清洁工艺验证检查综合手册

1、36/36HYPERLINK / Validation of Cleaning Processes (7/93) 清洁工艺验证清洁工艺验证检查指南注：此指南是 FDA 检查官和其工作人员的参考资料。此文件不约束 FDA，也不给予任何人任何权利，特权，利益或豁免权。介绍自从 FDA 的各文件，包括化学原料药检查指南和生物技术检查指南简单地提出了清洁验证那个话题之后，关于清洁工艺的验证差不多引发了相当多的讨论。这些官方的文件，都清晰地确定了关于清洁工艺需要被验证的期望。通过讨论那些已被认为可同意的（或者不可同意的）实际情况，此指南是为了建立检查的连贯一致性。同时，必须意识到，与其他工艺验证一样，清

2、洁验证的方法也不止一种。最后，所有过程验证的检查标准是，检查其科学数据能否证明该系统始终如一地达到预期目的，结果稳定地符合预先制定的标准。 本指南仅适用于设备的化学残留物的清洁验证。 背景1963 年 GMP 法规（133.4 节）要求如下“设备需要被维持在一个清洁、有序的状态”。还有一个专门相似的关于设备清洁的章节是在 1978 年 GMP 法规（211.67 节）。同这些法规相比，FDA关于设备在使用前应被清洁的要求并不是什么新要求。因此，关于设备清洁的总的原则是为了防止产品污染或掺杂其它物质。从历史事件看来，FDA检查官发现了一些明显的不卫生是由于设备的清洁和维护不到位，或防尘操纵系统不

3、当。过去FDA 更多的关注于非青霉素类产品和青霉素类产品，或药品与甾类产品和激素类产品之间的交叉污染问题。在过去的十年中，有大量的产品召回事件差不多上由于实际的或潜在的青霉素交叉污染。1988 年的召回消胆胺树脂事件，使 FDA 关于潜在交叉污染的问题日益重视。那次召回的缘故是用于生产制剂的原料药被农业杀虫剂生产中低剂量的中间体和降解物给污染了。造成这次交叉污染的缘故是由于重复使用了回收溶剂引起的。而回收溶剂被污染的缘故是由于对重复使用的溶剂桶缺乏操纵。这些桶之前是用于贮存杀虫剂生产线产生的回收溶剂，之后又被重复地用于树脂生产线使用的回收溶剂贮存。该公司关于这些溶剂桶缺乏有效的操纵，关于贮存的

4、溶剂缺少适当的检测，关于溶剂桶的清洁过程也没有进行验证。一部分被杀虫剂污染的原料药被供给了在另一地址的厂进行最后的制剂生产，这就导致2翻译：Cuckoo (cuckoo801002); 校对并解读：Chank (chank2006) 注：个人学习、交流使用，不得用于商业目的。 了该厂的流化床干燥机的袋子被杀虫剂污染了。转而导致此厂生产的众多批次产品被污染，尽管该厂并不生产杀虫剂。1992 年，FDA对一家海外原料药生产商发出了进口警告。该厂使用相同设备生产强效甾类产品和非甾类产品。因此公司是多品种原料药生产厂家，FDA 认为潜在交叉污染的可能性专门大，对公众健康造成了严峻的威胁。该公司只是在

5、FDA 检查的近期才开展了清洁验证工作，而 FDA 认为该清洁验证工作是不当的。理由之一是，工厂仅查找没有前一种物质存在的证据。然而用薄层法检测洗涤水后，找到了设备中还残留了前一产品生产过程中反应副产物和降解产物的残留物。差不多要求FDA 期望公司建立书面的程序（SOPs）用于详细描述设备各部件的清洁的过程。假如公司用同一程序进行相同产品不同批次之间的清洗，而使用不同程序进行转产之间的清洗，公司的书面程序应明确讲明这些不同的情况。同样，若水溶性残留物与非水溶性残留物的清洗方法不同，则公司的书面程序也应讲明两种情况，并清晰地规定在何种情况下执行哪个程序。关于化学原料药生产中会产生柏油状或粘胶状残

