高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量

1、高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量【摘要】目的建立用高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量。方法采用依利特SinhrDS-BP柱(4.6200，5)，以乙腈-磷酸二氢钠溶液(2872)为流动相，在345n波长进展测定。结果盐酸小檗碱在0.081.30g线性关系良好，平均回收率为98.59%，RSD=2.74%(n=5)，重复进样RSD=1.55%(n=5)。结论该方法简便、快捷、准确，灵敏度高，可以作为该制剂的质量控制方法。【关键词】消糖灵胶囊盐酸小檗碱高效液相色谱法“消糖灵胶囊标准收载于?中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂?，标准编号为S3-B-2026，是由人参、

2、黄连、黄芪、天花粉、杜仲、枸杞子、五味子等11味中药加优降糖组成的方剂，具有益气养阴、清热泻火、益肾缩尿的成效，可用于治疗糖尿病1。本方中黄芪、天花粉为君药；人参、知母、枸杞子为臣药；黄连、白芍、沙苑子、五味子、杜仲、丹参为佐药。其中天花粉、枸杞子采用高效液相法进展含量测定的方法尚不成熟；黄芪和知母需要蒸发光散射检测器2测定，而多数消费企业不具备该设备；人参需要在203n处梯度洗脱测定3，经过实验发现重复性、稳定性差，故对佐药黄连进展含量测定。黄连主要有效成分中小檗碱含量最高。本实验以盐酸小檗碱为标准物质进展含量测定。1仪器与试药美国惠普HP1100高效液相色谱仪，HP1100色谱工作站；盐酸

3、小檗碱对照品(中国生物制品检定所,批号110713-200208，供含量测定用)。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件4，5色谱柱为依利特SinhrDS-BP柱(4.6200，5)；柱温35；流动相为乙腈-磷酸二氢钠溶液(pH=5.0)(2872)；流速1.0lin-1；检测波长345n。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精细称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含盐酸小檗碱400g的溶液，摇匀，即得对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品内容物约5g，研细过80目筛，精细称取0.51.0g,置50l量瓶中，加盐酸-甲醇110040l，超声

4、处理30in，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。2.2.3阴性对照液的制备按处方比例配制缺黄连的阴性对照品，同供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。2.3系统适用性实验的考察依上述方法，测得盐酸小檗碱对照品、供试品及阴性对照品的色谱图(见图13)。结果在该色谱条件下，供试品在对照品色谱保存时间相应处有一样色谱峰，而阴性对照无干扰；样品可得到较好的别离，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算大于3000。2.4线性关系考察精细汲取对照品溶液2，4，6，8，10，20l依次进样，按测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3682.4X

5、+15.645,r=0.9998，说明盐酸小檗碱在0.080.8g范围内线性关系良好。2.5精细度实验精细汲取盐酸小檗碱对照品溶液,重复进样5次，50l/次，依法测定峰面积值，其RSD=0.15%。结果说明，仪器精细度良好。2.6稳定性实验精细汲取同一供试品溶液，分别于0，1，3，5，12h进样5l，依法测定峰面积值，其RSD=1.20%。结果说明，供试品溶液在12h内稳定。2.7重复性实验精细称取同一批(批号040602)样品5份，按供试品溶液项下制备，每份样品测定2次，计算RSD=1.55%。结果说明，供试品溶液的制备方法重复性良好。2.8加样回收率实验精细称取含量(4.85gg-1)的样

6、品共5份，分别精细参加对照品适量，依法测定，每份测定两次，计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果略表1结果说明，本法平均回收率98.59%，RSD=2.74%，说明本法准确度较好，方法可行。2.9提取方法的考察6,72.9.1方法1取本品适量，研细(过80目筛)，精细称定约1.0g，置50l容量瓶中，加盐酸-甲醇(1100)45l，60水浴中加热15in，取出后超声30in，放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，0.45微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.9.2方法2取本品适量，研细(过80目筛)，精细称定约1.0g，置50l容量瓶中，加盐酸-甲醇(1100)45l，60水浴中加热15in，

7、取出后超声60in，加甲醇至刻度，摇匀，0.45微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.9.3方法3取本品适量，研细(过80目筛)，精细称定约1.0g，置50l容量瓶中，加盐酸-甲醇(1100)45l，60水浴中加热15in，取出后超声30in，加甲醇至刻度，摇匀，0.45微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述3种方法提取后测定结果相似，考虑到节省时间等因素选择方法3为提取方法，并列入正文。2.10样品含量测定结果取10批样品，依法制备供试品溶液，每批2份，精细汲取供试品溶液20l，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算5批样品的含量。结果见表2。根据表2中10批样品的含量测定结果，考虑到原

8、材料的质量的差异和工艺过程中复杂因素的影响，暂定本品每克含黄连以盐酸小檗碱计不得少于3g。2.11药材含量测定取黄连药材粉末(过3号筛)0.5g，精细称定，置50l容量瓶中，加盐酸-甲醇(1100)45l，60水浴中加热15in，取出后超声30in，加甲醇至刻度，摇匀，0.45微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。分别精细汲取对照品溶液10l及对照药材溶液10l，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品药材中盐酸小檗碱的含量。结果见表3。表210批样品中盐酸小檗碱的含量测定结果略表3黄连药材中盐酸小檗碱含量测定结果略根据以上结果，暂定黄连药材按枯燥品计算，含盐酸小檗碱不得少于4.0%，符合?中

9、国药典?2022年版部“黄连项下含量限度要求。3讨论3.1测定波长的选择取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升中含0.1g的溶液，于紫外可见分光光度计在200500n波长范围内进展扫描，结果在345n波长处有最大吸收，应选定检测波长为345n。3.2流动相的选择分别选择水-冰醋酸-三乙胺-乙腈(600.30.840)、乙腈0.05lL-1-磷酸二氢钠溶液(pH=5.0)(2872)为流动相，结果乙腈:0.05lL-1磷酸二氢钠溶液(pH=5.0)(2872)别离效果较好，故确定为本法的流动相，并列入正文。【参考文献】1苗明三.现代实用中药质量控制技术.北京：人民卫生出版社，2000：142.2李江，李颖倩.黄芪甲甙分析方法研究概况J.北京中医，2000，4(50):26.3曹泰山，王丹.人参皂苷Rg与人参皂苷Re含量测定方法的研究J.时珍国医国药，2022，16(8):739.4李清，王璐，戴荣华，等.高效液相色谱法测定黄连解毒汤中盐酸小檗碱的含量J.西北药学杂志，2022，19(2):51.5余少婷，黄红雯.HPL测定黄