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文档简介

贴壁细胞传代及待转染细胞准备11、首先将超净工作台用紫外光灯照射灭菌20-30分钟22. 关闭超净工作台内的紫外光灯，点燃酒精灯(一切操作均需在酒精灯火焰下进行)33.将消毒过的所用物品放入超净工作台中44.将培养好的HeLa细胞培养皿放入超净工作台中55.用无菌吸管将细胞上原有的培养液吸净； 66. 取1毫升0.25%胰酶消化液放入培养皿中； 77.将加有胰酶消化液的培养皿放入37温箱中消化1分钟； 88.从温箱中取出培养皿后，用手轻轻拍打培养皿的边缘； 99.用倒置式显微镜观察细胞是否完全脱落；1010.待细胞完全脱离后，加入适量的含血清的培养基终止反应（一般为5:1） 1111.用吸头多次吹打，以使细胞完全散开为止，此悬浮液作为细胞母液； 1212.在显微镜下进行细胞计数 1313.按5106细胞密度接种细胞，即吸出1ml细胞母液(5106)加入新的培养皿中1414.再用吸管吸取9ml含有血清的培养液到培养皿中； 15.将培养基和细胞的混合物轻轻摇匀；16，在工作台上静止一会儿后，将培养皿迅速置于CO2培养箱中。37条件下培养12小时后用于细胞转染； 15

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