6、留物的生产工序，因为这些物质不容易被清除，公司能够决定使用专用设备。流化床干燥机的袋子，作为一种不容易被清洗的设备，也通常只被专用于某一特定产品的生产。关于清洁过程本身留下的残留物（清洁剂，溶剂等），也必须被去除。FDA 期望公司建立书面的清洁工艺验证通则。FDA 期望那个清洁工艺验证通则规定，验证执行的负责人，批准验证工作的负责人，接受标准，再验证时刻。FDA 期望关于每一个生产系统或每一个设备，公司应预先制订具体的书面验证方案，其中应明确规定如取样方法、分析方法（包括方法灵敏度）等方面的问题。FDA 期望公司依照方案进行验证工作，并记录归档验证的结果。FDA 期望形成一个最终的验证报告，报

7、告应通过治理层的批准，并讲明该清洗方法是否有效。数据应该能够支持如下结论，残留物质差不多被降低到一个“可同意的水平”。 清洁验证的评估第一步是明确验证目的。我们曾发觉有一些公司没有建立验证目的。如常见一些生产商，在清洁之后进行了大量的取样和检测程序，而没有真正去评估各步清洗操作的有效性。在评估清洁工序时，有一系列的问题需要被关注。比如，到达哪个点/程度，一个设备或者系统确实是清洁了？是不是一定要用手擦洗？用手擦洗达到了什么效果，而只用一种溶剂清洗是达不到的？批和批之间或者产品和产品之间，人工清洗的差异有多大？这些问题的答案，关于检查和评估清洁过程来讲是特不重要的，因为检查官必须要全面评估该过程

8、的有效性。而且这些问题的答案也有助于省去多余的步骤，能更有效地工作，从而为公司节约资源。 检查每个设备有几种清洗方法。理想的情况是一个设备或系统拥有一套清洗工艺。然而，这也取决于生产的品种，以及同一产品的不同批次之间（如大量生产）或者不同产品的转产之间是否需要清洗。当清洗方法只用于同一产品的不同批次之间（或同一中间体的不同批次之间），公司仅需要建立“目视清洁”的标准。诸如此类的批与批之间的清洁工艺，不需要被验证。 设备的设计检查设备的设计，尤其是使用了半自动或全自动在场清洗系统的大型生产系统，需要重点关注。比如，应使用没有球阀的卫生型管道系统。当使用了那些非卫生型的球阀（这在原料药工业中是普遍

9、的），清洁工序就变的更困难。若在现场检查中发觉使用了上述类型的设备系统，执行清洁程序的操作人员必须了解问题的所在，并已进行了关于系统和阀门清洁的专门培训。检查该操作人员是否了解系统，培训的水平和清洁操作的经验。并检查书面的已验证过的清洁程序，判定系统是否差不多被适当的确认和验证过。关于大型系统，比如使用了专门长的转移/输送管道的，要检查流程图和管道图纸从而确认需要清洗的阀门，和是否有书面清洁规程。 管道和阀门应标记，以便操作人员识不。有时，阀门标识不当，不管在打印图纸上和实物上，都会导致不正确的清洁操作。在清洁工序的相关文件中，必须检查是否包含了关键因素；确认并操纵每次生产结束后至清洁开始的时

10、刻间隔。这关于局部用药物，悬浮剂和原料药的生产尤其重要的。因为残留物干燥后，会直接阻碍清洁的效果。不管是否使用了在线清洁系统，都应考虑设备清洁的微生物情况。这包括大量的预防性的措施，而不只是在染菌之后再除菌。应有证明，常规清洁和设备保存可不能有微生物的生殖。比如，设备在保存之前应该干燥，清洁后不同意有任何积水残留其中。关于无菌工艺的设备，或者非无菌的但有助于微生物增长的产品，清洁之后还可能需灭菌或消毒。尽管灭菌或消毒程序已超出了本指南的范围，但要注意的是，通过适当的清洁和设备保存来操纵微生物，是对接下来的灭菌/消毒工序能够达到无菌水平的保证。从6无菌工艺应操纵热原的观点来讲，这一点也特不重要。

11、因为设备灭菌工艺不一定能够取得显著的灭活或去除热原的效果。书面清洗程序程序和文件要检查验证后的清洗方法是否具体、详细，检查需要记录的项目。我们曾见过许多通用性的 SOP，同时也见过其它使用批生产记录或者记录表格系统的，其要求对每一步操作做出专门的文件记录。依照系统的复杂程度、清洗方法以及操作人员培训程度和能力的不同，各种清洗工作或规程所需的文件数量也会有所不同。当需要进行更为复杂的清洗过程时，必须对关键的清洗工序做出记录（如某些原料药合成工序）。在这点上，应有专门的设备记录，包括清洗人员姓名、评估时刻。然而，对于相对简单的清洗工作，仅记录“全部清洗工作差不多被执行”就足够了。其他因素，诸如清洗

