绿茶对S荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响课件

1、对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响 绿茶对S180荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响 绿茶绿茶是历史上最早的茶类,也是我国茶量最大的茶类,在国际市场上,我国绿茶占国际贸易量的70%以上,销量遍及北非、西非各国及法、美、阿富汗等 50多个国家和地区。绿茶是历史上最早的茶类,也是我国茶量最大的茶类,在国际市场 联合国卫生组织颁布的“世界六大种保健饮品”依次是：第一绿茶、第二红葡萄酒、第三豆浆、第四酸奶、第五蘑菇汤、第六骨头汤。绿茶为六大保健饮品之首，被誉为“世界第一大种保健饮品”。绿茶有益健康是自古以来人们普遍认同的一种养生之道1随着生活水平的提高,人们越来越注重生活质量,具有养生作用的绿茶

2、也越来越受欢迎。 联合国卫生组织颁布的“世界六大种保健饮品”依次是：第一绿 近年来，恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，并且国内外对肿瘤的治疗及愈后较差，其原因可能是患者的免疫功能显著下降2。很多资料建议在治疗期间饮用绿茶来增强机体抵抗力，临床上应用绿茶多酚化合物以防癌的优点有：也经大量动物实验证明其有效性：无严重之副作用等3，本组对此很感兴趣，本研究旨在某点验证绿茶增强机体免疫力防癌的机制。 近年来，恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，并且国内外对肿瘤的1 材料与方法1.1主要试剂 绿茶，刀豆蛋白A（ConA），环磷酰胺。1.2瘤源和细胞株 S180细胞和TAC-1细胞，P815细胞和CTLL-2细胞。

3、1 材料与方法 1.3实验动物分组 将昆明小鼠随机分为6组，即正常盐水对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺对照组和三个绿茶实验组，每组10只小鼠，后五组小鼠于右腋皮下接种S180细胞（每只2106）。每日3个实验组开始经腹腔注射绿茶溶液，剂量分别为10,30,50mg/kg，荷瘤对照组注射等量生理盐水0.2ml，环磷酰胺对照组注射环磷酰20mg/kg 。每日1次，连续14天后处死小鼠取实体瘤称重，同时取脾细胞测定增值反应，IL-2生长能力，NK细胞活性。 1.3实验动物分组1.4试验方法1.4.1测肿瘤抑制率 停药后处死小鼠，剥离完整肿瘤组织，电子天平称量瘤体湿重（精确到0.001）并计算肿瘤生长抑制

4、率。 抑制率（）=（荷瘤对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/荷瘤对照组平均瘤重100。 注意：肿瘤组动物平均质量1表示肿瘤生长不良，实验组小鼠死亡率超过20表示药物所致毒性。1.4试验方法1.4.2小鼠脾细胞悬液的制备 将小鼠处死，取脾脏，研磨，沙网过滤(200目)，加入红细胞裂解液裂解3分钟，1500r/min离心8分钟，取出淋巴细胞，生理盐水冲洗2次，800r/min离心10分钟,RP-MI1640 培养液调细胞浓度为5106 ml-1，37，5% CO2饱和湿度培养，备用。1.4.2小鼠脾细胞悬液的制备 1.4.3 ConA诱导的脾细胞增值反应 采用常规H-TdR掺入法。将制备的小鼠脾细胞

5、悬液用RP-MI1640培养液制成2107ml-1细胞悬液，每孔1ml分装到24孔培养板中，每孔加入ConA3g于CO2培养箱37孵育56小时后，加入3H-TdR达到终浓度37KBq/ml后继续置CO2培养箱37孵育16小时后，将各孔细胞收集到玻璃纤维纸上，置于FJ-2100型液体闪烁计数器测定并计算dpm值。 1.4.3 ConA诱导的脾细胞增值反应 1.4.4 IL-2的诱生和活性测定 将制备的小鼠脾细胞悬液用含10%小牛血清的RP-MI1640培养液调整浓度为5106ml-1，接种于24孔培养板，每孔500ml，每孔再加入终浓度5g/ml的ConA，500g/孔，37 5%CO2培养箱没

6、培养24小时后离心取上清，备用。取传代培养48小时的CTLL-2细胞，用培养液离心洗涤2次，每次1000r/min离心5分钟，再用含10%小牛血清的RP-MI1640培养液调整浓度为1106ml-1，接种于96孔培养板100l /孔，同时将待测样品也加入培养板100l /孔，置于CO2培养箱37孵育56小时后，加入3H-TdR达到终浓度37KBq/ml后继续置CO2培养箱37孵育16小时后，将各孔细胞收集到玻璃纤维纸上，置于FJ-2100型液体闪烁计数器测定并计算dpm值。 1.4.4 IL-2的诱生和活性测定1.4.5 NK细胞活性测定 将制备的小鼠脾细胞悬液用含10%小牛血清的RP-MI1

