植物组织培养之培养环境及

第七章

植物組織培養之培養環境及

癒傷組織誘導培養技術一、培養環境（一）溫度一般最適培養之溫度在20-30℃範圍內，過高或過低都會抑制植物細胞及組織之增殖及分化。選擇培養溫度時，要瞭解植物原來的生長環境，培植體的生長最適溫度通常與其在生態環境中之生長最適溫度相同，而25±2℃通常適合大多數植物之培養條件。相同植物之不同部位其培養適溫會有差異，如菸草的花藥在培養前進行48小時（5℃）的低溫處理，會增加其不定胚之比例（Nitsch&Norrel,1972）。相同的培植體培養在不同溫度時，其生長激素的需求也會有所差異。如將菸草細胞培養在26℃的條件下，培養基不須添加Cytokinin，但在16℃時則要添加Cytokinin。原因是在26℃時內生（endogenous）之Cytokinin會被活化，但在16℃時則不會（庄野，1975）。（二）光照光對細胞、組織、器官之生長及分化影響很大，光對培養體的影響包括光週期、光質及光強度。培植體所需之光強度與其生長環境相同，陽性植物需要較高的光強度，陰性植物則需要較低的光強度，其範圍在1500至6000lux之間。癒傷組織之誘導要在無光或弱光的條件下進行，但胡蘿蔔在弱光下的增殖較無光為佳，或先在無光條件下培養，再移至弱光條件下。光週期也很重要，一般長日照植物要較長的照光時間，短日植物則要較長的暗週期。光質不同，培植體之生長及分化也會不同，白光及藍光會促進培植體的綠化和不定芽之分化，而紅光則可促進根的形成。普通的日光燈為最常用的光源。（三）通氣 固態培養時，培養瓶常用之棉花塞及鋁箔紙與外界有流通性，因此不須特別供給氧，但液體培養時，則要用震盪器來增加養的供應量。二、癒傷組織誘導培養技術（一）定義 癒傷組織（callus）原意是指植物在受傷後所形成之癒合組織，而今是指植物的組織或細胞經培養在含有植物生長調節劑之人工培養基，經過脫分化後，所形成的細胞塊，具有分化成植物各種組織及器官的潛能。（二）癒傷組織形成之條件培植體通常需要在含有生長調節劑的培養基上才會形成callus。大部分的材料需添加auxin，少數材料除需添加auxin外，尚需添加cytokinin才能形成callus。一般而言，組織塊上能形成癒傷組織的部分非常有限，例如以莖切片或葉塊做培植體進行培養時，只在切口附近形成callus。添加之auxin不同時，癒傷組織之形成部位會有差異，如使用IAA或NAA時大多只在傷口及其附近形成癒傷組織，然而使用高濃度之2,4-D時，除傷口會形成癒傷組織外，其他的部位也會形成callus。（三）Callus之種類Callus有兩種類型。Type1Callus的質地堅硬，增殖能力及再分化能力弱。Type2Callus的質地柔軟，增殖能力及再分化能力均佳。若培植體本身的營養含量及內生荷爾蒙的種類及濃度不一致或培植體本身已發生突變…時，會產生形狀及性質混雜的癒傷組織，這種現象尤其容易發生在能產生二次代謝產物的植物中。（四）癒傷組織之應用 由於癒傷組織可以連續地移植到新培養基，可無限地增殖下去，因此可以將形態不一致，或突變的癒傷組織的細胞經