12、历史、清洗后测出的残留物水平、检验结果的可变性等有时也要记录。例如，清洗之后的残留物水平具可变性，而又认定该清洗方法是可同意的，则必须证明清洗过程和工人操作的有效性。必须对清洗方法做出适当的评价，尤其是当认为工人操作有问题时，就要求有更为广泛的文件（指导）和记录，并进行更多的培训。分析方法应确定用于残留物或污染物检测的分析方法的专属性和灵敏度。借助于先进的分析技术，清洗和生产过程中极少的残留物或污染物也能够被检测出来。即使检测不出污染物或残留物水平，也并不能讲明清洗之后不存在残留污染物，而只讲明样品中没有超过该分析方法灵敏度或检验限之外的污染物。公司应对分析方法进行挑战性实验，即证明取样方法能

13、够从设备表面取回污染物，其收率是多少，如 50%, 90%等。依照取样结果再做出结论是必须的。取样技术不当也可能得出相反的结论（见下文）。 取样可同意的通用取样方法有两种。最好是直接从设备表面取样，另一种方法是取漂洗水样。a. 表面直接取样法检查取样器材的类型，以及其对检测数据的阻碍，因为取样器材可能会干扰检测。例如，取样拭子上的粘胶会干扰样品的分析。因此，在验证初期，必须确保使用适当的取样介质和溶媒（用于从取样介质中提取样品），同时方便使用。 直接取样法的优点在于：能够对最难清洗、能够到达的表面清洁程度进行评价，从而建立单位面积上残留物/污染物的同意水平。此外，还能够取到“干的”或不溶性残留

14、物样品。 b. 漂洗液样品漂洗液取样法具有两点优势：能够对较大表面进行取样；能够对到达不到的系统或日常无法拆卸的部位进行取样并做出评价。 其缺陷是：残留物或污染物可能是不溶性或吸藏在设备中的。现在，可使用“脏点”类推法进行评价。关于“脏点”清洗的评估，特不是有干的残留物的，不能只检测漂洗水样，而要检查“脏点”，从而确定清洗是否洁净。 当直接检测漂洗水样用于清洗方法验证时，应检查是否直接检测了漂洗水样中的残留物或污染物。如若仅检测漂洗水样的水质情况（即使符合药典检测方法），而不测定其可能存在的污染物，这种做法是不能同意的。 常规生产的中控c. 日常生产的中间操纵监测：一旦某清洁方法得到验证之后，

15、日常监测可使用间接检测法，如电导率检测。对于原料药生产商来讲，使用的反应罐和离心机，大型设备之间的管道连接，只能对其漂洗液取样。这种情况下，必须讲明间接检测法与设备状况的相关性。验证过程中，也应有书面证明：用间接法检测未清洗设备时，检验结果能够证明该设备不能使用以及未清洗。即该检测结果能够得出不能够同意当前设备状况的结论。（反证法） 限度的建立关于清洁方法是否得到了验证，FDA不打算建立统一的同意标准和方法。这也不切实际，因为在医药工业中，原料药、制剂产品以及设备种类太多。公司应依照自身对该药品的了解建立合理的、实际可测的残留限度。为了建立合理的限度，确定分析方法的灵敏度十分重要。已有工业界代

16、表在文献或公开演讲上提出一些检测限标准，如 10ppm；生物活性检测限标准，如正常治疗剂量的 1/1000；或感官标准，如“无可视残留物”等。要检查建立残留限量标准的方式。不同于制剂产品是已知残留物的化学成分（如来自于活性成份、非活性成份、洗涤剂等），原料药可能会有部份反应物和其他副产物不能得知。在建立残留限度时，仅关注要紧反应物的残留限是不够的，因为其它化学变量可能更难以除去。现在，除化学分析之外，可能还需要薄层等其它方法。在原料药生产中，尤其是强效化学物质，如某些甾类物质，若不使用专用设备，就必须考虑副产物残留的问题。检查的目的是确保建立任何限度的依据差不多上科学合理的。 其它问题安慰剂为

