哈蟆油质量控制方法

1、哈蟆油质量控制方法【摘要】根据历史文献和现代哈蟆油研究的成果，进展整理、分析、总结，阐述了哈蟆油质量控制现状和方法，从传统的基源鉴别开展到性状鉴别、显微鉴别、色谱法、光谱法以及生物鉴定法，尤其是现代开展较好的气相色谱、高效液相色谱、电泳色谱、PR技术以及指纹图谱技术的应用使哈蟆油的研究进入了一个更高的科学领域。对哈蟆油的鉴定手段不断的完善，为进步哈蟆油质量控制和鉴别真伪提供了根据。【关键词】中药；哈蟆油；质量控制方法药材的真伪鉴别和品质评价是临床应用、成药制备、中药科研不可缺少的前提条件。我国药材品种繁多，据统计约有一万二千多种，由于地大物博，南北差异，同名异物、同物异名的混淆品种极多，疗效各

2、不一样。而且中药的有效成分和环境、产地、采收季节等因素也有很大关系；加之近年来，假冒伪劣中药充满市场，为控制中药质量、保证临床用药平安和有效，中药鉴定技术由传统的性状鉴别，如眼观、鼻闻、口尝、手摸升华、水火试等，对药物的形状、大孝轻重、颜色、外表特征、折断面纹理、气味、黏性、酸碱性等进展正确鉴别和描绘，到现代的色谱法、光谱法、X射线分析法、热分析法、分子生物学技术等。哈蟆油vidutusRanae为蛙科动物中国林蛙RanateprariahensinensisDavid雌蛙的输卵管，经采制枯燥而得。据?中国药典?2022年版部收载，具有补肾益精，润肺养阴的成效，用于阴虚体弱，神疲惫力，心悸失眠

3、，盗汗不止，痨嗽咳血1等病症。随着中药现代化技术的开展，哈蟆油的质量控制技术也在不断的进步。1基源鉴定法基源鉴定法就是应用植物、动物或矿物形态和分类学等方面的知识，对中药的来源进展鉴定。中国林蛙的形态特征2为：体长57；头长等于或大于宽，口内锄骨齿位于肉鼻孔前方，排列成两短行；两侧耳无后腺；反面黄褐色，较平滑；腹面黄白色，胸骨平坦，下肢部两侧稍膨大；后肢长为躯体的1.5倍。几种蛙类的检索：1.膝不互交21.两膝互交32.大腿后面不具白色纵纹青蛙2.大腿后面具有一条明显的白色环纹金钱蛙3.体平扁而稍小;胫跗关节不达眼部,雄性无声囊黑龙江林蛙3.体略扁而稍大;胫跗关节前达眼部,雄性有声囊中国林蛙2

4、性状鉴别法哈蟆油呈不规那么的块状，弯曲而重叠，长1.52，厚1.55，外表黄白色，呈脂肪样光泽，偶有带灰白色薄膜状干皮。摸之有滑腻感，在温水中浸泡体积可膨胀1015倍3。气腥，味微甘，嚼之有黏滑感1。3显微鉴别法董万超等4报道了林蛙油的显微特征如下：加碘酊染色后，在显微镜下观察，呈金黄色。腺体细胞肥大，呈长椭圆形，排列整齐，细胞壁明显，靠腺体内腔一端较窄，细胞壁凸起，细胞核椭圆形，位于细胞中间稍偏向腺体内腔一面，腺体底部较宽，上端较狭，呈圆锥形。腺体内开口呈心脏形，内凹，整个腺体布满细小纹理。为鉴别哈蟆油与中华大蟾蜍输卵管、明太鱼精巢、琼脂蛋白加工品、马铃薯甘薯的伪制品提供了根据。4理化鉴别法

5、4.1荧光检查刘秀峰等5报道了哈蟆油干品在365n下呈黄色的荧光；乙醇浸出物在254n下呈蓝白色荧光4。4.2化学定性分析据报道4蛤蟆油水浸液双缩脲反响为深紫红色；加茚三酮试剂，反响为深蓝紫色。为鉴别真伪提供了根据。4.3化学定量分析1991年，刘永镇等6利用哈蟆油与Fehling试剂生成沉淀的反响，定量的鉴别了哈蟆油与其伪品蟾蜍输卵管。钱笈缔等7采用蛋白质自动分析仪测定冰糖哈蟆油中蛋白质的含量，探究了动物药制剂的指控方法。王秋雨等8采用半微量的凯氏定氮法测定了哈蟆油和青蛙油中蛋白质的含量分别为72.8和73.8。4.4光谱分析法4.4.1可见分光光度法卫功庆等9用美国产DU650分光光度计，

