洗去喷洒液.nIII氢氧化铵,即产生橙色至深红色.Pauly胺类及能偶合的杂环化合物.0℃可保存3用前加等体积1%碳酸钠水溶液.一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.(16)对甲苯磺酸:检查甾体,黄酮,鞣质.00℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.*检查黄酮体.醋酸铅:检查黄酮体.喷洒剂:饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液.于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.(19)醋酸镁:检查蒽醌甙,甙元及黄酮体方法:90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.(20)氢氧化钾:检查香豆素,蒽醌甙及甙元喷洒ce荧光.(22)五氯化锑:检查甾体,萜类,皂甙.20℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.光.l显红色或紫色斑点.(28)邻苯二甲基苯胺:检查还原糖.绿,蓝色.最后冰醋酸层全部呈蓝色.(33)茚三酮:检查氨基酸及氨基糖.(或丙酮中).(34)吲哚醌:检查氨基酸和一些肽.升醋酸.于,不同氨基酸出现不同颜色.检查有机酸.喷洒剂:%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.(37)氧化还原显色剂:检查有机酸.喷洒剂:I.%溴甲酚绿及%溴酚蓝的无水乙醇液.I喷酒后处理:稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色.喷洒剂:%的乙醇溶剂.醇中.仿，不溶于乙醚，苯。溶点：207~208℃(不含结晶水)162~163℃(含一个结晶水)77~78℃(含多个结晶水)结晶水可在145~150℃／0。002mmHg下除去，可于许多金属离子如Fe2＋Cu2+Cr3+等生成沉淀，[α]＋℃(乙醇).αβδ三种结晶(溶点分别为76℃87℃84℃)和一种流体即γ型。通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。[α]＋[乙醇]于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。[α](乙醇)二．实验目的与要求(1)通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。(2)掌握沙氏提取器的使用方法。(3)掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱实验方法. (1)渗漉法 (2)浸提法将晾干的树脂放入烧杯中，加14％氨水，搅匀，使温度适宜(树脂充分膨胀，但又无升95％的乙醇回流洗脱4~5小时(或用氯仿回流提取5~8小时)回收溶剂至干，所得滤 酮溶解,放置吸晶,得氧化苦参碱纯品,薄层检识后,干燥,侧溶点. (2)苦参总碱克进行低压柱层析原,不时摇动,得白色结晶,测熔点.样品:苦参碱标准品,氧化苦参碱标准品,苦参碱将已洗去生物碱的树脂,置渗滤筒中,加2倍的2N盐酸浸泡过夜,次日树脂上面的盐酸慢慢流过树脂,用水洗至中性,然后用5%的氢氧化钠浸泡1~2小时,时常搅伴,倾倒出上层碱液,用馏水洗至中性,在空气中晾干,留作下一次使用.树脂法提取分离生物碱的原理.上化铝薄层层析的原理是什么适用于什么成分的分离鉴定层析时应如何操作五.参考文献.7芦丁的提取,分离及鉴定RutinRstinoside泛存在于植物界中，其中以槐米和荞麦叶的 MP190℃(不完全)，214~215℃发泡分解。芦丁溶于热水(1：200)，难溶于冷水 (1：8000)；溶于热乙醇(1：7)，冷乙醇(1：100)；热乙醇(1：30)。冷乙醇 方法1：取槐花米40克(完整)，置于100毫升烧杯中，用冷水快速清洗去泥沙等杂微酸性时,以石灰乳调至PH8,继续加热微沸30分钟,随时补充水份,同时保持PH8,静置稍过滤,滤液浓缩至50毫升,放置过夜,析出结晶,滤去母液继续浓缩一半,放置又析出结晶.合并结得粗芦丁.0毫升，放置，析出结晶，母液再浓缩一半，又析出结晶。合并结晶再用乙醇重结晶抽滤(以滑石粉助滤)；放置过夜析晶(或放冷析晶)。