17、了评估和验证清洁方法，有些工厂在相同设备、相同操作参数下生产安慰剂（无效对照剂）。然后检测分析该批安慰剂是否受到了残留物的污染。然而，我们已记录了使用安慰剂进行清洁验证的几个问题。首先，无法确信污染物是否均匀分布于生产系统内。如出料阀或混料机泄槽受到了污染，分布于安慰剂中的污染物可能不均匀，通常会集中在出料最初时期的安慰剂中。此外，假如污染物或残留物的粒度较大，在安慰剂中的分布也可能不均匀。有些工厂假定残留物会均匀地损耗于设备表面，这也是无效的结论。最终，任何分析手段的能力都会因污染物的稀释而受到削弱。由于这些问题的存在，安慰剂验证法应与漂洗液检测或直接取样检测结合使用。清洁剂re only

18、added to facilitate cleaning during the cleaningprocess. Thus, they should be easily removable. Otherwise, a different detergent should be selected. 若使用清洁剂或肥皂清洁，应考虑检测残留物质时可能会遇到的困难。一个常见问题是清洁剂的组成成分。许多清洁剂供应商可不能提供详细的配方，使用户无法评估其残留物。与药品残留物一样，工厂也应评估该清洁过程关于去除残留清洁剂的有效性，这十分重要。然而，与药品残留物要求不同的是，清洗之后不得有任何浓度的清洁剂残留

19、（或对于高灵敏度的分析方法而言，其残留浓度必须极低）。清洁剂不是生产工序中的物质，而仅仅是用于关心清洗而加入的物质。因此，清洁剂应易于清除。否则，应选择另一种类型的清洁剂。检测直到清洁有些工厂的做法是，自清洗开始就一直重复地检测和评估多次检测结果，直到洁净为止。他们对设备和系统进行取样、检测，再取样、复测，直至得到一个“可同意”的残留水平。关于采纳通过验证的清洁方法对设备或系统进行清洗时，不应采取这种重复取样的做法。这种做法只有在极少数情况下能够同意。不断地检测和取样只能讲明，所采纳的清洁方法没有得到验证。因为不断的复测实际上反映并记录了如此一个事实，即进行低效的清洗之后，仍有超量的残留物/污

20、染物存在。Chank 实例解读：作为清洗验证（事实上是任何研究活动），事实上最核心的依旧回答以下的问题：Why? 什么缘故要做清洗操作？How to clean? 如何清洗？清洗的方法是什么? What is the criteria? 清洗到什么程度？如何推断差不多清洗洁净？What is the analysis method? 清洗的检测方法是什么？用什么方法推断差不多清洗好？When and where to sample? 取样的位置是什么？什么时刻去取样？频率和方法？围绕这几个核心的问题，就能够把握清洗确认或是清洗验证的关键了。为了讲明那个问题，我们先举一个最简单的例子。假设一个化

21、学反应是 A+B 生成 C，其中的 A+B 的反应介质是乙醇，A，B,都在乙醇中易溶 （溶解度为一毫升乙醇能够溶解 10 克以上的 A,.B）。然而 C 不能溶于乙醇在乙醇中不溶，一毫升乙醇只能溶解 0.01 克 C。然而 C 在丙酮中能够溶解，一毫升丙酮能够溶解 10 克以上的 C）反应还有一个已知的杂质 D（在乙醇中不溶，一毫升乙醇只能溶解 0.01 克 D，然而 D 在丙酮中能够微溶，一毫升丙酮能够溶解 0.1 克的 D）。反应中使用 300 公斤的 A，加上 240 公斤的 B，反应用的溶剂乙醇大约 1000 升。得到 530 公斤的 C，和大约 10 公斤的 D。一般来讲每批反应会投

22、入过量的 A，大概 330 公斤，因此最后混合物中还有残留的 A 大约 30 公斤。这是那个反应的简单描述和背景介绍。我们先假设那个反应罐（2000 升的塘玻璃罐，假设表面积达到 10.5 平方米）是专用于这一步反应的，那么我们来看看如何回答之前的那些问题：Why? 什么缘故要做清洗操作？我们什么缘故要进行清洗呢？假如我们不对那个罐进行清洗，反应后，残留在系统中的物质就有：A,B,C,D,和乙醇，这些物质关于后续批号的反应（因为是专用，就做这一步反应）来讲，差不多上潜在的污染物。考虑到反应中使用的溶媒介质是有机溶媒（乙醇）。因此首先能够排除考虑微生物的污染可能（因为微生物可不能再那个系统中生存

