全国流感-禽流感监测方案

1、PAGE PAGE 1全国流感/人禽流感监测实施方案（20052010年度）征求意见稿第一部分 正 文 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc112156713 一、背景 PAGEREF _Toc112156713 h 2 HYPERLINK l _Toc112156714 二、监测目的 PAGEREF _Toc112156714 h 3 HYPERLINK l _Toc112156715 三、监测病例定义和诊断标准 PAGEREF _Toc112156715 h 4 HYPERLINK l _Toc112156716 四、全国流感/人禽流感监测网络 PAGEREF

2、_Toc112156716 h 4 HYPERLINK l _Toc112156717 五、法定传染病疫情报告 PAGEREF _Toc112156717 h 5 HYPERLINK l _Toc112156718 六、流感样病例监测 PAGEREF _Toc112156718 h 5 HYPERLINK l _Toc112156719 七、流感暴发疫情监测 PAGEREF _Toc112156719 h 12 HYPERLINK l _Toc112156720 八、人禽流感监测 PAGEREF _Toc112156720 h 17 HYPERLINK l _Toc112156721 九、工作

3、职责 PAGEREF _Toc112156721 h 23PAGE PAGE 26一、背景流行性感冒（Influenza）简称流感，是一种由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，临床表现为起病急、高热、肌痛、头痛伴有严重不适、干咳、咽喉痛或鼻炎，多数患者可在一到两周内恢复。流感潜伏期短、经呼吸道飞沫传播，传播迅速，抗原易变异，人群对变异株普遍易感，控制难度大。流感流行呈一定季节性，但大流行可发生在任何季节，并且可以迅速蔓延至全球。我国流感南北方流行季节不同，北方地区一般在冬春季流行，南方四季都有病例发生，发病高峰在夏季和冬季。流感病毒分A、B、C三型，A型和B型流感对人类威胁较大，其中A型流感抗原变

4、异频繁，可引起世界性大流行，对人类威胁最大。流感被列为我国丙类法定传染病。对于儿童、老年人和有心肺疾病、糖尿病、癌症等慢性病患者，流感会造成严重后果，甚至死亡。流感流行期间，流感和流感相关肺炎可引起超额死亡率。美国估计每年流感流行造成的损失高达7101670亿美元，每年流感流行会导致515的人群患上呼吸道感染，住院和死亡者主要是高危人群（老年人、慢性病患者）。流感流行造成全球每年出现300500万个严重病例，并导致2550万人死亡。禽流感（Avian Influenza, AI or bird Flu）主要是由A型禽流感病毒H5和H7亚型中具有高致病性毒株所引起的一种禽烈性传染病。主要表现为禽

5、全身系统中毒症状或严重呼吸道综合征，发病突然，迅速蔓延，发病率和病死率高，对工农业生产尤其对畜牧和养禽业会造成严重的损失。禽流感已被国际兽医局列为甲类传染病，我国农业部列为甲类监测传染病。人禽流感是禽流感的一种，是指由禽流感病毒H5N1、H9N2、H7亚型中某些毒株在人群所引起的一种急性呼吸道传染病。它所表现出的临床症状随病原的亚型不同而异：从轻微的上呼吸道卡他症状至出现急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭，最终导致死亡。人感染高致病性禽流感被列为我国乙类法定传染病。自从人流感病毒被发现以来，A型流感曾引起了四次世界性大流行，即1918年西班牙流感A (H1N1)，1957年A（H2N2）亚型，

6、1968年A（H3N2）亚型和1977年重现的A（H1N1）亚型流感，事实表明后三次出现的新亚型流感病毒均首发于我国。二十世纪八十年代以来，我国大陆还先后从动物中分离出C型、禽源马2亚型（H3N8）和对水禽具有致病性的H5N1亚型流感病毒，并发现禽流感（H9N2）能直接感染人。1988年以来，大多数流感病毒的新变种也首发于我国，世界卫生组织（WHO）每年公布的流感疫苗病毒株大多数来自我国，因此我国被全世界公认为流感的多发地，许多流感专家推测下次流感大流行首发地最大可能在我国。2003年底以来，我国大陆及亚洲多个国家和地区先后暴发了H5N1、H5N2和H7N7亚型高致病性动物禽流感，并且H5N1

7、毒株在泰国、越南和柬埔寨发生多起人感染疫情，引起了国际社会的高度关注。流感为第一个实行全球性监测的传染病，目前已有80多个国家、110余个国家/地区流感中心组成了全球流感监测网络。我国于1952年开展流感工作，1957年成立了国家流感中心，1981年恢复参加WHO组织的国际流感监测网。自2000年，中国卫生部与WHO合作，开展了为期五年的流感监测合作项目，建立了覆盖23个省，以流感样病例报告和病毒分离为主的流感监测网络。通过该合作项目的顺利实施，我国流感监测的整体水平有了显著提高。监测是预防控制流感的关键策略和措施之一，也是每年确定流感流行株、推荐疫苗组份、及早发现变异株、对流感疫情预测和预警

