Gao 第07章-苯乙胺类拟肾上腺素课件

第七

章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析2022/11/28第一节结构与性质分子结构中具有苯乙胺基本结构2022/11/28苯乙胺类药物的基本结构*2022/11/28盐酸克仑特罗硫酸沙丁胺醇2022/11/282022/11/282022/11/28化学性质酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色。弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水光学活性：手性碳原子，具有旋光性。苯环取代基特性：根据苯环取代基的电负性，最大吸收波长以254nm为中心红移或者蓝移；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。如盐酸克伦特罗、盐酸氨溴索--芳伯氨基2022/11/28二、与甲醛－硫酸反应具有酚羟基取代的本类药物，可与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。肾上腺素显红色，盐酸异丙肾上腺素显棕色至暗紫色，重酒石酸去甲肾上腺素显淡红色，盐酸去氧肾上腺素为显玫瑰红→橙红→深棕红的变化2022/11/28三、还原反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）肾上腺素碘或过氧化氢中性或酸性肾上腺素红放置棕红色多聚体盐酸异丙肾上腺素偏酸性条件碘异丙肾上腺素红硫代硫酸钠淡红色溶液重酒石酸去甲肾上腺素酒石酸氢钾饱和液pH3.56碘试液放置5min硫代硫酸钠溶液为无色或仅显微红色或淡紫色肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素明显的深红棕色或紫色2022/11/28盐酸去氧肾上腺素的鉴别：乙醚层不显色，可与盐酸麻黄碱区别2022/11/28五、脂肪伯胺的Rimini试验与亚硝基铁氰化钠反应

重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基2022/11/285mg重酒石酸间羟胺0.5ml水溶解亚硝基铁氰化钠试液2d丙酮2d，碳酸氢钠0.2g△红紫色脂肪伯氨基的专属反应丙酮不含有甲醛60℃，1min2022/11/28六、紫外光谱特征吸收红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。2022/11/28第三节特殊杂质检查

一、酮体检查 生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。 例如：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸甲氧明等苯2022/11/28310酮体样品利用酮体在紫外310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收，测定一定浓度下样品溶液在310nm处的吸收度来控制酮体的限量。2022/11/28二、光学纯度检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子通过比旋度测定控制药物的质量2022/11/28三、有关物质检查 例：盐酸去氧肾上腺素检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。2022/11/28第四节含量测定

原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法2022/11/28一、非水溶液滴定法

非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某些有机弱酸的含量。酸性溶剂：冰醋酸碱性溶剂：DMF两性溶剂：甲醇惰性溶剂：氯仿，甲苯，丙酮2022/11/28（一）基本原理 冰醋酸为溶剂 醋酸汞消除氢卤酸的干扰 指示剂（终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定结果用空白试验校正） 若碱性较弱则加醋酐使突跃明显2022/11/28例：重酒石酸去甲肾上腺素－－直接滴定盐酸克伦特罗－－加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。2022/11/28二、溴量法盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺反应摩尔比为1∶6

2022/11/28三、亚硝酸钠法

盐酸克仑特罗分子结构中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法取本品约0.25g，精密称定，置100ml烧杯中，加盐酸溶液(1→2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.05mol/L)相当于15.68mg的C12H18Cl2N2OHCl

2022/11/28四、紫外分光光度法&比色法盐酸甲氧明注射液含量测定：精密量取本品适量(约相当于盐酸甲氧明100mg)，置250ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在290nm的波长处测定吸光度，按C11H17NO3HCl的吸收系数()为137计算，即得2022/11/28紫外分光光度法&比色法—重氮化-偶合显色或与亚铁离子络合显色 以盐酸克伦特罗为例，测定原理如下：注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。2022/11/28例：盐酸克伦特罗栓（Chp2005） 【含量测定】对照品溶液的制备精密称取盐酸克仑特罗对照品适量，加盐酸溶液(9→100)制成每1ml中含7.2μg的溶液。

供试品溶液的制备取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液(9→100)振摇提取3次(20ml、15ml、10ml)，分取酸提取液，置50ml量瓶中，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。

2022/11/28测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml，分置25ml量瓶中，各加盐酸溶液(9→100)5ml与0.1％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置3分钟，各加0.5％氨基磺酸铵溶液1ml，混匀，时时振摇10分钟，再各加0.1％盐酸萘乙二胺溶液1ml,混匀，放置10分钟，用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录ⅣB），在500nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。2022/11/28五、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性－可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液－甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm2022/11/28测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀释至刻度，摇匀，取2μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。2022/11/28第五节体内药物分析)动物组织中的盐酸克伦特罗残留的测定—瘦肉精1.提取称取动物肝脏组织样品5g0.05g于带盖的聚四氟乙烯离心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸钠溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度匀质60秒，盖上盖子以5000r/min的速度离心2分钟，吸取上层有机溶剂于离心管中，在残渣中再加入乙酸乙酯10ml，在涡旋混合器上混合1分钟，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。2022/11/28在收集的有机溶剂中加入0.10mol/L的盐酸溶液5ml，涡旋混合30秒，以5000r/min的速度离心2分钟，吸取下层水溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至5.2。2022/11/282.净化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L盐酸5ml活化，然后将上述萃取液上样至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脱，收集洗脱液。

2022/11/283.测定

(1)衍生化：在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入甲苯100l和BSTFA(双三甲基硅烷三氟乙酰胺)100l，试管加盖后于涡旋混合器上振荡30秒，在80℃的烘箱中加热衍生1小时(盖住盖子)；同时吸取标准工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮气吹干后同样品操作，待衍生结束后加入甲苯0.3ml转入进样小瓶中，进行气相色谱-质谱(GC/MS)分析。2022/11/28(2)GC/MS测定参数：色谱柱HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm(内径)，0.25m(膜厚)；进样口温度220℃；进样方式不分流；进样体积1l；柱温70℃(保持0.6分钟)，以25℃/min升温至200℃(保持6分钟)，以25℃/min升温至280℃(保持5分钟)；载气氦气；流速0.9ml/min(恒流)；GC/MS传输线温度280℃；溶剂延迟8分钟；EM电压高于调谐电压200V；离子源(EI)温度200℃；四极杆温度160℃；选择离子监测(m/z)86、212、262、277。2022/11/284.定性定量方法(1)定性：样品峰与标样的保留时间之差不多于2秒，并人工比较选择离子的丰度，其中试样峰的选择离子相对强度(与基峰的比例)不超过标准相应选择离子相对强度平均值的20％(m/z262)和50％(m/z212、277)。(2)定量方法：选择试样峰(m/z86)的峰面积进行单点或多点校准定量。当单点校准定量时根据样品液中盐酸克仑