23、。一般只有存在水的系统才考虑微生物的污染可能性）。你看看，A可能残留的是最大量为 330-300=30 公斤，C,D由于在乙醇中的溶解度专门低，差不多上都会析出固体，而被转移出去。如此会有在容器壁上残留的可能。B由于用量低，且极易溶解于反应液中，而且不是过量的物质，即便有少量残留，确信也就在反应后残留的母液中去了，能够不考虑了。关于下一个批号（02批）的生产来讲，这些残留的 A，C，D确实是要紧的污染物。考虑到母液 1000 升，能够溶解至少 10000 公斤的 A 或 B，残留的 30 公斤 A，差不多上也都会溶解在母液系统中去了，因此能够排除 A 的残留可能性。就只需要考虑 C 和 D 了

24、。由于 C 是易溶解于丙酮的，因此即便 530 公斤的 C 都残留下来，最多需要 53 升的丙酮就能够完全溶解了。D假如全部残留，10公斤的 D 需要的丙酮大概是 100 升。比较这 两个物质在丙酮的溶解性质，我们明白至少需要 153 升丙酮才能够全部溶解 530 公斤的C 和 10 公斤的 D。然而逻辑上分析，不可能有这么多的 C 和 D 残留（否则就不要生产了,都被残留下来污染下一批的生产了）。我们假设由于转运和操作的不方便，残留的物质占全部物质的 10%，那么实际上就残留了 53 公斤的 C 和 1 公斤 D，那么只需要 15.3升的丙酮就能够完全清洗设备了。然而常识也告诉我们，关于一个

25、表面积 10。5平米的设备来讲，一个 2000L 的大罐，15.3 升的溶剂量连反应罐的底部才牵强能够覆盖如何可能去洗涤呢？因此，我们依旧会选择反应罐 1/5-1/3 的量的溶剂去洗涤,也确实是最少 400升的丙酮。我们能够发觉如此的话。400升的丙酮差不多能够完全洗涤洁净残留的东西了。到现在我们事实上还没有回答什么缘故要清洗。事实上你想假如我们不清洗，最直接的后果就是残留的 53 公斤的 C 和 1 公斤的 D 会留到下个批号 530 公斤的 C（02批）中去。我们为了降低如此的高达 10%的上个批号的残留，因此我们必须去清洗。假如那个确实确实是一个专用设备，你想，假如我们选用了 400 升

26、的丙酮清洗了。53公斤那么可能残留下去的 C（01批号）确实是 0 了，而 01 批号 C 中的杂质 D，按照之前的计算，也是可不能存在的了。如此的一个专用设备你还需要验证吗？显然是不需要了。你最多要做的确实是，用 400 升的丙酮清洗后，在用点丙酮冲洗一下设备表面，分析以下冲洗液来确认那个冲洗液中不含 D 就能够了（那个地点由于 D 和 C 在丙酮中的溶解度差 100 被，而他们的残留量就差 53 倍，因此杂质 D 变成了最差的考虑对象，只要 D 没有了，C自然就没有了。大多数的情况下，C，D的溶解度可不能差距这么大，假如有尽量考虑 C,D都易溶的溶剂来清洗，如此 C 就能够作为考虑的对象了

27、）。你完成那个部分的讨论和有一个如此的冲洗液的检测数据，就能够结束清洗确认的活了，没有 FDA 会要求你再去做更加验证的活了。假如你觉得风险差不多收到操纵了，关于专用设备，清洗方面要干的活就结束了，下面的文字你能够不看了。好了，假如你实在是没有信心，一定要验证，我们就接着回答下面的问题。How to clean? 如何清洗？清洗的方法是什么? 上面的讨论也能够看出来了，400升的丙酮自然就能够清洗洁净系统了。然而一次就够了的情况是否，能够再多做几次？那因此了。你喜爱自然能够接着。最差的情况确实是你做一次 400 升的丙酮，把罐子关闭后，搅拌丙酮，尽可能的让丙酮接触到那个罐子的所有面积，如此只要