8、的基础。目前我国各地流感的监测水平发展极不平衡，难以应对流感大流行的发生，因此加强和完善我国流感监测网络已刻不容缓。为提高我国流感监测网络的整体水平，指导各级各类医疗机构和疾控机构开展流感监测工作，在全国流感监测方案（试行）（卫办疾控发2003136号）的基础上，制定本实施方案，在较长的一段时期内，指导和规范全国流感和人禽流感的监测工作，建立科学、规范、灵敏、高效覆盖全国的流感监测网络，培养一支我国流感监测与防治的专业技术队伍。二、监测目的 1了解、掌握我国流感活动状况及流行动态变化规律。2掌握我国流感每年的流行株及其构成，了解其抗原性和基因特性变异情况，及早发现变异株，为流感流行，尤其是大流

9、行的预警提供依据。3分析我国流感代表株与WHO年度推荐疫苗株的抗原相关性，为我国每年公布流感代表株、推荐疫苗组份和制定流感疫苗的免疫策略提供科学依据。4及时发现人禽流感疫情，防范动物中禽流感疫情向人间传播，为制定人禽流感防治策略和措施提供科学依据。三、监测病例定义和诊断标准（一）流感1流感样病例 发热（体温38），伴咳嗽或咽痛之一者，缺乏其它实验室确定诊断依据2临床诊断病例3确诊病例（二）人禽流感（H5、H7、H9等亚型）1待查病例2临床诊断病例3确诊病例4排除病例四、全国流感/人禽流感监测网络全国流感/人禽流感监测网络由各级各类医疗机构、流感样病例监测哨点医院和各级疾病预防控制中心组成。（一

10、）各级各类医疗机构根据中华人民共和国传染病防治法，诊断并报告流感临床诊断病例和确诊病例及人禽流感临床诊断病例和确诊病例。（二）流感样病例监测哨点医院按照哨点医院的选择原则，在全国31个省（自治区、直辖市）选择185家医院组成国家级流感样病例监测哨点医院，同时各省根据现有工作基础和条件，设立155家非国家级流感样病例监测哨点医院，所有哨点医院具体名单见附件1。（三）全国流感/人禽流感流行病学和实验室监测网络 由国家、省、市、县四级疾病预防控制中心组成，并根据“流感监测实验室生物安全分级及生物安全管理规定要求”（见附件2），经中国疾控中心考核认定，实验室监测网络由具备资质的各级疾病预防控制中心流感

11、实验室，共63家组成，具体名单见附件3。五、法定传染病疫情报告1报告内容根据中华人民共和国传染病防治法，流行性感冒和人感染高致病性禽流感分别为丙类和乙类法定传染病，其中流行性感冒报告流感临床诊断和确诊病例，人感染高致病性禽流感报告临床诊断和确诊病例。2责任报告人各级疾病预防控制机构、医疗机构和采供血机构及其执行职务的人员为法定传染病疫情责任报告人。3报告程序、方式和时限法定传染病疫情责任报告人按照流感临床诊断和确诊病例，人禽流感临床诊断和确诊病例的诊断标准进行诊断，并根据卫生部颁布的传染病信息报告工作管理规范中规定的报告程序、方式和时限，通过“疾病监测信息报告管理系统”进行报告。六、流感样病例

12、监测（一）监测时间1北方16省：北京、天津、河北、山西、内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江、山东、河南、西藏、陕西、甘肃、青海、宁夏、新疆。2南方15省：上海、江苏、浙江、安徽、福建、江西、湖北、湖南、广东、广西、海南、重庆、四川、贵州、云南。3每年的4月至次年的3月为一个流感监测年度。北方省每年自10月1日所在周开始监测，至次年3月31日所在周结束；北方省中的辽宁、天津和甘肃及南方省全年开展监测。周历按照公历的每周一到每周日编排（见附件4）。（二）哨点医院的选择按照以下原则，在全国选择185家哨点医院，组成国家级流感样病例监测哨点医院网络，开展流感样病例的监测。此外各省还可根据现有工作基础和条件，设

13、立非国家级流感样病例监测哨点医院。1选择原则（1）在各省会城市选择呼吸道病人就诊较多的综合医院和儿童医院各一家。（2）各省在另一人口密度较高、具备一定工作基础，距当地流感监测网络实验室较近的地级市，选择呼吸道病人就诊较多的城市综合医院和儿童医院各一家。（3）在曾发生过动物禽流感疫情或流感暴发疫情较多的农村县选择县中心（人民）医院一家。（4）辽宁、山东、浙江、福建和广东省，另在大连、青岛、宁波、厦门、深圳5个计划单列市，选择呼吸道病人就诊较多的综合医院和儿童医院各一家。（5）各省优先选择现已开展流感样病例监测的哨点医院。（6）工作基础较好的省可适当增加哨点医院数量。2监测诊室的设置（1）城市综合

