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文档简介
1、放射免疫技术总甲状腺素(TT4)放射免疫技术放射性核素标记抗原或抗体常用的放射性核素: 125I、131I射线,晶体闪烁计数仪 3H射线,液体闪烁计数仪方法学类型:放射免疫分析(RIA) 免疫放射分析(IRMA)实验原理*AgAb与样本中待测Ag的含量在一定范围内呈负相关,根据标准曲线可推算标本中待测抗原的含量注:*放射性物质竞争主要的试剂和器材125I-T4抗T4抗体T4标准品(0、1、2.5、5、10、20g/dl)质控血清(高值14.0918.05g/dl ,低值3.815.89g/dl )晶体闪烁计数仪(-计数仪)实验步骤1.试管编号(8只试管) 6个标准管编号分别为 B0,1,2,3
2、,4,5 质控管编号为 高,低2.加样 按照表格加试剂(l)和操作标准B0标准1-5高低标准品2525质控品2525125I-T450505050抗T4抗体50505050充分混匀,37温浴45min分离剂(混匀)500500500500充分混匀,静置15min,3500rpm离心20min弃上清,测定各管沉淀部分的放射性计数率实验结果NO.POSTIMEDOSECOUNTSCPMTOTL02300120024001330151125225024304010002000353080800160046301604008005730240100200实验数据标准曲线(lo
3、g-logit数据转化)Logit B/B0lgTT4 ng/ml0logitB/B0=(B/ B0)/(1B/ B0)计算高值和低值的浓度NO.POSTIMECOUNTSCPMConc.1830?2930?注意事项加样的顺序要严格按照操作顺序表。 加125I-T4和抗T4微球后,都要将试管中的液体摇匀。加了125I-T4的枪头直接打到垃圾桶里。加完试剂务必及时盖上盖子。加分离剂之前,要将试剂充分混匀。离心后弃上清的方法为将上清倒掉后,马上将试管倒扣在吸水纸上,静置5min,不能拍打试管。方法学评价1、高灵敏度(pg/ml)2、放射性污染3、标记物半衰期短导致试剂有效期短。4、标记物稳定性差,导致试剂盒批间、批内的变异较大;标准曲线有效期短,必须每次定标,造成浪费。5、操作繁琐,出报
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