28、残留的物料一接触那个溶剂就会溶解到里面去了。你是否需要做其他的呢？因此了。假如你情愿，你能够分几次操作（比如每次少点，每次用 200 升，洗 2-3 次？按照之前的计算差不多上能够的也是足够的），也能够采纳加热和回流的方法来增加溶解度和清洗的覆盖面（温度越高，溶解度越大）。这些差不多上你爱怎么做就如何做的了。然而不管如何，那个地点你需要定一个方法出来，一个固定的清洗方法出来，那个方法会在后续的验证取样，以及最好的操作 SOP 中变成一个固定的操作规程。比如我们选择的清洗方法是，第一次采纳 300 升的丙酮搅拌均匀 30 分钟后放料，然后第二次采纳 100 升的丙酮冲洗罐表面。然后我们回答下一个

29、问题What is the criteria? 清洗到什么程度？如何推断差不多清洗洁净？你既然洗了，你如何明白洗到什么程度确实是洁净了？是能够同意的呢？我们那个地点有几个行业的标准能够用来参考。一个确实是有名的 0.10%,确实是讲洗到残留的 01 批物料占 02批物料不超过 02 批物料总量的 0.10%, 那个是从 ICH Q3 的未知杂质标准来的。那么如果 02 批物料的批量是 530 公斤，0.10%确实是 0.53 公斤。残留的 01 批的 C 不能超过 0.54公斤，当 01 批的 C 只有 0.53 公斤的时候，其中的 01 批的 D 就只有 0.01 公斤了。那么请问那个时候你

30、需要考虑那个 01 批的D吗？它是远远低于主成分 02 批 C 的 0.10%的含量的，因此显然能够不考虑（这也是我一直讲的，主成分的杂质 D 在后续批号的标准计算的时候能够忽略不考虑的本质缘故）。好了，0.54 公斤的 01 批的 C 是我们同意的最大的残留量，那么在 10.5 平米的表面上如果 这 些 物 料 时 均 匀 分 布 的 ， 他 们 每 25 平 方 厘 米 会 残 留 多 少 量 呢 ？ 那 就 是(0.54*1000g*25)/(10.5*10000)=0.128g=128 mg. 好，我们先到那个地点，休息一下。看看另一个行业的标准。一般来讲关于那些活性物质的，潜在毒性又

31、大的物质，我们可能会用 10ppm 作为清洗差不多洁净的标准，也确实是讲01批的C残留在02批的C中不能超过02批C的量的 10ppm，那确实是最多只能残留 530kg*10ppm=5.4 克，一样每 25 平方厘米会残留多少量呢？那就是(5.4*1g*25)/(10.5*10000)=1.28 mg. 也确实是和前面的数据差了 100 倍 （事实上专门好理解，0.1%和 10ppm 确实是相差 100 倍）假如你不幸生产的物料是高活性的物料，比如抗肿瘤的东西，比如激素的东西，你明白即便是 2ppm 它的毒性、活性就有了，那么你的标准就要比 10ppm 好要低了，确实是那个数字的 1/5,也确

32、实是变成了 0.256 mg. 这确实是第三个标准，依照你的物质生物活性标准来确认。那么我们一般用的 目测标准有多么精细呢？老外专门较真，事实上有那个数据的，据讲是4mg/cm2（参考以下文献 G.L. Fourman and M.V. Mullen, Determining Cleaning Validation Acceptance Limits for Pharmaceutical Manufacturing Operations, Pharm.Technol. 17 (4), 54-60 (1993)， 那么也确实是 100mg， 你发觉没有那个和那个例子中的之前 0.1%的标准专门接

33、近。关于微生物呢？你的标准如何定呢？等下再讲。因为那个地点没有还涉及！总的来讲也确实是回答那个问题的时候你需要建立的标准确实是以上的四个标准了。这是计算的标准，实际上最好你使用的方法足够敏感能够到这些限度，否则你的标准定了也白定。因此就有了下面的一个问题需要回答了：What is the analysis method? 清洗的检测方法是什么？用什么方法推断差不多清洗好？明白了吧，你要选的是能够敏感到检测到那么低浓度的 C 的方法才能够。HPLC? 滴定？依旧 TLC？这些都不重要，只要你的方法足够敏感能够分析检测到你之前回答上个问题的限度的方法就能够。什么指标和方法的敏感度相关？LOD！因此