14、医院在内科门诊和内科急诊开展流感样病例的监测。（2）城市儿童医院在儿内科门诊和儿内科急诊开展流感样病例的监测。（3）农村县中心（人民）医院在内科门诊、内科急诊和儿内科门诊、儿内科急诊同时开展流感样病例的监测。（三）流感样病例的报告1报告内容和程序（1）哨点医院设置监测诊室的医务人员，按照流感样病例的定义，对每天在内科门诊、内科急诊、儿内科门诊、儿内科急诊所有诊室就诊的病例进行诊断，每天登记分年龄组的流感样病例数和门急诊病例就诊总数，填写“ 医院 科门（急）诊流感样病例数和门急诊病例就诊总数原始登记表”（见表1），报医院主管科室。原始登记表中“流感样病例数”和“门急诊病例就诊总数”可分科室、诊室

15、，由各科室确定专人，每日进行登记。（2）哨点医院主管科室，每周一负责将本院各监测诊室上周的“ 医院 科门（急）诊流感样病例数和门急诊病例就诊总数原始登记表”（表1），分诊室录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”。2注意事项流感样病例数和门急诊病例就诊总数在每家监测哨点医院的产生来源必须一致。（1）流感样病例数是指当天在内科门急诊和/或儿内科门急诊所有诊室诊断的流感样病例，而不仅是某一诊室（如呼吸内科和/或小儿呼吸内科）的流感样病例。（2）门急诊病例就诊总数是指当天在内科门急诊和/或儿科门急诊所有诊室就诊的全部门急诊病例总数，而不仅是某一诊室（如呼吸内科和/或小儿呼吸内科）的就诊的门急诊病例数。

16、（四）流感样病例病原学监测1实验室条件及生物安全操作要求流感病原学监测在生物安全级实验室进行。（1）流感病毒分离必须在生物安全级实验室的生物安全柜里操作，并遵守相关的生物安全管理规定。（2）红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验在生物安全级实验室里操作，并遵守相关的生物安全管理规定。（3）实验室基本条件：具备进行流感病毒分离鉴定所需要的生物安全柜、离心机、CO2培养箱、恒温培养箱、液氮罐、-70低温冰箱以及常规冰箱等配套设备。2标本采集哨点医院监测诊室的医护人员负责采集，或协助当地疾控中心专业人员采集流感样病例的鼻咽拭子等标本，采集人员填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2），随同所采

17、集标本送全国流感监测网络实验室。（1）采样对象：发病3天内的流感样病例，且没有服用过抗病毒药物。根据就诊ILI病例数的多少，每家哨点医院每周至少采集515份流感样病例的标本。（2）标本采集种类包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液，其中咽拭子、鼻拭子采集后，放入含采样液4ml的采样管中；鼻咽抽取物采集5ml；咽漱液和鼻洗液采集10ml。采集方法详见附件5。（3）标本的运输：标本采集后应在4条件下，尽快（24小时内）运送至全国流感监测网络实验室，未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存，标本运输方法详见在县中心（人民）医院采集的流感样病例标本，每日送县级疾控中心，置-70或以下保

18、存。县疾控中心根据标本采集的数量，每两周在冻存条件下，24小时内送至距离较近的流感监测网络实验室。（4）全国流感监测网络实验室的工作人员接到标本后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”的“流感/人禽流感监测病例标本登记一览表”（见表3） 中。3病毒分离病毒分离培养是流感病原学监测的基础，目前多采用鸡胚和MDCK细胞并用进行流感病毒分离。近年来随着分子生物学技术的发展，发现通过鸡胚所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本有所不同，而通过MDCK细胞所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本相似。另外由于“O”相毒株的重现，MDCK细胞对“

19、O”相毒株的敏感性远高于鸡胚，所以MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一种宿主系统。但MDCK细胞分离的病毒不能用于疫苗生产。为减少工作量，可先用MDCK细胞进行筛选，阳性后，再将另外一份70或以下冻存的全国流感监测网络实验室收到标本后，应在24小时内进行标本处理和病毒接种，不能及时接种的应置70或以下冻存。（1）标本的处理：标本送至实验室后，立即进行处理。将原始标本一分为三份，一份（40）用于鸡胚接种，一份（30）用于MDCK细胞接种，一份（30）保存待复核。处理方法详见附件5。（2）MDCK细胞的接种和收获将处理后的标本接种于已长单层的MDCK细胞上，每日观察细胞病变，一般为7天。当C

