高效液相色谱操作步骤演示教学课件

高效液相色谱仪的应用1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、有机磷农药，除草剂，酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。2.精细化工：在精细化工生产中使用的具有较高分子量和较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、酸、酯等化工原料，以及各种表面活性分离与测定。3.食品质量分析：农药残留，兽药残留；防腐剂、抗氧化剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健食品中的功效成分检测，真菌毒素分析等12022/11/28高效液相色谱仪的应用1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品

前后22前后22

高效液相色谱分析仪的型号、外形因生产厂家的不同而有较大的差异。各型号仪器配有相应的数据处理系统。1、溶剂（流动相）真空脱气机2、输液系统（四元泵）3、手动进样器4、柱温箱（色谱柱，固定相）5、检测器6、色谱工作站32022/11/28高效液相色谱分析仪的型号、外形因生产厂家的不同而有较大的差一：流动相的配制1：有机溶剂的过滤（使用0.45um的一次性水系滤膜过滤）2：流动相超声脱气（10~30min）滤膜开关42022/11/28一：流动相的配制1：有机溶剂的过滤（使用0.45um的一次二：样品处理1：样品过滤（过滤装置：一次型注射器;一次性滤头）进入高效液相色谱仪样品液都必须经过样品过滤装置过滤2:把经过称量、定容、超声处理后的样品溶液，用一次性注射器和一次性滤头过滤后，加入2ml具塞试管中备用。一次性滤头：由机系、水系组成；

滤膜的孔径为0.45um52022/11/28二：样品处理1：样品过滤（过滤装置：一次型注射器;一次性滤头三：色谱柱的连接将色谱柱按流动相流动方向即色谱柱标示箭头方向安装在仪器上拧紧色谱柱的接口色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。62022/11/28三：色谱柱的连接将色谱柱按流动相流动方向即色谱柱标示箭头方向四：放置流动相1：将储存流动相的贮液瓶放置于贮液瓶架上2：更换仪器泵头里清洗瓶中的超纯水（以确保仪器外回路系统清洁和良好的工作状态）清洗瓶72022/11/28四：放置流动相1：将储存流动相的贮液瓶放置于贮液瓶架上2：更依次打开：

稳压器柱温箱高压泵检测器计算机电源开关五：开机82022/11/28依次打开：五：开机82022/11/27排气六：系统排气1：拧松泵右侧的快速排气阀（两圈即可）3：进入色谱工作站，待仪器自检完成后进行进样系统的清洗快速排气阀4：用一次性平头微量注射器吸入1~2ml的样品溶液，注入手动进样阀的进样口2：按下泵前面的“排气”键排气5min后拧紧快速排气阀色谱工作站一次性平头微量注射器92022/11/28排气六：系统排气1：拧松泵右侧的快速排气阀（两圈即可）3：进作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min

如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例，冲洗流路约20min；

如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流路约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶液等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。

具体问题具体分析！七：冲洗流路（进样前的系统准备）102022/11/28作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。七：冲洗八：设定分析方法1：设置程序文件（流动相通道、流速、比例、检测器检测波长、分析时间、最高压力、最低压力）2：设定分析方法的方法文件（文件名称，表示浓度的单位）3：设定样品分析表（标准名称、测定次数、样品名称、编号）4：待进样环境平衡后，打开检测器的氘灯，检测器开始自检和教正，进行基线检测，待基线平稳后进样分析。打开检测器的氘灯简而言之：软件的各种设置；繁杂但不复杂112022/11/28八：设定分析方法1：设置程序文件（流动相通道、流速、比例、检九：进样分析1：启动设置程序文件、设定分析方法的方法文件、设定样品分析表按照样品分析表的顺序，用平头微量注射器将经过0.45um滤膜过滤的标准溶液和样品溶液逐次注入六通进样阀中，2：顺时针旋转六通阀，仪器开始进行分析顺时针旋转122022/11/28九：进样分析1：启动设置程序文件、设定分析方法的方法文件、设1：根据样品的出峰时间定性2：根据样品的峰面定量（在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰高成正比。）十：数据处理色谱图示例132022/11/281：根据样品的出峰时间定性十：数据处理色谱图示例1320221：冲洗流路和色谱柱