6、在553n下测定了哈蟆油和青蛙油中胆固醇的含量，分别为2.12，4.92g/kg，由此确定哈蟆油比拟合适中老年人服用。4.4.2紫外光谱法李明刚等10在0360n下对哈蟆油和中华大蟾蜍输卵管95乙醇浸出物进展了紫外检测，结果哈蟆油9个吸收峰分别位于4，114，129，252，256，275，311，312，314n；中华大蟾蜍输卵管8个吸收峰分别位于4，113，131，216，245，275，298，315n；王丽兰等11紫外光谱法测定了哈蟆油中总核酸的含量为2.69%，DNA为0.130.01%，RNA为2.560.05%。2022年，作者报道了采用紫外谱线组法，对不同产地和不同溶剂提取的哈

7、蟆油正品和伪品的紫外及其一阶导数光谱进展了检测，为哈蟆油的质量控制和真伪鉴别提供了根据12，13。4.4.3红外光谱法对哈蟆油的红外光谱的报道较少，丘泽雨等14对不同产地的珍珠、蟾蜍、哈蟆油、冬虫夏草、五灵脂的同种药材进展了比照研究，并用红外光谱法进展了药材真伪优劣鉴别。4.4.4原子吸收光谱法和发射光谱法王秋雨等8用原子分光光度计(VARIANAa220)和等离子发射光谱仪(日立Z-8200)测定了哈蟆油与青蛙油中微量元素和重金属的含量，结果哈蟆油与青蛙油均含有人体必需的常用微量元素,但青蛙油中重金属Pb及Hg含量超标。李媛媛等15采用等离子体发射光谱法对国产和俄罗斯产哈蟆油无机元素的含量进

8、展了分析。4.5色谱分析法4.5.1薄层色谱法刘永镇等15研究证实,用丙酮提取物乙醚萃取后的残留物,在石油醚醋酸乙酯41展开的薄层层析中,其Rf值为0.4，用展开剂苯乙醚甲醇1050.8，显色剂茴香醛冰乙酸浓硫酸11002测定,效果良好。李明刚等10采用苯乙醚甲醇1050.8为展开剂，茴香醛冰乙酸浓硫酸11002为显色剂，对哈蟆油和中华大蟾蜍输卵管进展了鉴别。赵文英等16用丙酮连续回流提取法，以石油醚：醋酸乙酯41为展开剂，36的乙酸浓硫酸11为显色剂，展距20，分别在自然光及紫外光365n下，对不同来源的哈蟆油正品以及不同种类的伪品进展了鉴别。目前，作者正在对哈蟆油进展系统的薄层色谱研究，比

9、拟不同极性的溶剂和提取方法下哈蟆油的薄层效果从而建立哈蟆油系统的薄层色谱条件，建立哈蟆油专属性鉴别方法。4.5.2高效液相色谱法李成义等17应用HPL测定了哈蟆油中磷脂的含量；多年来，作者对哈蟆油的有效成分进展了较深化地研究，已别离出了多个化合物18，其中，十六烷酸胆甾醇酯为首次从哈蟆油中提取纯化出来的，作者以十六烷酸胆甾醇酯为化学对照品，利用HPL法对哈蟆油进展了含量测定及其方法学的研究，为建立一个完好、科学的哈蟆油质量评价方法提供根据19。李津明等20采用了反相高效液相色谱技术，对10批不同来源的林蛙油药材建立了高效液相色谱指纹图谱，从而进步了哈蟆油的质量控制技术。4.5.3气相色谱-质谱

10、法赵文英等21利用气相色谱-质谱法(G-S)，对哈蟆油石油醚提取物别离出的脂肪酸进展分析，发现哈蟆油不饱和脂肪酸含量约占脂肪酸含量的40%；卢立明等22利用G-S对哈蟆油脂溶性局部的化学成分进展了研究，结果说明哈蟆油中含有多种不饱和脂肪酸和奇数碳原子脂肪酸。李成义等17利用G-S法，从吉林产哈蟆油中检定出9种酸。其中亚油酸的相对百分含量为36.05%,花生四烯酸的相对百分含量为1.63%。刘玉翠等23利用G-S法对哈蟆油的一组脂溶性成分进展分析,共别离鉴定了5种酯类化合物。季怡萍24用气相色谱(G)与气相色谱-质谱(G-S)联用技术对哈士蟆油中的脂肪酸组成进展了定性与定量分析,共鉴定出10种脂

11、肪酸并用气相色谱法作了定量。王秋雨等8利用气相色谱-质谱(G-S)测定哈蟆油与青蛙油脂类物质含量根本一致，约为6%，其中不饱和脂肪酸含量分别占其脂肪酸的77.26%和64.67%。4.6电泳分析法赵华英25采用PA-GE技术,对哈士蟆油及其伪品:黑斑蛙(习称青蛙)、中华大蟾蜍的输卵管进展酯酶同工酶和可溶性蛋白质的电泳分析。结果酯酶同工酶图谱可见：哈士蟆油共有2条谱带，A区1条三级带，B区1条一级带。黑斑蛙有7条谱带，分布在B区和区。中华大蟾蜍有2条谱带，分布在B区和区。可溶性蛋白质电泳图谱。可见哈士蟆油在区有2和62条一级带可与伪品鉴别。因为黑斑蛙只有3一级带，而中华大蟾蜍区无一级带。曾明26