20、PE出现“+”“+”时，即75-100细胞出现病变时进行收获，收获之前可将细胞冻融12次，以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应于第7天收获。CPE出现时间随感染病毒的型别、毒株的差异、感染量的大小和MDCK细胞的代数而异，一般标本接种后7天还未出现CPE，维持液经HA试验阴性者，继续盲传12代后，HA试验仍为阴性者，则MDCK细胞病毒分离为阴性，标本可弃去。随MDCK细胞传代数的增加，其对流感病毒的敏感性下降。MDCK细胞复苏后连续传15-20代，在间隔期可以用已知滴度的病毒来检验MDCK细胞系的敏感性（具体方法见附件5），若敏感性下降，即可弃去，复苏新细胞。（3）鸡胚的接种和收获将处

21、理后的标本接种于9日龄鸡胚的羊膜腔和尿囊腔，3335培养72小时。分别收获鸡胚尿囊液和羊水。经HA试验阴性者，将羊水和尿囊液混合，继续盲传1代（72小时），如仍为阴性，则鸡胚病毒分离为阴性，标本可弃去。（4）结果录入流感监测网络实验室的工作人员在完成病毒分离后，24小时内将病毒分离结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“ 流感/人禽流感监测病毒分离、鉴定结果登记一览表”（见表4）中。4病毒鉴定（1）红细胞凝集试验（HA）MDCK细胞或鸡胚收获的标本首先用鸡、豚鼠或人红细胞进行红细胞凝集试验（HA），确定病毒滴度，“O”相毒株采用豚鼠或人红细胞进行HA试验，具体方法见附件5。HA滴度8，

22、进行红细胞凝集抑制（HI）试验；HA滴度8者，继续在敏感的MDCK细胞系或鸡胚上进行传代培养，使其HA滴度8后，再进行HI测定。若传12代后，HA滴度仍8者，可应用B型引物和能区分A型流感病毒不同亚型的引物进行RTPCR鉴定。不具备RTPCR鉴定能力的送国家流感中心进行分离鉴定。（2）红细胞凝集抑制（HI）试验HA试验完成后，用国家流感中心每年提供的抗A（H1N1）、抗A（H3N2）、抗B（Victoria系）和抗B（Yamagata系）4种标准参照血清，进行红细胞凝集抑制（HI）试验，确定病毒的型别和亚型，进行HI试验时，需同时进行4种标准抗原对照。具体方法见附件5。（3）流感监测网络实验室

23、的工作人员在完成病毒鉴定后，当天将鉴定结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统” 中“流感/人禽流感监测病毒分离、鉴定结果登记一览表”（见表4）。5毒株的管理和上送（1）毒株的保存管理包括国家流感中心在内的全国流感监测网络各实验室，要对所有流感毒株进行登记，应用“中国流感/人禽流感监测信息系统”填写“流感/人禽流感毒株保存记录表”（见表5），以备复核。毒株鉴定完成后，液体毒株应在70及以下保存3年，干燥管可以长期保存。分离毒株的原始标本保存6个月，在收到国家流感中心复核鉴定报告后，方可弃去。（2）上送国家流感中心的毒株种类自国家级流感样病例监测哨点医院网络采样，所分离的全部毒株；自非国家级流感

24、样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，单向血凝抑制效价与国家流感中心提供的标准参照血清相比，有4倍或4倍以上差异的毒株；自非国家级流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，HA滴度8，且不具备RTPCR鉴定能力的毒株。HA阳性，应用当年国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均20的毒株。（3）毒株上送的时限和要求HA阳性，应用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均20的毒株，应在HI试验结束后24小时内送达国家流感中心；其余毒株在HI试验完成后，每2周送至国家流感中心；全国流感监测网络各实验室负责填写“流感毒株送检单”（见表6），将

25、毒株上送至国家流感中心。监测网络中的市（县）级实验室送检毒株时，应同时送各省级疾控中心流感实验室备份。所送毒株每份不少于3ml，并且无细菌污染。任何单位和个人，未经卫生部批准，不得与境外直接进行毒株交换。国家流感中心：电话传真中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室，北京宣武区迎新街100号，邮编：100052。6毒株的复核国家流感中心收到毒株后，进行流感病毒型和亚型的复核鉴定。（1）经HA复核，滴度8的，既可进行HI试验，一般毒株2天内完成复核鉴定，并将结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核

26、、鉴定一览表”（见表7），进行反馈。用国家流感中心每年提供的抗A（H1N1）、抗A（H3N2）、抗B（Victoria系）和抗B（Yamagata系）4种标准参照血清无法鉴定的特殊毒株，应尽快反馈鉴定结果。（2）经HA复核，滴度8的，继续在MDCK细胞或鸡胚上培养2代，符合HA滴度8的，可进行HI试验。并在完成当天将复核结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核、鉴定一览表”（见表7），进行反馈。（3）若经病毒培养2代后，HA滴度仍8者，国家流感中心应用B型引物和能区分A型流感病毒不同亚型的引物进行RTPCR鉴定。（4）国家流感中心在复核、鉴定完成后，填