7、640培养液调整浓度为5106ml-1于96孔培养板，每孔中分别加入100g脾细胞悬液和YAC-1细胞，靶细胞（YAC-1细胞，浓度1105个/ml，效靶比值50:11，设靶细胞自然释放组和最大释放对照组（YAC-1细胞100g+1%NP-40 100g）。每样本是3个重复孔，培养16小时后，吸出各孔上清100g加入另一细胞培养板中置于37培养箱中培养10分钟，每孔加入新鲜配制的底物液100l室温，避光反应1015分钟，再加入柠檬终止液30l酶标分析仪570nm波长处测定A值。按一下公式计算NK细胞杀伤靶细胞活性。 NK细胞活性（%）=（实验组A-自然释放组A）/(最大释放组A-自然释放组A)

8、 100%。 1.4.5 NK细胞活性测定2 结果预测2 结果预测2.1 绿茶对S180肉瘤抑制作用 不同剂量的绿茶对荷瘤小鼠的肿瘤具有明显的抑制作用，与荷瘤对照组、环磷酰胺比较有显著的差异。 2.2 绿茶对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖和IL-2产生能力的影响 荷瘤对照组小鼠脾细胞增值能力和IL-2产生能力均较正常对照组小鼠明显下降，不同剂量绿茶治疗组小鼠淋巴细胞增值和IL-2水平均显著高于荷瘤对照组，且呈剂量依赖性。 2.3 绿茶对荷瘤小鼠脾NK细胞活性的影响 荷瘤对照组脾NK细胞活性显著低于正常对照组，体内注释绿茶组小鼠的NK细胞活性明显高于荷瘤对照组，且能达到正常对照组水平。 绿茶对S荷瘤小鼠

9、肿瘤生长及免疫功能的影响课件3 讨论分析3 讨论分析 绿茶是众所周知的健康饮品,它具有多种治疗和保健功效,越来越受人们的欢迎。茶多酚(GTP)是从绿茶中提取的主要活性成分,占茶叶干重的 30% ,包括黄烷醇类、黄烷双醇、黄酮类和酚酸4。目前,国内外学者对茶多酚进行了大量的研究,表明茶多酚具有增强机体抵抗力，诱导动物免疫系统的多种细胞因子,促进干扰素、白细胞介素等的合成,具有清除体内自由基、抗脂质过氧化作用,能激活巨噬细胞(M )、自然杀伤(NK)细胞和B、T 淋巴细胞，激活补体系统，提高抗体水平5。 本实验通过用环磷酰胺作用阳性对照组，来分析绿茶的抗瘤效果。环磷酰胺是临床常用的化疗药物，其能有

10、效地杀伤癌细胞，但与此同时也对人体产生不同程度的毒副作用，其中主要有骨髓抑制、免疫功能低下和白细胞减少症。本实验即使之与荷瘤对照组进行比较易于分析。 本实验通过用环磷酰胺作用阳性对照组，来分析绿茶的抗瘤 IL-2是由活化的Th细胞分泌的一种细胞增殖因子，具有多种生物学活性，如能够促进T细胞、B细胞增殖分化和刺激NK细胞的生长，激活巨噬细胞，促进CTL功能，在集体的免疫应答和调节中起到重要的作用。另有研究表明，IL-2能促进外周血单核细胞产生TNF，从而增强抗肿瘤的作用6。由于IL-2的含量与细胞免疫功能密切相关，因此可将IL-2产生作为细胞免疫应答的主要指标。 IL-2是由活化的Th细胞分泌的

11、一种细胞增殖因子，具 NK细胞不需预先致敏即能分泌细胞毒性因子杀伤肿瘤细胞，抗瘤谱广，无肿瘤特异性和MHC限制性，也能释放IFN-、IL-1、IL-2等细胞因子来发挥天然防疫系统。有研究表明，随着NK细胞活性的降低，肿瘤发生率增加7。因此提高机体NK细胞活性，对于肿瘤的预防和预测都有重要的价值。 NK细胞不需预先致敏即能分泌细胞毒性因子杀伤肿瘤细【参考文献】1赵春颂. 绿茶的营养保健功能J. 营养, 2003, 17(2): 17.2艾今霞，刘良.艾迪针剂对和瘤小鼠免疫功能的影响J.中国免疫学杂志，2010,26（3）：224227.3山根哲郎.绿茶儿茶素的药理作用及其临床应用J.日本医学介绍,2001,22(3):100101.4雷蕾.绿茶药理研究进展J.海峡药学,2007,19(6):1517.5李振, 陈现伟. 茶多酚的免