高中生物选修一生物技术实践知识点总结精华

1、 比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能火菌强烈全部微生物能二.基本操作（一）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基1方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。2 倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约 1020mL倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。（二）纯化大肠杆菌微生物接种的方法最常用的是

2、 平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。稀释涂布平板法是先用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。试管口通过火焰

3、。将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。试管通过火焰，并塞上棉塞。左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线， 盖上皿盖。注意不要划破培养皿。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作， 在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。将平板倒置放入培养箱中培养。涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。取少量菌液，滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。疑难解答：1培养基灭菌后，需要冷却到 50C左右时，才能用来倒平板。你用什么

4、办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚 不烫手 时，就可以进行倒平 板了。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过度地挥发，又 可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微 生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生 物。为什么在操作的第一步以及每次划线之前

5、都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接 种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前 灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种 直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便 得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操 作者。在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数

6、目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细 菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第 2 步应如何进行无菌操作？答：应从操作的各个细节保证 “无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触 任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。（三）菌种的保存（1）对于频繁使用的菌种，可以采用 临时保藏 的方法。临时保藏方法：将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成 后，将试管放入 4C的冰箱中保藏。以后每 36个月，都要重新将菌种从旧的

7、培养基上转移到新 鲜的培养基上。缺点是这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用 甘油管藏 的方法。在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在一20C的冷冻箱中保存。课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一 基本原理：尿素 是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶。 尿素最初是从人的尿液中发现的。筛选菌株（1）实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营

8、养、温度、pH 等），同时抑制或阻止其他微生物生长。配置 选择培养基 。（2）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高 浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有 稀释涂布平板法 和显微镜直接计数 。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通 过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设

9、置 35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并 取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。二基本流程1. 土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤 表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pH- 7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约38cm的土壤层取样。样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 30300之间、适于计数的平板。 测定土壤中细菌的数量，一般选用104 105 106测定放线菌的数量，

10、一般选用103 104 105测定真菌的数量，一般选用 102 103104微生物的培养与观察 不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌3037C 12天;放线菌2528 C 57天；霉菌2528C 34天每隔 24 小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间 不足而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特 征。如形状、大小、隆起程度、颜色 .疑难解答（ 1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3 个平板，计算出平板菌落数的平均值每 ml 样品中的菌落

11、数 =（C/V ）*M 其中， C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ ml）， M 代表稀释倍数课题三 分解纤维素的微生物的分离一 基本原理1. 纤维素和纤维素酶（ 1）纤维素 是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。（ 2 ）纤维素酶 是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1 酶、 CX 酶和葡萄糖苷酶 ，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖， 为微生物的生长提供营养。纤维素分解菌

12、的筛选（ 1）筛选方法： 刚果红染色法 。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理 刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤 维二糖和葡萄糖发生这种反应。 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基 中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成， 培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤 维素分解菌。二基本流程土壤取样T选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）T梯度稀释T将样品涂布到鉴别纤维素分

13、解菌的培养基上T挑选产生透明圈的菌落土壤采集：选择富含纤维素的环境。刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤：倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板刚果红染色法种类：一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就 加入刚果红。疑难解答（1）为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。（2）将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约 10cm 左右腐殖土壤中。（ 3）两种刚果红染色法的比较方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这 样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问 题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现 假阳性反应。但这种只产生