27、写“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核鉴定报告” （表8），向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。7、流感病毒抗原性分析国家流感中心对所分离到的流感病毒，采用单向血凝抑制试验和交叉血凝抑制试验进行抗原性分析。（1）单向血凝抑制试验选择不同时间、不同地区分离的毒株，采用近几年抗原性不同的国内标准参照血清及相关抗原和WHO提供的标准参照血清及相关抗原，进行单向血凝抑制试验。具体方法见附件5。单向血凝抑制试验完成后，填写“国家流感中心流感毒株单向血凝抑制试验报告”（见表9），及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。（2）交叉血凝抑制试验国家流感中心选择不同时间、不同地区分离的毒

28、株，按照HI效价是否与标准参照血清存在4倍及以上差异进行分组，每组各选择一定比例的毒株，采用近几年抗原性不同的国内代表株和WHO公布的疫苗株及其标准参照血清，进行交叉血凝抑制试验，测定抗原比。具体方法见附件5。交叉血凝抑制试验完成后，填写“国家流感中心毒株交叉血凝抑制试验报告”（见表10），及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。8、流感病毒基因特性分析国家流感中心选择不同时间、不同地区分离的毒株，尤其是抗原比有差异的，按照HI效价是否与标准参照血清存在4倍及以上差异进行分组，每组各选择一定比例的毒株，进行血凝素重链区（HA1）和N基因的核苷酸序列测定，并与当年WHO推荐的疫苗株的

29、核苷酸和氨基酸序列进行比较分析，完成后及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。七、流感暴发疫情监测（一）暴发疫情定义1流感样病例暴发疫情定义：在某一相对集中的区域内（如村庄、学校、幼托机构、敬老院、工厂、公司、工地等集体单位），一周内，出现30例及以上，或集体单位中10以上的聚集性流感样病例。2流感暴发疫情：根据突发公共卫生事件的分级分类标准进行判断。（二）暴发疫情的发现与报告1疫情发现（1）各级医疗卫生机构，发现本地区在某一相对集中的区域内（如村庄、学校、幼托机构、工厂、公司等集体单位），短时间内出现较多聚集性的流感或流感样病例，要及时向当地疾病预防控制机构报告。（2）各级疾病预

30、防控制机构，要主动和当地教育主管部门联系，建立学校、幼托机构流感或流感样病例聚集性发病的报告渠道。各级各类学校指定的负责本校传染病疫情报告工作的专人或兼职教师一旦发现暴发疫情苗头，应主动向辖区内疾病预防控制机构进行报告，疾病预防控制机构应及时进行调查和处理。（3）在当地流感流行季节，疾病预防控制机构应定期开展主动监测，以早期发现暴发疫情。2疫情报告（1）各级疾病预防控制机构，在接到流感或流感样病例暴发疫情报告后，要及时进行调查处理，并在接到疫情报告后尽快应用“突发公共卫生事件报告管理信息系统”，进行首次报告。（2）在暴发疫情调查处理的过程中，根据疫情进展情况，及时在首次报告的基础上进行进程报告

31、，在暴发疫情结束后，尽快进行结案报告。（3）符合全国突发公共卫生事件应急处理预案中规定的突发公共卫生事件分级标准的流感暴发疫情，则按照相应的规范进行报告。3报告内容报告内容主要包括事件类别、事件名称、报告单位、事件波及人口数、首次报告时间、疫情发生地、是否发生在集体单位（学校）、首例病例发病时间、末例病例发病时间、分年龄组发病和死亡数、标本采集信息、疫情性质等，具体见“流感或流感样病例暴发疫情监测报告表”（见表11）。（三）暴发疫情的调查处理各级疾病预防控制机构应认真做好现场流行病学调查，并根据本地实验室的能力，开展实验室检测工作，尽快明确疫情性质。不具备实验室检测能力的疾控机构，应按规范积极

32、采集标本，送具备相应资质的实验室进行检测。在开展流行病学调查和实验室检测的同时，应采取积极有效的措施，控制疫情的进一步蔓延。1流行病学调查 各级疾病预防控制机构，在接到流感或流感样病例暴发疫情报告后，要及时进行流行病学调查，调查内容参考“流感或流感样病例暴发疫情监测报告表”（表11）。2标本采集各级疾病预防控制机构负责暴发疫情病例标本的采集。（1）标本采集采集发病3天内病例的咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液标本，且没有服用过抗病毒药物，具体采集方法见附件5。（2）标本的运送采集人员填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（见表2），并将标本送至能开展相应检测的实验室。快速检测

