血清二氧化碳酶反应终点法测定

1、血清二氧化碳酶反应终点法测定.实验原理Vitros CO 2试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的 化学干片。将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。分布层中的高PH值能确保 样品中所有的CO2以碳酸氢盐的形式存在。碳酸氢盐分布到凝胶层中，在磷酸烯醇式丙酮 酸羟化酶的作用下被用来羟化磷酸烯醇式丙酮酸，生成草酰乙酸和无机磷。反应最后是苹 果酸脱氢酶氧化NADH及还原草酰乙酸，生成NAD+和苹果酸。本干片要在37 c下孵育。样 品中的CO2浓度是通过用反射光谱法测定未反应的NADH的吸光度来确定的。测定方式：酶反应终点法波长：340nm测试时间和温度：37 c约

2、5分钟反应过程：磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶碳酸氢根+磷酸烯醇式丙酮酸-草酰乙酸 +磷酸根苹果酸脱氢酶草酰乙酸+ NADH + H +苹果酸+ NAD.标本：2.1 病人准备：无特殊。样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。标本采集与处理：血清和血浆样品：特别要注意的是：不要用枸檬酸盐作抗凝剂。不要从正在静脉注射 的手臂上采血。采血时尽量将真空管装满，否则测试结果最多会偏低3mmol/L。样品采集 后4小时内要离心标本，吸出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。.标本的存放：血清、血浆室温下密封保存最多24小时；48 c冷藏最多3天；-18 C 冷冻保存可长达1个月。.标本的运输：样品要放在带盖的容器内

3、以防污染和蒸发，不加盖的样品杯在空气中放 置1小时，CQ浓 度最多 要偏低6mmol/L 。.标本拒收的标准：污染、抗凝剂不符合要求，标本放置时间过长。. 试验材料：测试CO2所需的物品包括：Vitros 化学定标物Kit2 ; Vitros 特制质控液；生理盐水 稀释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。试剂组成：干片成分：反应成份有磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶，苹果酸脱氢酶，磷酸 烯醇式丙酮酸和NADHo其它成份有粘合剂，缓冲齐I，抑制剂，染色剂，稳定剂，表面活性 剂和聚合物交叉连接剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代

4、码， 有效期限和储藏温度。试剂准备 从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏 器之前必须使其达到室温状态1828 C。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放 置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去 除内包装后立即将干片盒放 入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在28c或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过4周，否则要更换新试剂。 当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出 现以下情形要做质控检 测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪

5、器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros CO 2干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITROS 250 干化学分析仪试剂 稳定性及贮存.SOP文件。变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物 刺入内包装。校准品：用Vitros 化学定标物Kit2 。血清，尿液和脑脊液都用相同的定标液，不过 各自的SAVs值不同。有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参 阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当与别

6、的CO2 测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高 浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙 烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能 使用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质 控品.SOP文件。.仪器美国强生厂家VITROS250全自动干式生化分析仪。具体测试程序请参阅操作手册的介 绍。.操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。具体 测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP。具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。 何时进行定标：在维护和保养时更换了仪器的重要部件。质控

7、结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6 个月定标一次。.检验结果的判断与分析.质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时 进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关 性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际 质控检测（IQCT ）的内容。在每一批标本中都应把质控血清作为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控 操作规程.SOP文件。.计算方法：以用Vitros 化学定标

8、物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直 接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。. 参考值范围国际单位（mmol/L）血清/血浆22-30mmol/L此参考范围是测试60位健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。参考值因性 别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己 的参考值。.临床意义：碳酸一碳酸氢盐缓冲系统是人体中维持血液PH平衡的重要缓冲系统。进 行总二氧化碳（即碳酸氢盐加上溶解的二氧化碳）测定，再结合临床及实验室的其它测试 值，可用于确定人体酸碱平衡的失调。患呼吸性酸中毒，代谢性碱中毒和碱摄入过量都会 造成总CQ升高。CQ浓度下降见于代

9、偿性呼吸性碱中毒，代谢性酸中毒和肾功能失调使氢 离子排泄不掉而导致的CO2降低。.操作性能线性范围：血清5.0-40mmol/L。精密度：在Vitros 250生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。 当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都 会影响结果的重复性。日间精密度血清x(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)室间精密度n=20 天X(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)样品1 n=78270.5样品1270.72.5样品2 n=78130.4样品2130.53.9*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测

10、试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。方法学比较：用Vitros700 仪器和康宁965型分析仪测总二氧化碳的方法分别测试相同血清样品， 对比结果显示Vitros 方法的准确度 良好。用Vitros250 仪器与Vitros700 仪器测试相同 的血清样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度良好，血清：Y=0.97X+0.23（ r=0.993,N=90 ,检测范围 6.8-28.4mmol/L）。灵敏度：本试剂的检测下限为血清5.0mmol/L 。特异性：经测试，以下物质对 VitrosCO 2干片法均无干扰（偏差1.9mmo

11、l/L ）。扑热 息痛20mg/dL、乙酰乙酸20mg/dL、乙酰水杨酸50mg/dL、a -酮已酸20mmol/L、氨基水杨 酸60mg/dL、氨0.5mmol/L 、精氨基琥珀酸20mmol/L L、维生素 C 3mg/dL、苯甲酰胺20mmol/L、 苯 磺酸盐 20mmol/L、苯甲酸 20mmol/L、苯甲醇 20mmol/L、胆红素（未 结合）20mg/dL 等 等。病人结果可报告范围：血清5.0-40mmol/L。.超出范围结果处理：本法线性上限为血清40mmol/L。如果样品中CQ浓度超出系统的 测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用生理盐水稀释，重新测试，将测试 结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中CQ的浓度。.病危报警值的处理.方法局限性本法线性上限为血清40mmol/L 。如果样品中CO2CP浓度超出系统的测试线性范围， 请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用生理盐水稀释，重新测试，将测试结果乘以稀释倍 数，就得到原始样品中CO2CP的浓度。干扰物质：乳酸脱氢