电子教案与课件：生化分离原理与技术-6-单元融合及创新

1、第七章 单元融合及创新江南大学生物工程学院第三篇 分离技术的融合与集成融合和创新在基本分离技术的基础上产生为更高效的应用服务OR为新颖而创新？生物分离技术：技术和艺术的结合集成指为达到某一目标，组合分离技术，形成高效工艺有效设计、实验验证回顾生物物料的预处理离心过滤细胞破碎沉淀技术萃取技术膜分离技术层析技术电泳技术蒸发和干燥技术上游设计催化转化变性复性检测和评价方法第七章 单元融合及创新概述亲和沉淀技术膜层析技术与双水相集成的分离技术混合模式吸附层析扩张床吸附层析概述单元融合分离技术是指把两种或两种以上的分离技术合成为一种更有效的分离技术目标：提升分离效率、提高产品收率、降低过程成本不经意间离

2、心过滤技术等电点下的盐析超临界流体色谱技术。亲和沉淀（Affinity precipitation）：是利用蛋白质与特定的生物合成分子（免疫配位体、基质、辅酶等）之间高度专一的相互作用而设计出来的一种特殊选择性的分离技术。是蛋白质类生物大分子相互亲和作用与沉淀分离相结合的分离纯化技术。一 亲和沉淀技术常用的亲和作用体系体系类型配基目标配体高特异性体系酶酶抑制剂、酶底物类似物、辅助因子抗原抗体核酸互补碱基链段、组蛋白、核酸聚合酶荷尔蒙受体、载体蛋白群特异性体系凝集素多糖、糖蛋白、细胞表面受体、细胞过渡金属离子蛋白质酶蛋白A、G抗体肝素脂蛋白、脂肪酶、甾体受体、限制性核酸内切酶、凝血蛋白、抗凝血酶

3、三嗪类色素脱氢酶激酶、血清白蛋白、干扰素、核酸酶、糖解酶回顾：亲和对可逆溶解性聚合物（SIS聚合物）可逆溶解性聚合物: Reversibly Soluble Polymers(RS聚合物)；或称为Soluble and Insoluble Polymers(SIS聚合物)这类聚合物的溶解与非溶解状态可随环境参数如pH、温度等的变化而发生可逆变化，因此可被用于酶与蛋白质的亲和沉淀或可逆固定化分离过程一定条件下就可形成沉淀，通过过滤或离心的方式进行分离，然后将酶或蛋白从亲和配体一SIS聚合物上解离下来。混合-亲和吸附-改变条件沉淀-离心或过滤-解离-离心1、带同种电荷的多聚电解质。通过静电亲和作用

4、形成SIS聚合物一蛋白质共聚物。类型2、带亲和配基的多聚化合物。专一性更强的亲和 形成SIS聚合物一亲和配体一靶蛋白的共聚物。例1：利用聚合脂质体的沉淀可逆性固定STI及其PL-STI对胰蛋白酶的亲和作用 通过双功能试剂戊二醛、二甘醇二酸酐和1,4-丁二醇双缩水甘油醚等将大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）固定到由二十五-10,12-二炔-1-醇磷脂乙醇胺形成的聚合脂质体（PL）上 沉淀条件：0.14-0.25M的盐（NaCl、KCl、NH4SO4等） 胰蛋白酶收率20%60%，PL-STI 可作为酶的亲和沉淀吸附剂。 亲和配基偶联到聚合物的过程例2：壳聚糖亲和沉淀壳聚糖：酸溶、碱沉淀，离子交换作用p

5、H6.5以下溶解态，pH6.9与杂蛋白形成沉淀壳聚糖亲和沉淀-活性炭吸附-DEAE Sephadex A-25 柱层析三步法分离纯化藻蓝蛋白壳聚糖和活性炭结合使用，可使藻蓝蛋白纯度( A620 /A280 ) 由0.93提高至2.78。通过DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶柱层析后，可得到高纯度藻蓝蛋白，纯度达4.3。涉及到的基础技术： 膜分离技术 层析技术二 膜层析技术介质刚性不够、易被压缩，难以获得较高的处理速度，也不易进行线性放大；床层内易产生沟流，传质效果较差；配基价格昂贵却不能充分利用，只有1%-2%的配基与蛋白质结合；吸附柱易堵塞和污染，往往只适用于间歇操作，处理量相对