33、的标本，可在现场进行检测，或送至具有流感快速诊断试剂盒的疾控机构实验室进行检测。用于病毒分离和RTPCR检测的标本采集后应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室，未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存。标本运输方法具体见（3）全国流感监测网络实验室的工作人员接到标本后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“流感/人禽流感监测病例标本登记一览表”（见表3）中。3实验室检测（1）实验室检测的目的核实暴发疫情的实验室诊断，明确是否为流感暴发。自暴发疫情中分离到流感病毒，对其进行抗原性和基因特性分析。（2）实

34、验室检测方法的选择原则流感样病例暴发疫情中常用的检测方法有流感快速诊断试剂盒检测、RTPCR检测和病毒分离培养。其中流感快速检测和RTPCR检测可用于早期、快速的实验室检测。具备流感快速检测和RTPCR检测条件的地区，可选择这两种快速检测方法，尽快明确疫情性质。不具备流感快速检测和RTPCR检测条件的地区，应尽量采集标本，送全国流感监测网络实验室进行流感病毒分离鉴定。无论是否进行流感快速诊断试剂盒检测和RTPCR检测，都应进行常规的流感病毒分离鉴定。尤其是流感快速检测和RTPCR检测阳性的标本，应尽量分离到流感病毒。（3）流感快速诊断试剂盒检测流感快速诊断试剂盒可检测流感病毒的NP抗原和M1抗

35、原，用于暴发疫情中病例咽、鼻拭子或含漱液标本的快速检测。可在30分钟内提供检测结果，初步判断疫情性质，可在现场中使用，操作简便，具体方法见附件5。但是这种快速检测比病毒分离培养或RT-PCR的敏感性低，无法确定流感病毒的亚型，部分试剂盒不能区分A型或B型流感病毒的感染，无法获得毒株及其分子生物学和抗原特征的信息。（4）RTPCR法和Real-time PCR法检测病毒核酸RTPCR法和Real-time PCR法是检测流感病毒核酸的方法，能检测出非常低水平的流感病毒的核酸，不管病毒是否具有活性均可进行测定。可选择区分流感病毒的A型通用引物、B型引物和能区分A型流感病毒不同亚型的引物同时进行试验

36、，具体方法见附件5。（5）病毒分离鉴定病毒分离鉴定是流感实验室诊断中最常用、高度敏感、最准确的方法之一，所分离到的病毒可长期保存，并进行抗原性分析。因此在暴发疫情中，常规用于实验室检测，具体内容同流感样病例的病原学监测。（6）检测结果的报告各级疾病预防控制机构流感实验室，接到标本后，进行相应的流感快速检测、RTPCR和Real-time PCR检测，完成试验后，24小时内分别将检测结果录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“流感暴发疫情快诊试剂盒检测结果一览表” （见表12）和“流感暴发疫情核酸检测结果一览表”（见表13）中。病毒分离鉴定的结果录入到“流感/人禽流感监测病毒分离鉴定结果登

37、记一览表”（见表4）。 （7）毒株的保存管理包括国家流感中心在内的全国流感监测网络各实验室，要对所有自暴发疫情中分离的流感毒株进行登记，填写“流感毒株保存记录表”（表5），以备复核。（8）毒株的上送全国流感监测网络各实验室在完成HI试验后，填写“流感/人禽流感毒株送检单”，每2周将所有自流感样病例暴发疫情中分离到的毒株送至国家流感中心，监测网络中的市级实验室送检毒株时，同时送各省级疾控中心流感实验室备份。其中红细胞凝集阳性，而用国家流感中心提供的标准参照血清，HI效价均20的毒株，应在HI试验结束后24小时内送达国家流感中心。所送毒株每份不少于3ml，血凝滴度8，并且无细菌污染。（9）毒株的复

38、核鉴定、抗原性和基因特性分析国家流感中心收到毒株后，进行复核鉴定、抗原性分析，并在完成后及时录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中，并向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。具体内容同流感样病例病原学监测。4疫情控制（1）隔离病人发现疫情后，应早期对病人采取居家休息、单独呼吸道病房治疗等方式进行隔离，因地制宜，就地适当隔离。（2）对症治疗和防并发症对病人治疗一般采用对症疗法，发病早期(48小时内)可服用抗流感病毒药物，严重患者如严重肺炎,呼吸极度困难,高热不退等需住院治疗。防治并发症主要应防止流感病毒性肺炎和细菌性肺炎,尤其对年迈体衰者或伴有心血管,糖尿病,慢性呼吸道疾病者或婴幼儿