a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。

b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其次用50%甲醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。2：冲洗进样系统

a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳到头，用一次性平头微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇，注入手动阀的进样口。

b:每次样品测定完后，一定要用50%甲醇清洗；若样品水系，则先用超纯水清洗，再用50%甲醇清洗。十一：仪器工作完成后的必要维护142022/11/281：冲洗流路和色谱柱十一：仪器工作完成后的必要维护14202依次关闭检测器的氘灯将高压泵的流速降为“0”关闭检测器开关关闭高压泵开关关闭仪器色谱工作站关闭检测器电源开关关闭高压泵电源开关关闭柱温箱电源开关关闭电脑开关关闭稳压电源开关并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及使用情况结束操作，整理实验台十二：关机152022/11/28依次关闭检测器的氘灯十二：关机152022/11/27流动相

：

1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；

2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；操作过程中应注意的事项162022/11/28流动相：

1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸色谱柱：

1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；

2、使用符合要求的流动相；

3、使用保护柱；

4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。

5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；

6、不要高压冲洗柱子；

7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；172022/11/28色谱柱：

1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范样品：

1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；

2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；

3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；182022/11/28样品：

1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体That’sall!Thankyou!

192022/11/28That’sall!Thankyou!192高效液相色谱仪的应用1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环芳烃、多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、有机磷农药，除草剂，酚类胺类、黄曲霉毒素等污染物的分离与测定。2.精细化工：在精细化工生产中使用的具有较高分子量和较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香族的醇、剂、药物、农药、燃料、炸药等工业产品的醛、酮、醚、酸、酯等化工原料，以及各种表面活性分离与测定。3.食品质量分析：农药残留，兽药残留；防腐剂、抗氧化剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健食品中的功效成分检测，真菌毒素分析等202022/11/28高效液相色谱仪的应用1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品

前后212前后22

高效液相色谱分析仪的型号、外形因生产厂家的不同而有较大的差异。各型号仪器配有相应的数据处理系统。1、溶剂（流动相）真空脱气机2、输液系统（四元泵）3、手动进样器4、柱温箱（色谱柱，固定相）5、检测器6、色谱工作站222022/11/28高效液相色谱分析仪的型号、外形因生产厂家的不同而有较大的差一：流动相的配制1：有机溶剂的过滤（使用0.45um的一次性水系滤膜过滤）2：流动相超声脱气（10~30min）滤膜开关232022/11/28一：流动相的配制1：有机溶剂的过滤（使用0.45um的一次二：样品处理1：样品过滤（过滤装置：一次型注射器;一次性滤头）进入高效液相色谱仪样品液都必须经过样品过滤装置过滤2:把经过称量、定容、超声处理后的样品溶液，用一次性注射器和一次性滤头过滤后，加入2ml具塞试管中备用。一次性滤头：由机系、水系组成；

滤膜的孔径为0.45um242022/11/28二：样品处理1：样品过滤（过滤装置：一次型注射器;一次性滤头三：色谱柱的连接将色谱柱按流动相流动方向即色谱柱标示箭头方向安装在仪器上拧紧色谱柱的接口色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。252022/11/28三：色谱柱的连接将色谱柱按流动相流动方向即色谱柱标示箭头方向四：放置流动相1：将储存流动相的贮液瓶放置于贮液瓶架上2：更换仪器泵头里清洗瓶中的超纯水（以确保仪器外回路系统清洁和良好的工作状态）清洗瓶262022/11/28四：放置流动相1：将储存流动相的贮液瓶放置于贮液瓶架上2：更依次打开：

