同济医院检验科ISO15189体系文件01抗核抗体(ANA)测定

1、同济大学附属同济医院检验科免疫组项目操作指导书TJYYJYKMY/XMZ701第2版标题：抗核抗体(ANA)测定第7章 第01号第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页1. 目的：检测血清标本中的抗核抗体。2. 适用范围：同济医院检验科免疫室。3. 项目名称：抗核抗体测定。4. 方法：间接免疫荧光法。5. 检测原理: 固定在生物薄片载片反应区上的Hep-2细胞和灵长类肝脏冰冻切片与稀释后的血清温育。如果标本阳性，IgA，IgG，IgM类特异性抗体与核抗原结合，在第二步，结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体反应并可用荧光显微镜观察。 试剂：6.1 品牌：德国欧蒙。6.2 包装规格：50人份

2、；30人份。6.3 内含物：6.3.1 10张生物薄片载片，每张有52个覆有Hep-2细胞和灵长类肝组织复合片的生物片。6.3.2 0.3m1荧光素标记羊抗人IgG浓缩液，使用时用PBS-Tween缓冲液1:5稀释。6.3.3 0.lml阳性对照血清，直接使用。6.3.4 0.lml阴性对照血清，直接使用。6.3.5 3.0ml封片介质 (磷酸盐缓冲甘油PH8.4)。7 仪器品牌、型号： OLYMPUS荧光显微镜(病理科提供)。8. 操作步骤：8.1 打印工作单:8.1.1 打开电脑及打印机电源，8.1.2 双击齐效检验系统，登陆工号与密码；8.1.3 双击报告处理，单击标本申请信息打开标本申

3、请明细信息查询，打开左上角的所有信息，选择未生成报告信息。8.1.4 在检验项目处选择ANA执行查询，点击打印申请单，打印出工作单。8.2 排列待测标本:根据工作单上的库位号从标本架中找出相应标本，并按工作单上的 顺序排列在样本架上。8.3 按以下步骤开始操作:8.3.1 准备：生物薄片达到室温时方可打开包装。不要触摸生物薄片，对每块玻片编一个顺序号。8.3.2 稀释:用PBS-Twen缓冲液将待测血清1：101稀释，每次实验均需阳性、阴性对照。8.3.3 加标本:将加样板放在泡沫塑料板上，加25ul稀释血清至加样板每一反应区，避免气泡。加完所有标本后开始温育。8.3.4 温育:将生物薄片盖在

4、加样板的凹槽里，反应开始。确保每一样品均与生物薄片接触且样品间互不接触。室温温育30分钟。8.3.5 冲洗：用烧杯盛 PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片载片，然后立即将其进入装有PBS-Twe缓冲液的小烧杯中至少一分钟。不必混摇。8.3.6 加试剂:从PBS-Tween缓冲液中取出一张生物薄片载片，滴加20ul荧光素，标记抗人球蛋白(结合物)至一洁净加样板的反应区，完全加完方可继续温育。荧光素标记抗人球蛋白使用前需混匀，用PBS-Tween缓冲液稀释。8.3.7 温育:将生物薄片载片避光温育30分钟。8.3.8 冲洗:用烧杯盛 PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片载片，然后立即将其浸

5、入装有PBS-Tween缓冲液的小杯中至少一分钟。8.3.9 封片:将盖玻片直接放在泡沫塑料板的凹槽里。滴加甘油/PBS至盖玻片;每反应区约101ul，从PBS-Tween缓冲液中取出一张生物薄片载片，用纸擦干背面私四边，不要擦拭反应区间隙。将生物薄片载片面朝下放在已准备好的盖玻片上，立即查看并调整使盖玻片欠入载里片的凹槽，然后进行下一张。8.3.10 结果判读：荧光显微镜下观察。8.4 结果：8.4.1 1:40无荧光反应：阴性，血清标本申末检出抗核抗体。8.4.2 1:40或更高：阳性，提示有不同类型的疾病或其他疾病。8.5 发送报告：详见免疫报告发送程序。9. 参考范围：正常人阴性。10. 临床意义：己证实抗核抗体对很多自身免疫性疾病有诊断价值，这些抗体在不同疾病中有特征性，特别是风湿性疾病。主要有：自身免疫性疾病 发生率系统性红斑狼疮(SLE)活动性 95-100%非活动性 85-100%药物诱导的红斑狼疮 100%混合性结缔组织病 (MCTD) 100% 类风湿性关节炎 20-40%其他风湿性疾病 20-50%进行性系统性硬化症 85-95% 多肌炎和皮肌炎 30-50%干燥综合症 70-80%慢性活动性肝炎 30-40%溃疡性结肠炎 26%11. 病人准备、标本要求：标本为血清时最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。12. 注意事项:12.1 接受标本后不能及时检测