39、等流感高危人群，因他们由于流感或其它合并症可造成死亡,故应特别注意加强治疗护理。（3）其它控制措施一般采用综合性措施，保持室内空气流通，对易感人群进行健康宣传教育，讲究卫生，注意体格锻炼和营养，避免接触病人，尽量不去公共场所等。对尚未暴露的年迈和健康状态差，尤其患慢性病的病人，必要时可采用流感疫苗接种，但疫苗接种在2周后才能产生保护性抗体，而且存在暴发毒株与疫苗株是否匹配的问题。因此在暴发初期，对这部分高危人群，尤其是对疫苗过敏者或可能已被感染（如密切接触病人）者，应及时(48小时内)服用抗流感病毒药物。（4）停课、停业根据疫情规模，必要时县级以上地方人民政府报经上一级人民政府决定，可以采取停

40、工、停业、停课等紧急措施，控制疫情的进一步扩散蔓延。5疫情性质的判断原则（1）暴发疫情的性质应结合病例的临床表现、病例间的流行病学联系和实验室检测结果进行综合分析、判断。（2）单个病例按照流感诊断标准进行诊断。（3）仅有单个或少数病例的实验室检测结果阳性，对暴发疫情的性质判定应慎重。（4）多数或较大比例病例的实验室检测结果均阳性，且病毒型和亚型结果一致，可明确暴发疫情的性质。八、人禽流感监测禽流感作为一个新发传染病，目前人类对其认识有限，随着认识的不断深入进展，人禽流感诊断标准、监测内容、方法、时间和范围将做进一步修改、完善。正是由于目前人类对人禽流感认识有限，而且我国每起动物禽流感疫情的确认

41、需要一个时间过程，因此以下人禽流感监测的启动条件、监测范围和时限仅作为指导原则推荐给各省参考，各省卫生行政部门可以根据当地动物高致病性禽流感疫情规模和人禽流感疫情的波及范围，结合各地实际情况和防治措施的需要，确定监测范围和时限。（一）人禽流感监测启动1启动条件发生以下三种情况之一，相关地区应立即启动人禽流感监测工作。（1）发生动物高致病性禽流感疫情。（2）出现人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例。（3）与我国接壤的其它国家或地区在边境地区发生动物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情。2当人感染高致病性禽流感疫情规模符合突发公共卫生事件相关分级标准时，按照国家突发公共卫生事件应急预案，启动相应的应急

42、反应。（二）监测范围确定的原则1发生动物高致病性禽流感疫情后，在当地农业部门划定的动物疫区范围所涉及县（市、区）开展监测工作。动物疫点：将病禽所在禽场（户）或其他有关屠宰、经营单位划为疫点；散养的，将病禽所在自然村划为疫点。动物疫区：以疫点为中心，将半径3公里内的区域划为疫区。2人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例与动物高致病性禽流感疫情有明确联系，同样在动物疫区范围所涉及的县（市、区）开展监测工作。3出现2例及以上人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例，经调查病例间有流行病学联系、存在可能的人传人证据时，在病例发病前10天至隔离治疗（或死亡）期间，曾经居住、工作、生活、学习、诊治所涉及的县（市

43、、区）开展监测工作。4与我国接壤的其它国家或地区在边境地区发生动物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情，相关省可在与其相邻的边境县（区）开展人禽流感监测工作。（三）监测时限1发生动物高致病性禽流感疫情后，监测工作自当地农业部门处理完动物疫情、所有密切接触者解除医学观察后，持续10天。2出现人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例后，监测工作自最后一例病例被隔离治疗（或死亡）、所有密切接触者解除医学观察、疫区处理结束后，持续10天。3与我国接壤的其它国家或地区在边境地区发生动物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情，相关省的人禽流感监测工作可在境外疫情平息后持续1个月。（四）监测对象1密切接触者饲养、贩卖、屠

44、宰、加工、诊治病死禽的人员；捕杀、处理病、死禽，未按相应规范采取防护措施的人员；接触病、死禽及其排泄物、分泌物，或其排泄物、分泌物污染的环境的其他相关人员。与隔离治疗前的人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例共同生活、居住，护理过病例，或接触过病例的呼吸道分泌物、排泄物和体液的人员。2人禽流感待查病例、临床诊断或确诊病例按照人禽流感诊断标准进行诊断。（五）密切接触者的医学观察1对密切接触者医学观察7天，观察期间不限制其活动。2告知其禽流感的临床特点、传播途径及相关防治知识。3观察期间，由当地卫生行政部门指定医疗卫生人员每日对密切接触者测试1次体温，了解其身体健康状况，每日填写“禽流感密切接触者医

45、学观察原始登记表”（见表14），并按“禽流感密切接触者医学观察每日统计汇总表”（见表15），上报到辖区县级疾控机构。由县级疾控机构每日录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中。4 对密切接触者中出现异常临床表现（发热，或咳嗽、咽痛等症状）的，按照人禽流感诊断标准进行诊断治疗。5当出现人禽流感待查病例、可能或实验室确诊病例，且流行病学调查结果提示病例之间存在流行病学联系或人传人的可能时，对其密切接触者应进行隔离医学观察。（六）人禽流感待查病例的监测1病例报告（1）人禽流感监测启动后，监测范围内的各级各类医疗机构医务人员接诊流感样病例和肺炎病例时，要详细询问病例的流行病学史，严格按照人禽流感诊断