稳压器柱温箱高压泵检测器计算机电源开关五：开机272022/11/28依次打开：五：开机82022/11/27排气六：系统排气1：拧松泵右侧的快速排气阀（两圈即可）3：进入色谱工作站，待仪器自检完成后进行进样系统的清洗快速排气阀4：用一次性平头微量注射器吸入1~2ml的样品溶液，注入手动进样阀的进样口2：按下泵前面的“排气”键排气5min后拧紧快速排气阀色谱工作站一次性平头微量注射器282022/11/28排气六：系统排气1：拧松泵右侧的快速排气阀（两圈即可）3：进作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。步骤：分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路20min~30min

如果流动相为有机相和纯水相的混合液，在用甲醇或乙腈冲洗流路后，按照分析样本的需要调节比例阀的比例，冲洗流路约20min；

如果流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质，则应该用与分析样品流动相中缓冲盐溶液或有机酸、无机酸、其他电解质与有机相相同比例的水加有机相冲洗流路约20min以上，再按照分析样品的需要调节有机相与缓冲溶液等的比例冲洗流路约20min，平衡进样环境。简而言之：根据流动相的不同选择不同的溶液冲洗流路。

具体问题具体分析！七：冲洗流路（进样前的系统准备）292022/11/28作用：平衡活化色谱柱并清除管路中的杂质和残留的水分。七：冲洗八：设定分析方法1：设置程序文件（流动相通道、流速、比例、检测器检测波长、分析时间、最高压力、最低压力）2：设定分析方法的方法文件（文件名称，表示浓度的单位）3：设定样品分析表（标准名称、测定次数、样品名称、编号）4：待进样环境平衡后，打开检测器的氘灯，检测器开始自检和教正，进行基线检测，待基线平稳后进样分析。打开检测器的氘灯简而言之：软件的各种设置；繁杂但不复杂302022/11/28八：设定分析方法1：设置程序文件（流动相通道、流速、比例、检九：进样分析1：启动设置程序文件、设定分析方法的方法文件、设定样品分析表按照样品分析表的顺序，用平头微量注射器将经过0.45um滤膜过滤的标准溶液和样品溶液逐次注入六通进样阀中，2：顺时针旋转六通阀，仪器开始进行分析顺时针旋转312022/11/28九：进样分析1：启动设置程序文件、设定分析方法的方法文件、设1：根据样品的出峰时间定性2：根据样品的峰面定量（在一定的色谱操作条件下，流入检测器的待测组分的含量、质量或浓度与检测器的响应信号：峰面积或峰高成正比。）十：数据处理色谱图示例322022/11/281：根据样品的出峰时间定性十：数据处理色谱图示例1320221：冲洗流路和色谱柱

a:若流动相为有机相和超纯水的混合溶剂，则直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。

b:若流动相含有缓冲盐溶液、有机酸、无机酸或其他电解质溶，则先用5%甲醇冲洗流路30~60min，其次用50%甲醇溶液冲洗流路约30min，再用甲醇或乙腈冲洗流路约30min，待基线无杂质峰出现走平稳后可停泵关机。2：冲洗进样系统

a:清洗手动进样阀，将手动进样阀的扳手逆时针扳到头，用一次性平头微量注射器吸入2~4ml的50%甲醇，注入手动阀的进样口。

b:每次样品测定完后，一定要用50%甲醇清洗；若样品水系，则先用超纯水清洗，再用50%甲醇清洗。十一：仪器工作完成后的必要维护332022/11/281：冲洗流路和色谱柱十一：仪器工作完成后的必要维护14202依次关闭检测器的氘灯将高压泵的流速降为“0”关闭检测器开关关闭高压泵开关关闭仪器色谱工作站关闭检测器电源开关关闭高压泵电源开关关闭柱温箱电源开关关闭电脑开关关闭稳压电源开关并在仪器使用登记本上记录环境温度、湿度、仪器工作状态及使用情况结束操作，