12、、石俊英等27采用凝胶电泳法测得哈蟆油一级带三条，二级带两条，三级带一条，为鉴别哈蟆油与其易混品种鸡内金、蟾酥等提供了根据。5生物鉴定法5.1放射性免疫分析法林纪娴等28采用放射性免疫分析法对中国林蛙和中华大蟾蜍输卵管中睾酮的含量进展了分析；李成义17、白云等29先后采用了放射性免疫分析法测定了哈蟆油中激素的含量。5.2多聚酶链式反响PR技术杨学干等30从中国林蛙(Ranahensinensis)、中华大蟾蜍(Bufgargarizans)以及鳕鱼(Gadusarephalus)等组织材料中提取DNA，扩增出约340bp的12SrRNA基因片段，测定其序列，并参考有关序列，设计一对哈蟆油的鉴别

13、引物HsL1，HsH1，用该鉴别引物扩增蛙类原动物的模板DNA时，只有中国林蛙和黑龙江林蛙的模板能得到阳性扩增，其余样品为阴性。因此该对引物能用于哈蟆油药材来源的鉴别，对购自5个不同药材商店的哈蟆油PR鉴定结果说明，现市售商品哈蟆油有不同的材料来源，主要因为哈蟆油是由中国林蛙输卵管干制而成，这种以组织器官制成的药材鉴定难度大，易用其它动物相似的器官组织冒充,如黑斑侧褶蛙、中华大蟾蜍、鳕鱼等的输卵管或精巢等加工品。该研究得到的鉴别引物能准确地对该药材的来源加以区别。【参考文献】1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2022：179.2严启新.哈士蟆油的鉴别研究进展及资源开发J.

14、时珍国药研究,1997,8(1):78.3金胜基，阵灿辉.几种中药材简易水试鉴别法J.时珍国医国药,2000,11(5):422.4董万超，张秀莲，张宝香，等.林蛙及其油的利用概况J.特种经济动植物，1998，(2):11.5刘秀峰，纪成茂.哈蟆油及其伪品的鉴别J.海峡药学，1997,9(2):107.6刘永镇，崔顺锦，南善姬.蛤蟆油与其伪品蟾蜍输卵管的简易理化鉴别J.延边医学院学报,1991,14(2):109.7钱笈缔，王培丽.冰糖哈士蟆油质量控制初探J.中成药,1996,18(2)：43.8王秋雨，金莉莉，娄虹，等.哈蟆油和青蛙油主要营养成分的测定J.特产研究，2022,(4):37.9

15、卫功庆，杨宝田，张爱武，等.哈士蟆油与青蛙油脂肪酸及胆固醇的比拟研究J.吉林农业大学学报,1999,21(增刊):39.10李明刚，刘玉宗，宋玉兰，等.哈蟆油及其伪品的鉴别J.特产研究，1992,(4):42.11王丽兰,杨凤和,王春霖，等.哈士蟆油核酸含量分析J.中草药,1990，21(12)21.12王永生，姜大成，白雪媛，等.紫外谱线组法在哈蟆油伪品鉴别中的应用J.中成药,2022,28(9):1336.13王永生，姜大成，白雪媛，等.蛤蟆油紫外谱线组法真伪鉴别的研究J.时珍国医国药，2022,17(11):2125.14邱泽雨，郭允珍.中药红外光谱鉴别方法的研究J.中成药，1989,1

16、1(8):16.15李媛媛，胡嵘，关树文，等.采用等离子体发射光谱法对不同产地哈蟆油无机元素的含量分析J.长春中医学院学报，2002,18(4):45.16赵文英，杨祝方，侯振荣，等.哈蟆油的检查及薄层方法初探J.沈阳药科大学学报，1997,14(1):56.17李成义，金子，王琳.G/S法分析吉林产哈士蟆卵油的脂肪酸J.中国药学杂志,1994,29(1):18.18姜大成，王永生，翁丽丽，等.哈土蟆油的化学成分研究.成都：第五届全国动物药和药用动物保护学术研讨会,2002：58.19王永生，姜大成，孟勤，等.HPL测定哈蟆油中十六烷酸胆甾醇酯含量研究J.中国中药杂志，2022,30(13):990.20李津明，许婷，贾绍华，等.林蛙油的指纹图谱J.中草药，2022,36(4):591.21赵文英,侯振荣.蛤蟆油的化学成分J.沈阳药科大学学报,1996，13(4):276.22卢立明,宋少江,武勇.蛤蟆卵油化学成分研究J.中国药物化学杂志,2001，11(4):224.23刘玉翠.哈蟆油脂溶性化学成分研究J.吉林中医药,2022,25(5):56.24季怡萍.哈士蟆油中脂肪酸的G、G-S分析J.分析测试学报,1999,18(3):80.25赵华英，许欣荣，霍德兰，等.哈士蟆油及其伪品的电泳鉴别J.中药材,1998,21(3)