46、标准进行诊断。（2）一旦诊断为人禽流感待查病例后，具备网络直报条件的医疗机构，立即登陆“中国流感/人禽流感监测信息系统”进行报告，报告内容见“人禽流感待查病例调查表”（见表16）。没有条件实行网络直报的，应以最快方式报告本行政区域内县级疾病预防控制机构。（3）各级各类医疗机构医务人员接诊流感样病例和肺炎病例时，一旦病例具备相应的流行病学史，诊断为人禽流感待查病例，无论是否在监测范围或时限内，都应立即报告。2隔离治疗人禽流感待查病例诊断后，立即送当地定点收治医院，置单间治疗，并采取相应的医院内感染控制措施，直至病例被排除。3流行病学调查县级疾病预防控制中心接到人禽流感待查病例后，立即开展现场流行

47、病学调查。并根据初步调查结束，对“人禽流感待查病例调查表”（表16）的内容进行审核。4标本采集医疗机构配合当地疾病预防控制中心专业人员采集病例标本，采集人员要按照禽流感职业暴露人员防护指导原则做好个人防护。在现场采集样本的同时，填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）。（1）标本采集种类病例的咽、鼻拭子或含漱液、血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。采集方法详见附件5。（2）采集标本时间咽、鼻拭子或含漱液在发病后17天采集；急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后24周采集；尸检标本尸检时采集。（3）标本的运送所有标本应在医院采集，一式二份，其中一份单独保存，以备复

48、核。标本应在4条件下，尽快（24小时内）送至能开展相关检测的实验室，用于病毒分离的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在70 以下保存。血清标本可暂冻存在20 实验室工作人员接到标本后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中。5实验室检测（1）RT-PCR和RealTime PCR具备相应资质疾控机构的流感实验室，接到标本后，首先应用RT-PCR或RealTime PCR，对禽流感待查病例的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物等标本，进行禽流感病毒核酸的快速检测，具体方法见附件5。一般情况下, 实验室收到的样本

49、立即进行实验，并于收到标本后48小时内出具RT-PCR检测报告，并将检测结果录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“人禽流感监测核酸检测结果一览表”（见表16，4.2）。（2）血清学检测具备相应资质疾控机构的流感实验室，接到血清标本后，进行如下实验：应用禽流感灭活病毒，对患者急性期和恢复期的血清，进行红细胞凝集抑制试验。在生物安全三级实验室里，应用禽流感活病毒，对患者急性期和恢复期的血清进行微量中和试验。微量中和实验须5-10天内完成。完成试验后，24小时内将检测结果录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“人禽流感监测血清学检测结果登记一览表” （见表16，4.3）。（3）病毒分离

50、、鉴定及复核具备相应资质疾控机构的流感实验室在生物安全三级实验室中，应用SPF鸡胚，MDCK细胞，对病例的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物等标本进行禽流感病毒的分离、鉴定及复核。一般情况下, 在收到样本后7-10天出具病毒分离培养结果，于分离到病毒后的3-5天出具病毒鉴定结果，并将病毒分离、鉴定结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“人禽流感监测病毒分离、鉴定和复核结果登记一览表”中（见表16，4.4）。（4）标本和分离物上送不具备相应实验室检测能力的省，须将原始标本连同“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）一起，24小时内送中国疾控中心检测。包括RT

51、-PCR、RealTime PCR、血清学检测和病毒分离，任何一项实验室检测结果阳性的，需将原始标本、可疑阳性标本、血清、病毒分离物等，在低温保存条件下，于24小时内送至中国疾控中心进行复核。原始标本、可疑阳性标本和血清须填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2），病毒分离物须填写“人禽流感毒株送检单”（见表17）。（5）实验室检测结果的复核国家流感中心收到送检标本或病毒分离物后，立即应用RTPCR、RealTime PCR法进行禽流感病毒的核酸检测和序列测定，同时接种SPF鸡胚和MDCK细胞进行病毒分离，对分离物采用HA、HI、NI等方法进行亚型鉴定。对血清标本进行HI和微量中和试验。在检测结果确认后，立即录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中进行反馈。6诊断与排除所有人禽流感确诊病例、临床诊断病例的排除由国家级专家组进行诊断、判定。人禽流感待查病例的排除，及人禽流感待查诊断为临床诊断病例时，由各省专家诊断组根据国家流感中心的复核结果进行判断。人禽流感待查病例诊断为临床诊断或确诊人禽流感病例后，按照卫生部的有关要求开展防治工作。九、工作职责（一）全国各级卫生行政部