6、较低，操作时间较长。传统的液相层析的缺点传统的膜分离技术的优缺点分离速度快、操作压力低、无相变、能耗低、易于放大和连续操作、基质来源广泛且价格相对较低等优点靠筛分机理分离，对目标产物与杂质大小相近的混合物分离显得无能为力膜层析技术将对生物大分子有特异性和选择性的功能基团连接到膜的表面及孔壁中去，从而制备一种新型的层析介质，称为膜层析介质（或称为膜吸附剂），利用膜对物料的筛分和功能基团的作用进行的分离技术称为膜层析技术膜层析技术是液相层析和膜分离相结合的一种新技术，融合了二者之长具有快速、高效、高选择性、易于放大等特点满足一般情况或者特殊情况下生物大分子高效分离与纯化的需要采用具有一定孔径的膜作

7、为介质，连接配基，利用膜配基与蛋白质等目标分子之间的相互作用进行分离纯化当料液以一定流速流过膜的时候，目标分子与膜介质表面或膜孔内基团特异性结合，而杂质则透过膜孔流出，待处理结束后再通过洗脱液将目标分子洗脱下来，其纯化倍数可达数百乃至上千倍原理与普通的膜技术相比： 不仅利用膜孔径的大小，更主要的是利用其特异性和选择性，不受相对分子质量大小的限制特点与液相层析技术相比： 由于在膜孔基质上配基与液流之间扩散路径极短，传质极快，分离时间显著缩短，分离效率提高； 由于膜的空隙率大，其孔表面积很高，膜的厚度很薄就能满足分离要求，造成液流通过膜的压力降低； 由于膜的元件都是标准的，膜层析等集成技术易于放大

8、，便于实现大规模连续分离和自动操作。特点（1）亲和膜分离两个分支：亲和膜分离技术，制备带有亲和配基的分离膜，直接进行产物分离；亲和错流膜过滤，将水溶性或非水溶性高分子亲和载体与产物进行特异反应，然后用膜进行错流过滤。亲和膜分离技术（一般意义）亲和膜分离(Afinity Membrane Separation)是将亲和层析与膜分离技术结合起来以提高过程选择性的一项新型分离技术。亲和膜技术的研究始于20世纪中期，自1991年Klein的亲和膜(Affinity Membrane)专著出版以来，促进了对亲和膜技术的研究，在基膜材料改性、亲和配基偶联、亲和膜组件设计、过程动力学以及亲和膜应用方面都有了

9、较大的发展，但还有许多问题有待进一步深人研究。亲和膜分离示意亲和膜制备即通过适当的化学反应，在膜表面接上可反应的官能团或者是一定长度的“间隔臂”选用一个适合的亲和配基(Ligand)，在一定条件下让其与间隔臂分子产生共价结合，生成带有亲和配基的膜分离介质。常用的亲和膜载体材料脂族烃类(聚乙烯、聚丙烯)芳香族共聚物(聚碳酸酯、聚砜、聚醚砜)脂族聚酰胺(尼龙6、尼龙66)以及一些特殊的聚合物，如聚乙烯醇、纤维素。亲和配基（1）特异性配基：只与其对应的分子发生特异性结合，如抗原、抗体、抑制剂、激素、激素受体等;（2）通用型配基：能与某一类物质结合，如三嗪类染料活性染料（辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NA

10、D+ )类似物）能与许多需要这种辅酶的酶结合亲和分离需解决的几个关键问题 膜表面要有足够多并可利用的化学基团(一般为一OH基)，使其能进行活化，接上合适的间隔臂和配基。要有足够数量可利用的化学基团则必需有足够高的表面积，以便于让生物大分子自由地出入膜，必需有足够大的孔径。孔分布应窄而均匀，以获得高的通适量和分离效能。为了实现快速分离，常要加压操作，因此要求膜有一定的机械强度，能承受力，长期使用不变形。亲和膜要耐酸、耐碱、耐高浓度的缓冲浪和有机溶剂。操作方式亲和超滤亲和微滤亲和超滤分离目标物的同时，浓缩其他成分亲和微滤仅分离目标物亲和-膜过滤 (Affinity filtration) ，是19

