NEB产品知识和市场培训教材

NEB产品知识和市场培训

2001年8月市场与技术支持部第一部分NEB厂家背景回顾美国总部：Beverly,MA1975~2001支柱产品——工具酶先进的基因克隆和高表达体系的构建技术120种自主开发的酶60多种酶是由NEB首先筛选到并进入商品化生产二十五年的生产历史国际化的生产和营销网络在全世界35个国家和地区有分销商美国、英国、德国、加拿大四个生产基地专业水准的厂商发酵中心——生产部酶制备和DNA重组技术中心——研发部分子生物学和寄生虫学研究中心——基础研究院第二部分NEB产品讲解核酸工具酶DNA限制性内切酶DNA聚合酶、逆转录酶Vent系列的PCR聚合酶DNA/RNA修饰酶单位的定义

在50l反应体系中，1小时内，完全消化1g的DNA所 需要的酶量为1Unit

包装与规格常用酶大多数为10U/l

缓冲液4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液

稀释液

分为A、B、C三种，依表询

储藏条件在不被稀释的情况下，可长期存放在零下20度长达20之久DNA限制性内切酶严格的质量检验：非特异性的内切酶活性检测核酸酶污染检测外切酶污染检测蓝白斑筛选检测DNA限制性内切酶针对于常用在克隆实验中的酶检验过量酶切对DNA末端的完整性是否有破坏NEB自主克隆的酶基因从重组菌株中提纯的酶随酶另附一管BSA酶识别位点被dam或dcm甲基化后不能被切动酶是否耐热经过蓝白斑法检测目录书中出现的标志符号的含义最佳的工具酶反应温度酶所对应的缓冲液编号DNA限制性内切酶Homing核酸内切酶识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶

同裂酶的概念识别同一酶切位点的一组内切酶

BSA的作用酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性DNA限制性内切酶小常识：NEB限制制性内内切酶酶的卖卖点：：种类非非常齐齐全，，（丰丰富的的稀有有酶））稳定性性好，，存放放时间间长价格在在进口口酶类类里适适中质量可可靠DNA限制性内切酶DNA/RNA聚合酶DNA或RNA的探探针标标记3’末末端和和5’’末端端的补补平3’末末端的的碱基基置换换DNA测序序反应应、定定点突突变和和转录录3’末末端突突出的的切平平特性性：：以单链链DNA或或RNA为为模板板，从从5’’端向向3’’端合合成新新链应用用性能指指标：：5’端端向3’端端的外外切活活性3’端端向5’端端的外外切活活性聚合速速度错配率率耐热性性延伸能能力常用的的种类类：E.coliDNAPolymeraseIKlenowFragment（（3’’—5’exo-）T4DNAPolymeraseTerminalTransferaseM-MuLVReverseTranscriptase*M-MuLVReverseTranscriptase（RNaseH-）T7/Sp6RNAPolymeraseDNA/RNA聚合酶NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase主要应应用：：常规规PCR扩扩增双脱氧氧法测测序NEBVent系列聚合酶VentDNAPolymerase与常规规Taq酶酶的错错配率率比较较卖点：：高保真真耐热性性非常常好DNA/RNA修饰酶DNA/RNAModifyingEnzyme连接酶酶………………………………………Ligase激酶……………………………………………Kinase碱性磷磷酸酶酶………………………………PhosphataseBeta琼琼脂糖糖酶……………………………Agarase甲基化化酶……………………………………Methylase核酸酶酶………………………………………Nuclease外切酶酶………………………………………Exonulease内切酶酶………………………………………EndonuleaserecA重重组蛋蛋白酶酶………………………recAProteinDNA/RNA修饰酶重点产产品：：T4DNALigase单位定定义：：20000NEBUnit=300WeissUnit4000NEBUnit=60WeissUnitT4PolynucleotideKinase（（T4PNK））对DNA5’末末端进进行磷磷酸化化，用用于探探针标标记或或克隆隆AlkalinePhosphatase,CalfIntesinal（（CIP）去除DNA5‘和和3’’的磷磷酸基基团，，用于于制备备5‘‘的置置换标标记记和载载体克克隆，，阻止止载体体的自自我连连接。。分子量标准DNA分子量标准常用类类型：：整数数分子子量的的Marker1kbDNALadder2-logDNALadder100bpDNALadderNEW噬菌体体DNA和和质粒粒DNA酶消化化型的的DNA分分子量量标准准非整数数型的的DNA分子量标准DNA分子量标准PGF分分子量量标准准DNA被包包埋在在凝胶胶中，，以注注射器器的形形式包包装用于几几十kb至至上千千kb的DNA分离离时的的Marker脉冲电电泳分分离分子量量种类类：LowRangeMidRangeLambdaLadderYeastChromosomeRNA分分子量量标准准适用于于普通通凝胶胶或变变性胶胶条带为为整数数的分分子量量RNA分子量标准蛋白分子量标准蛋白分分子量量标准准普通型型………………2-212kDa（（精精确））预染型型………………6-175kDa（（估估计））HRP蛋白白Marker检测测包6.5-165kDa（Biotin标记记，BiotinAb）蛋白工具酶蛋白酶酶内切糖糖苷酶酶外切糖糖苷酶酶蛋白激激酶和和抑制制剂蛋白磷磷酸化化酶和和抑制制剂FactorXaProtease探针标记杂交检测NEBlotKit随机引引物法法探针针标记记试剂剂盒下游应应用：：文库筛筛选Southern/Northern原位杂杂交卖点点：：标记的的dNTP参入入率高高模板用用量在在25ng到2ug半小时时即可可完成成标记记反应应可用于于多种种类型型的标标记dNTP（（同位位素或或非同同位素素标记记）NEBlotPhototopeKit随机引引物法法生物素素探针标标记试试剂盒盒用于化化学发发光检检测与Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit配配合使使用生物素素标记记的探探针稳稳定，，可长长时间间存放放杂交后后可洗洗脱下下来，，进行行反复复杂交交Phptotope-StarChemiluminescentDetectionKit卖点点：：灵敏度度同位位素检检测法法相当当曝光时时间短短，只只需10-70分钟钟信号稳稳定，，可通通过改改变曝曝光时时间来来摸索索最佳佳的信信号强强度第三部部分NEB蛋蛋白白表达达产品品介绍绍pMAL蛋蛋白白融合合表达达与纯化化系统统卖点点：生产级级别的的应用用高水平平表达达量－－1升培培养上上清可可达到到100mg的的蛋白白产量量与MBP融融合表表达可可以增增加蛋蛋白的的溶解解性IMPACT蛋蛋白表表达与纯化化系统统卖点点：应用了了蛋白白内含含肽自自我剪剪切技技术无需蛋蛋白酶酶去除除标签签，只只需一一次过过柱纯纯化过过程Intein可可接在在蛋白白的C端或或N端端IMPACT-CNSystemIMPACT-TWINSystem卖点点：应用了了蛋白白内含含肽自自我剪剪切技技术，，将两两个Intein接接在目目的蛋蛋白的的两端端。无需蛋蛋白酶酶去除除标签签，只只需一一次过过柱纯纯化过过程Intein行行使剪剪切功功能后后，可可在目目的蛋蛋白两两端产产生带带S的的氨基基和羧羧基，，可环环化，，可标标记第三部部分NEB英文文目录录附录录的内内容介介绍NEBcutterV1.0内容一一分分子生生物学学数据据库索索引REBASE限限制性性内切切酶数数据库库3100种种限制制性酶酶的相相关信信息酶的基基因序序列、、甲基基化敏敏感位位点、、结构构………5600篇篇参考考文献献InBase内内含肽肽数据据库分子生生物学学数据据库网网址总总汇224个网网址可按功功能领领域分分类查查找内容二二工工具酶酶常用用查询询表以酶识识别序序列分分类的的索引引同裂酶酶索引引限制性性内切切酶的的发展展历史史和知知识背背景NEBuffer的的酶－－活活性性对照照表双酶切切缓冲冲液选选择表表酶－稀稀释液液对照照查询询表限制性性酶在在引物物延伸伸反应应中的的活性性表限制性性核酸酸内切切酶的的热失失活对对照表表酶切反反应酶酶用量量查询询表补平反反应新新酶识识别位位点查查询表表相同粘粘端酶酶查询询表限制性性酶识识别位位点中中甲基基化位位点查查询表表内容三三分分子生生物学学常用用工具具表常用E.coli菌菌株表表型及及基因因型查查询表表常用遗遗传标标记NEB菌株株描述述遗传密密码表表氨基酸酸化学学结构构常用单单位换换算常用载载体上上的酶酶识别别位点点出现现频率率常用载载体的的酶切切图谱谱内容四四分分子子生物物学实实验Protocol琼脂糖糖包埋埋的DNA的限限制性性酶消消化基因组组酶消消化的的选择择指导导甲基化化酶反反应第五部部分NEB销售统统计分分析单位：：万美美金QIAGENClontechNEB分子生生物学学试剂剂产品品销售售比例例统计2000.4~2001.32000.