34、你那个方法一定要验证 LOD 的指标。你如何确认这点？这是分析方法验证的环节了，你配一个浓度的 C，1mg/ml，然后等比例 稀 释 下 去 ， 知 道 某 个 浓 度 比 如 0.5, 25.0.0625. 0.03125. 0.016mg, 0.008, 0.004mg/ml, 你发觉到 0.004mg/ml 的时候，信噪比到了 3，那么那个浓度确实是你的 LOD了。（因此可能更低！）我们如何把那个分析方法的 LOD 限度和之前假设的残留标准联系起来呢？发觉没有其实这是一个问题从两个方向拓展出来的，我们需要把他们联系起来了。就要看下面的问题回答了。When and where to sam

35、ple? 取样的位置是什么？什么时刻去取样？频率和方法？因为是验证，因此你需要再次描述你下你设定的清洗方法：第一次采纳 300 升的丙酮搅拌均匀 30 分钟后放料，然后第二次采纳 100 升的丙酮冲洗罐表面。用什么方法取样？目测？OK，然而不能作为唯一的方法。什么缘故？缘故专门简单，有些人是近视（不是每个人都能够看到 4mg/cm2），有些地点专门暗，看不清晰，有些材质表面反光，看不清晰。什么缘故不能不用那个方法？也专门简单，有些时候，你就洗不到，有些时候物料可能结块在某个地点了。目测的覆盖面会大。有许多检查官会要求你们有照明设施来看，并要求证明那些边角能够看到，确实是那个缘故。就剩下两个方法

36、了，一个确实是擦拭，一个确实是漂洗液直接取样。关于我们设定的方法，你喜爱什么取样方法呢？事实上随便你用。好吧，我们先简单的，就用漂洗液直接取样吧（具体来讲，那个漂洗的方法也需要详细描述，比如是否需要把罐体关闭状态漂洗？还是放开式的冲洗？取样的时候取的样品是漂洗后，依旧冲洗期间，这些都涉及到你具体的取样操作，需要在验证记录中详细的交代）。我们洗了两次，那就取样两次吧。为了操作的方便，我们每次就取 100 毫升漂洗液好了。因为是漂洗的方法，因此我们残留的量就不需要折算容器的面积了。第一次清洗，我们可能残留的量在这 100 毫升溶剂中的浓度时多少呢？53公斤/300 升=0.177g/ml，假如确实

37、这么高的浓度，我们之前设定的方法检测得到吗？那因此！不忘了我们的 LOD 是 0.004mg/ml。第二次漂洗呢？因为 C 的溶解度专门大（1毫升丙酮溶解10 克 C， 53公斤相当于只需要 5.3 升丙酮就能够搞定了），因此理论上 53 公斤在第一次洗涤后，差不多没有残留了，然而要明白可能之前 300 升的丙酮可不能全部流出罐外，不小心留了 1 升丙酮溶液在罐内，那确实是残留了 177 克的物料【0.177/530=0.033%】，因此第二次 100 升的丙酮溶解完这些残留的物质后，我们的取样浓度会是多少啊？等于1.77mg/ml 吧, 用我们之前的方法也是检测得出来的吧？是的，能够。那么假

38、设那个东西是这么多，确实是洗洁净了吗？第一次清洗后事实上就洁净了！【0.177/530=0.033%】,第二次假设不小心又留下来 1 升丙酮，那么确实是残留了 1000*1.77mg/ml=1.77g，确实是【0.00177/530=3.3ppm】. 除非你那个的清洗标准是低于 3.3ppm，否则显然你不需要在清洗了。关于原料药来讲，那个差不多专门洁净了。假如我们采纳的是擦拭的方法取样的，那那个地点又有了关于擦拭的方法的有效性和代表性能高的问题了。讨论代表性的时候，你就要详细交代，你打算在那个设备的什么位置进行取样？什么缘故在这些位置？什么缘故你认为这些位置能够代表整个设备的全部，并综合考虑到

39、了那些最难清洗到的部分？你需要把那个设备的结构图画出来，并在你打算取样的位置做好图示。有效性就涉及到你需要做个模拟的擦拭确认了。你要找一块和你要洗的设备材质一样的物料来（一般能够找设备制造商提供相同的物料），然后做成 25cm2如此的一个方块，然后依照认为的加入已知数量的 C 物质到那个 25cm2 中去（一般就是溶剂溶解后喷洒在表面，然后晾干），然后用一个棉签来回进行擦拭( 具体的擦拭路线，擦拭次数，甚至是用的力量大小，都需要详细的描述)。然后将那个棉签溶解到指定体积的指定溶剂中去，然后去分析那个溶剂中的 C 的浓度，算出 C 被擦下来了多少数量，那个数量和你之前喷撒的 C 的数量的比值确实