11、81年由Hedda等人首先提出并得到迅速发展的一种新型大规模分离纯处技术。既充分利用了载体上的配基对目标组分的专一的可逆的亲和吸附作用和超滤膜分离易于实现大规模生产的优点，又克服了超滤膜分离技术对分子质量相近的大分子无法实现分离的缺点亲和-膜过滤（狭义上）示意图1示意图2亲和-膜过滤过程及其关键问题亲和载体：亲和载体的结构包括一个由对生物分子无特异吸附性的物质组成的内核以及内核表面上连接的某些特定基团，这些基团必须对所提取的蛋白质有一定的特异吸附性。分类：水溶性大分子载体水不溶性微载体水溶性大分子载体 优点:亲和载体与目标蛋白在均相体系中反应速率快,达到吸附或洗脱平衡的时间极短,吸附容量大水不

12、溶性微载体 非水溶性载体的种类较多,据报道可用的非水溶性基质有各种菌类的完整细胞(酵母、芽孢杆菌、链球菌等细胞)、纳米硅石微粒、琼脂糖、凝胶、脂质体等也均被作为基质使用过。亲和载体与目标分子的结合在亲和-膜过滤过程中,亲和载体与目标分子之间的结合可能存在弱的共价键、离子键、分子键和配位键的作用。亲和-膜过滤应用亲和- 膜过滤技术应用在分离和纯化蛋白质、酶方面已经有很多成功的例子。朱家文等用DextranT2000 ，经环氧氯丙烷交联并氧化产生部分羧基，偶联对氨基苯甲脒制得水溶性亲和载体，来纯化的尿激酶。孙彦等研究了脂质体的制备，并利用对氨基苯甲脒修饰的脂质体有效地纯化了胰蛋白酶。亲和膜过滤纯化

13、伴刀豆蛋白A的实验装置热杀死酵母细胞作为载体截断相对分子量 106随着生物医药工业的发展,生物医药的分离纯化成为一个研究热点,亲和-超滤膜分离技术在手性药物、抗生素等的分离与纯化方面得到了一定程度的应用。例如：以D-丙氨酰-丙胺酸为配基连接到水溶性的聚合物葡聚糖上,将其作为亲和载体来分离糖肽抗生素-万古霉素。离子交换膜是膜状的离子交换树脂。离子交换膜包括三个基本组成部分：高分子骨架，固定基团可交换离子（反离子）（2）离子交换膜层析（IMC）原理离子交换膜层析主要是利用膜介质表面的离子交换基团与目标蛋白之间的离子交换作用进行分离的。根据离子交换基团的性质，可分为强阳离子型、弱阳离子型、强阴离子型

14、、弱阴离子型。由商用膜改性制得的膜介质，其成本相对较低。在流速较慢的情况下，还可通过梯度洗脱分离蛋白质的混合物。离子交换膜层析由于操作条件较温和，可以有效地保持蛋白质的活性，并可延长膜的使用寿命，其缺点是选择性较差。与电渗析相区别共性：均使用离子交换膜区别： 离子交换膜层析：超滤或者微滤方式 电渗析：离子选择透过离子交换膜为主要特征，纳滤或者反渗透膜为主按电荷分:阳离子交换膜：活性基团：磺酸基（-SO3H）磷酸基（-PO3H2）羧酸基（-COOH）砷酸基（AsO32-）等；阴离子交换膜：活性基团：伯、仲、叔、季胺基（脂肪胺与芳香胺）-NH3+、 -RNH2+、 -R2NH+、-R3N+按膜结构

15、划分: 异相膜半均相膜均相膜目标分子膜介质配基人尿激肽释放酶纤维素膜N（CH3）3人肿瘤坏死因子GMA季胺基寡聚核苷酸GMA-EDMADEAE免疫毒素改性纤维素CM溶菌酶GMASO3H-Mg凝血酶原纤维素膜DEAE卵白蛋白、人血清白蛋白、胰岛素抑制剂甲壳素膜EGDEBSA交联改性纤维素磺酸基乳清蛋白交联改性纤维素磺酸基、季胺基离子交换膜层析的应用研究实例例：IMC纯化DNA质粒和肽链等生物分子采用甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）为基质，二乙氨乙基(DEAE)为离子交换基团，在5mL/min的流速下有效地分离了四种寡聚核苷酸(长度分别为8，10，12和14个核苷酸)。还在同样的基质接上-SO3-基