抽滤。得精制芦丁。液升，以检查其中所含单糖)，加50％乙醇(按1克90毫升量)加热回流使皮素粗晶 (2)25％醋酸水溶液(3)85％醋酸水溶液色：(1)可见光下观察，再在紫外灯下观察 (2)经氨气熏后再观察 (3)喷三氯化铝试剂后再观察展开剂：乙醇－水(7：3)取上述滤出皮素时保留的水解滤液200毫升，加Ba(OH)2细粉(约2.ǚ克)中和至PH7,滤除生成的BaSO4沉淀(可用滑石粉助滤),滤液浓缩至1毫升,供纸层析法点样用.对照品：葡萄糖，鼠李糖水溶液继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为过滤,沉淀用热丙酮洗涤数次,合并系,滤展开剂：氯仿－丙酮－醋酸(8：2：)显色剂：三氯化铁试剂： (1)芦丁和皮素用不同展开剂系统展开层将出现什么结果为什么 (2)芦丁和皮素聚酰胺薄层将出现什么结果为什么 (一)原理，根 (二)试剂配制小时后全溶.依照上述方法制备的贮备液可放置6个月。精密称取黄酮样品(皮素)约1.2mg，用无水甲醇溶解，在稀释至100毫升。 1)黄酮光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯(1CM)中，在200~300nm波段内 液6滴，置1分钟后进行测定。测定后，加入3滴盐酸溶液(浓盐酸：水＝1：1)，再进行测 醋酸钠光谱：取样品溶液约3毫升置于石英杯中，加入过量的无水醋酸钠固体， (三)测定结果：皮素加位移试剂结界表()加入试剂编号II峰I峰位移值羟基记录：(1)位移测定结果(2)测定克分子吸收系数皂吸收峰前后20nm波长范围内，依次测定波长和吸收值，用方格纸作图，精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记录检出试剂3.实验方法.变化.具腐蚀性试剂可用空白磁板. (3)展开剂①石油醚5：15) (4)显色剂香草醛－硫酸(压板法)点样展层后，稍干，后扣在一块同样大小并涂布一层(不可多加，多了会使斑点扩散)，使薄层面向上，观察层面向上，观察适合分离薄荷油例二．(1)硅胶CMC—Na薄层(载玻片板) (2)样品四季青提取物 (3)展开剂①石油醚 (1)硅胶CMC-Na薄层板(8＊8cm)，不活化。在薄层板距两边各交点的地方点样 (2)样品氨基酸(精氨酸，脯氨酸，亮氨酸的1％水溶液) (3)展开剂：第I向为正丁醇－醋酸－水(4：1：1)(V/V)第II向为苯酚－水(75：25)(W/W)(苯酚需要蒸后使用) (4)显色剂：％茚三酮乙醇溶剂，喷洒后，以电吹风见加热(110℃)显色，观察各 (1)硝酸银硅胶悬浮浆的制备(％AgNO3制硅胶薄层)：用20克硅胶G和55毫升水中含5g硝酸银(8％)的溶液调制成，阿波常法捕薄层板(4＊7cm，约30块)。避 后，以氯仿－丙酮(8：2)展开。(用点蒸气熏显色，可见其中点加醋酐吡啶试剂的样 ， 原点上，再点加10％碳酸氢钠溶液(另一份不加)，以氯仿－丙酮－甲醇(8：2：1)展层，并用三氯化铁乙醇溶液喷雾显色，可见其中点加碳酸氢钠的样点Rf值已有变蓝色 鉴别天然产物中的糖类,氨基酸等极性化学成分常被采用. 2)样品：％葡萄糖鼠李糖混合溶液 (2)样品：阿胶酸水解液，猪阿胶酸水解液 (4)显色剂：％茚三酮乙醇液所含氨基酸是否一样 (一)蒽醌衍生物的分离＊苯氨－邻苯二甲酸试液为苯氨克和邻苯二甲酸克溶于100毫升正丁醇(用水饱和) (1)缓冲滤纸的制备：取新华滤纸(3*12cm)一张，距下端2cm处划一起始线，向中吸至半使润湿指数为倍)备用。 (2)样品：大黄素(Emodin)大黄素甲醚(Physcion)芦荟大黄素(Aloe-大黄酸(Rhein)的氯仿溶液。 [附]PH缓冲液的配置： (二)叔胺碱的分离： (2)样品：粉防己甲素(Tetrandrine)粉防己乙素(Fangchinoline)，轮环藤酚碱 (3)展开剂：氯仿 (4)显色剂：改良碘化铋钾 强弱。 [附]PH缓冲液的配制：析在中草药化学成分分离上的应用一．常压柱层析：1．四季青中酚性化合物(原儿茶酸，原儿茶醛)的分离 (3)洗脱剂：石油醚／醋酸乙酯(4：6)。(先配50毫升，然后再酌量配)。 (4)收集洗脱剂：用小三角并收集每份10毫升(共收集10份)。 剂剂。当正反应时氨络离子的溶液中的银离子被原儿茶酸的邻二酚烃基还原成金属银呈黑色斑点单体的熔点数作步骤:入中性氧化铝半牛角勺(约)拌匀后再红外灯下干燥，并用刮刀亚成散粒，然后加到柱顶，呈均匀薄层带。