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文档简介
1、细胞中过氧化物酶的显示与观察( peroxisome)电镜下的过氧化物酶体电子致密的核心是尿酸氧化酶的结晶,即类核体过氧化物酶体包括2种酶类:氧化酶(oxidases) 约占过氧化物酶体酶总量的一半;各种氧化酶作用于不同的底物;将氧还原成过氧化氢。 RH2 + O2 R + H2O2过氧化氢酶(catalase)是过氧化物酶体的标志酶;约占过氧化物酶体酶总量的40%;作用是将过氧化氢还原成水。 RH2 +H2O2 R + 2H2O 使毒性物质失活这种作用可氧化各种底物,如酚、甲酸、甲醛和乙醇等,氧化的结果使这些有毒性的物质变成无毒性的物质,同时也使H2O2进一步转变成无毒的H2O。这种解毒作用
2、对于肝、肾特别重要, 例如人们饮入的乙醇几乎有一半是以这种方式被氧化成乙醛的,从而解除了乙醇对细胞的毒性作用。实验原理氧化还原酶类的原位显示:根据氧化还原的原理,使无色的化合物氧化成有色的物质得以定位。过氧化物酶体系能把许多胺类氧化成有色化合物。本实验用联苯胺混合液处理标本,过氧化物酶可将其氧化为蓝色或棕色产物。根据颜色反应,可判定过氧化物酶的有无或多少。RH2+ O2 R + H2O2H2O2 + RH2 R + H2O联苯胺 联苯胺蓝 联苯胺腙 (蓝色) (棕色) 过氧化物酶系能把许多胺类物质氧化为有色化合物: 因而可以根据颜色反应来判定细胞中过氧化物酶的有无或多少!过氧化物酶的显示 2H
3、2O2 2H2O+O2过氧化氢酶 细胞代谢过程中会产生H2O2,细胞中的过氧化氢酶,能使H2O2分解,生成H2O放出O2。过氧化氢酶的显示 实验步骤实验一:取洋葱鳞片表皮一薄片; 置于0.85NaCl溶液中35分钟;浸在溶有0.1%钼酸胺的0.85NaCl溶液中5分钟;在使用联苯胺溶液前,联苯胺中每2ml加10%的过氧化氢2滴;浸在联苯胺溶液中2分钟,至切片出现蓝色为止;在0.85%NaCl溶液中洗1min;将薄片置于载玻片上展开,盖上盖玻片(可省),显微镜检查。 实验二: 取马铃薯块茎一个,用徒手切片法切取一小薄片置于载玻片上,滴加3的过氧化氢溶液。 用煮熟的马铃薯重复上述过程,结果如何?1涂片,固定于0.5%硫酸铜水溶液2分钟。2不水洗,直接入联苯胺液(含过氧化氢)2分钟。3水洗数次。4甘油明胶封片(可省),镜检。实验三(动物):实验结果 1、在显微镜下可见到细胞中有一些染成蓝色或棕色的颗粒。即为过氧化物酶存在的部位。 2、 滴加了过氧化氢溶液的马铃薯组织四周出现气泡,提示植物中过氧化氢酶的存在。过氧
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