16、团后，用于肽链的分离。例：蛋清中分离溶菌酶通过射线引发接枝获得甲基丙烯酸缩水甘油酯GMA膜，先在中空纤维膜上接入环氧基团，然后通过亚硫酸钠接入SO3H基团，再与镁离子交联，制成离子交换膜介质，膜的蛋白质平衡容量可达到0.42g/g以NaHCO3-NaOH缓冲液为洗脱液，在pH为9.0时洗脱率达到100%。由于膜上螯合了Mg2+，使得膜的透过速率也有较大增加。例：人凝血酶原分离采用纤维素膜共价连接DEAE的径向IMC，从血浆的分离物(Nitschmannfrac- tion)中分离人凝血酶原样品的通过速率为2030mL/min，在不降低分离效率的前提下，洗脱速率达到40mL/min。这种膜还可用

17、于DNA、多肽和其它蛋白质的分离。由于疏水配基结构简单，通用性好且成本较低，故疏水层析已成为蛋白质分离纯化的常用技术之一。但是，目前常用的疏水层析大多采用琼脂糖凝胶、葡聚糖等“软”基质，分离速度不够理想，且不易放大，疏水膜层析就是在此基础上发展起来的。疏水膜层析上的配基，常用的有甲基、丁基、苯基、辛基、己二胺、聚乙二醇等，通过目标物质与这些配基之间疏水作用的不同而实现分离。影响疏水膜层析操作情况的主要因素有:盐离子的种类，离子强度，pH和柱温等。（3）疏水膜层析目标蛋白膜介质配基牛肝过氧化氢酶纤维素膜苯基牛血清白蛋白纤维素膜苯基热原纤维素膜己二胺肌球素、核酸酶、溶菌酶和胰凝乳蛋白酶十二烷基甲基

18、丙烯酸酯-GMA-EDMA共聚物十二烷基牛血清白蛋白聚乙烯膜苯基人肿瘤坏死因子QuickDisk丁基、苯基疏水膜层析的应用研究实例三 与双水相集成的分离技术双水相萃取技术 双水相是由于聚合物分子的空间阻碍作用，相互间无法渗透，当聚合物的浓度达到一定值时，就不能形成单一的水相，当两种聚合物在排斥力作用下达到平衡时，就形成了稳定的两相，两种聚合物分别位于两个互不相溶的两相中。 体系具有生物相容性生化工程中常用的双水相体系（1）双水相萃取与层析技术结合在某一种聚合物上衍生一定的功能配基，不但使体系具有双水相处理量大的特点，而且通过离子交换或亲和作用，增大分配系数。离子交换双水相亲和双水相等配料发酵液

19、 亲和配基对聚乙二醇4000(PEG4000)的羟基进行活化，以亚氨基二乙酸(DA)为螯合剂，制取含有Cu2+的金属螯合亲和配基PEG-DA-Cu(II)，并以PEG和羟丙基淀粉(PES)形成双水相，用于直接处理含纳豆激酶的发酵液，如图6.6所示，经过两次分配分离流程后，纳豆激酶的总收率为81%，纯化倍数达到3.52。例1 纳豆激酶的双水相纯化例2 PEG-色素/Aquaphase-PPT(一种淀粉的羟丙基衍生物的商品名)系统从猪肌组织中连续萃取乳酸脱氢酶（LDH）1、猪肌组织直接在成相系统中匀浆，固形物分配在下相，而目标产物分配在上相。2、用离心机分相后，上相用纯下相溶液清洗一次，进入第二个