将一滤纸片(直径小于层析柱的内径，滤纸片打小孔，平铺在样品层上。首用洗脱剂要保留柱顶)。脱，用小三角瓶收集洗脱液，硅胶板上检查内酯成分出现时开始(用毛细血管滴下的洗脱液点在硅胶的薄层板上，用Kedde试剂检出，加热分别浓缩各馏份至小体积。然后每份点样于硅胶CMC-Na板上，并用对照品(穿心莲a从TLC结果检查样品究竟含有几个穿心莲二萜内酯类化合物记录TLC图谱结果。Emodin橙黄色长针晶(丙酮)大黄酚(Chrysophanol)，金黄色六角形片状结晶(丙酮结晶)或针状结晶(乙醇)溶操作步骤： (3)洗脱剂：石油醚／醋酸乙酯(9：1)，(8：2)，醋酸乙酯，乙醇。 每流份的量。 C (1)粉防己甲素度(较)266度(分解)，其苦味酸盐MP。247度，》》＋度(CHCL3)，碘化二甲 eOH溶于稀酸水溶液。 操作步骤： (3)洗脱剂：氯仿／甲醇(9：1)，(8：2)，(7：3)，(6：4)—————》 (4)检出试剂：碘化铋钾试剂 －氯仿／乙醇(10：1)或(10：)，氨气饱和氯仿／丙酮／甲醇(4：5：1)，氨水液(9)记录：TLC结果，附图谱，检出每组分样品的纯度。三．减压柱层析(VLC)(VacuumLiguidChromatography)骤： (1)VLC柱(15ml量垂熔漏斗) (2)中性氧化铝5克 操作步骤： (3)苯／醋酸乙酯(6：1)展层至柱顶。 TLC的Rf值推算带位置，也可以将一个展带再分成头，中，尾三段。用刀片 。 (6)TLC检查纯度酸性氧化铝板(3~级)苯／醋酸乙酯(6：1)碘蒸气显色下层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大 取直接进样(先启动转子)，使样品在转子内形成窄带。 (4)用石油醚(或环己烷)：醋酸乙酯(25：1)洗脱(可借助于流量计控制)以／ (5)检测条件：TLC：石油醚(30~60度)：醋酸乙酯(9：1)PC：石油醚以水饱的技术进行分离操作步骤：(1)硅胶CMC-Na离心薄层板(1mm厚)、(2)总丹参醌混合物20毫克溶于2毫升氯仿，用注射器进样，使在转子内源形成均匀窄带图。(3)洗脱剂：环己烷／醋酸乙酯(99：1)(98：2)(97：3)。。。。。／min(4)收集：按色带5)检查：TLC硅胶G-CMC-Na板展开剂：石油醚／醋酸乙酯 (9：1)可见光下观察色斑。(6)记录：TLC结果。148度，不溶于水，能溶于热乙醇(在冷乙醇中溶解度较小)，易溶于氯仿苯乙醚溶剂(如甲醇乙醇)，所以可用甲醇，乙醇或水进行分离。巴马汀是有机碱，尽管它TCL展开剂的选择及显色剂的总结选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷<己烷<苯<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在~之间，定量测定在~之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH(：：)混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果；如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。(选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。)分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从柱的流动相极性可也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂(单一剂或混合溶剂)习惯上结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂(如以硅藻土或滑石粉代替硅胶)，则洗脱剂的极性亦须相应降低。样品在加样时可采用干法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。如果极性增大过诀(梯度太大)，就不能获得满意的分离。溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数(ε)来表示。介电常数高，洗脱能力就大。以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附