40、是所谓的擦拭实验回收率（一般能够同意的范围是 50%-130%）。当你确认了你的擦拭方法有能够同意的回收率的时候。你就能够在你选定的那几个指定的位置进行擦拭取样了。因此也一样，在第一次清洗后，你就下去取样，选取一个一样大小面积 25cm2 的区域，按照之前回收率方法一样的擦拭方法（方向，来回次数，力道大小），然后用一定体积的溶剂来溶解，然后进行 HPLC 的分析。因此你就有了一系列的数据出来了。你就明白，每个你选择的具体位置的残留量大小了。假如你的棉签差不多上溶解在 100 毫升的丙酮中的，平均回收率为 67% (建议你做至少三个浓度的回收率,涵盖你设定标准的浓度。那个回收率讲明，假如你在设备

41、表面假如实际残留了 100 克的东西，擦拭回来的东西只有 67g) 那么按照之前的计算，假如你的标准设定是 0.10%, 确实是清洗干 净 的 标 准 就 是 128mg*67%/100ml =0.86mg/ml. 如 果 是 10ppm, 那 这 个 浓 度 就 是0.0086mg/ml. 按照之前假设的 LOD 是 0.004mg/ml 的标准，这些差不多上在 LOD 之上的，因此你就不需要担心那个分析方法不能有效的分析出来了。至此，你就完成了你的验证，证明用你选择的那个方法，能够专门灵敏的检查出你的残留的 C，也能够有效的推断实际样品中是否有 C 残留了。你就能够按照设定的清洗方法去，清

42、洗三次，每次按照取样的位置和要求去取样，然后进行制定方法的分析，就会得到三组数据，来支持你推断如此的清洗是否有效的结论了。你的清洗验证就结束了。到那个地点可能你讲，我都看明白了，也专门简单，因为你设想的情况专门简单，是专用设备，又是化合物的合成反应，又不需要考虑微生物的污染。产品又可不能降解，多么理想的状态啊，因此简单了。我的清洗验证顾问讲，我们的问题专门复杂的，我们是非专用的设备，我们的辅料会降解，还会粘结成块，还会滋生微生物，用的洗涤剂还必须有效去除才可以。我们的情况用你的方法全然没有方法做的。你是简化的情况，讲起来简单，我们做起来专门难的。确实如此吗？假如你确实认为如此，那么你确实是全然

43、没有学会清洗验证的思路，我之前教你的你都忘记了。好，我们来看看什么缘故这么讲吧。我们把问题开始复杂化，在那个罐里我们还进行了另一个反应 X+Y=W（V是杂质）， X,Y在丙酮中溶解，在乙醇，水中不溶解，反应的介质是丙酮（一样是 1000 升）。生产的 W是溶解于水，微溶于丙酮的，V杂质是不溶解于丙酮的，易溶于水的。好了，那个设备不是专用的了。280公斤 X 和 220 公斤 Y 会生产出 490 公斤 W 和 10 公斤的 V 杂质。批量也不一样了。这两个系列的生产依旧交叉的。你如何清洗好？好苦恼啊，A,B,C.D 和 X,Y.W.V 有了八个物质，溶剂系统也复杂了，这么多丙酮，乙醇，水。选哪

44、个好？不急，你依旧先回答我的第一个问题吧：Why? 什么缘故要做清洗操作？因为生产 C 的时候我们不希望有残留的 A,B.D 和之前生产的 X,Y.W,V 阻碍。（那个回答和之前的就多了四个物质罢了），考虑的时候原则依旧一样的啊。你就去找另一个溶剂出来，正好能够溶解或是正好对这些所有的东西都有一定的溶解性能。比如你最后发觉，甲醇正好都能够溶解或是就 V 最难溶于甲醇（1毫升甲醇只能溶解 0.1 克 V，1毫升甲醇能够溶解 1 克 W），其他的差不多上易溶以上的。你就只需要考虑 V 了。10公斤的 V 会全部留下来？最差的情况确实是全部留下来了，那么就需要 100 升的甲醇来洗。而假设 490公斤的 W 都留下来，你就要用 490 升的甲醇来洗。显然还和往常一样，你就考虑你的W 就能够了。依旧定位啥？就用 500 升的甲醇来洗确信能够洗好了。有人讲，你如此的情况是正