20、离心机。3、从第二个离心机流出的上相与磷酸钠溶液(50%，pH6.97.0)混合，形成PEG/磷酸钠双水相系统。4、由于LDH与色素的亲和作用下降，LDH被反萃到下相(磷钠溶液)中得到回收，而上相的PEG和PEG-色素返回匀浆机中循环再利用。将双水相萃取同生物转化结合在一起，可解决在许多生物转化中存在的两个问题： a) 产物抑制 b) 酶的重复利用（2）双水相萃取与生物转化结合示意图例1 木质素经过酶水解生产乙醇Bartlett等实现了在双水相系统中-甘露糖苷酶催化糖基转化合成低聚糖。Andersson等研究了在PEG/DEX系统中利用枯草杆菌进行流化发酵生产-淀粉酶，比普通发酵的酶产率提高了

21、63%。其他例子四 混合模式吸附层析混合模式吸附层析（Mixed Mode Chromatography，MMC），又称多模式层析（Multy Mode Chromatography， MMC ） 包含两种或两种以上的作用模式，能够与目标生物分子发生多种相互作用的层析方法。混合模式吸附介质上配基的功能往往具有互补性或协同性，因此它能够适应某种特殊条件下对蛋白质的捕获，或者产生类似于群特异性的亲和吸附效果。混合模式吸附技术发展历程 “表面活性剂”型疏水层析离子交换型混合模式层析疏水性电荷诱导层析离子交换型混合模式层析示意和示例离子交换型混合模式层析介质配基的结构亲硫作用层析20世纪60年代，Po

22、rath等发现吸附剂配基中硫原子的重要作用。1985年，Porath等制备“T-gel”，并正式将该层析方法称为亲硫作用层析（thiophilic interaction chromatography，TIC）高盐下吸附，低盐下洗脱但是与HIC不同的是，“T-gel”配基具有很好的亲水性，对蛋白质的吸附并不是单纯依靠疏水作用。此外，亲硫层析介质对抗体有特异的选择性，但对血清蛋白等吸附作用很弱 疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge induction chromatography, HCIC )1998年首次由Burton和Harding 提出典型HCIC介质（MEP Hyp

23、erCel）和吸附洗脱示意：可在含一定量的盐或者无盐下吸附,具有Salt-independent配基密度若40 mmol/ml ，则无吸附与免疫球蛋白的保守区中的Trp、Phe等残基有特异性吸附,主要用于抗体的分离，代替Protein A配基pH主导的HCIC介质与蛋白质的作用机理pH5pH7pH12pH4pH2介质配基目标物质产物来源MEP HyperCelMEP单抗CHO细胞悬浮液MEP HyperCelMEP单抗小鼠腹水MEP HyperCelMEP单抗山羊奶MEP HyperCelMEP多抗兔血清MEP HyperCelMEP多抗兔血清MEP-SepharoseMEP类风湿因子、抗双链

24、DNA抗体人血清MEP HyperCelMEPFc融合蛋白混合溶液MEP HyperCelMEP单抗和Fc融合蛋白CHO细胞MEP HyperCelMEP唾液蛋白唾液MEP HyperCelMEP前列腺特异性抗原精浆MEP HyperCelMEP重组肉毒杆菌神经毒素片断毕赤酵母MEP HyperCelMEP青霉素酰基转移酶大肠杆菌HCIC的应用例子Protein A亲和介质：目前最为常用的抗体亲和层析介质，曾占到所有抗体纯化工艺的70-80%，其局限性：1）Protein A亲和介质十分昂贵，是常规层析介质的10倍左右；2）介质再生困难，重复使用次数有限；3）抗体吸附容量不高；4）Protei

25、n A配基易脱落，来源于细菌表面的毒素，影响分离效果和产品质量；5）需要低pH洗脱（pH 3左右），易造成抗体聚集；6）Protein A-抗体的亲和力过强，容易引起抗体结构的变异。“仿亲和”的HCIC介质：）化学配基价格相对便宜，与常规层析介质相当；）配基稳定，再生容易，可多次重复使用；）MEP HyperCel的洗脱pH在4左右，且添加精氨酸等物质可在中性条件下实现洗脱；）亲和力适中，不易引起抗体结构变异。）目前，静态吸附较Protein A高，但动态吸附相对较低；HCIC与传统Protein A亲和对比相同点：通过亲和作用与抗体的Fc片段特异性结合，减低溶液pH实现洗脱。不同点：VS五

26、扩张床吸附层析扩张床吸附层析（Expanded Bed Adsorpation, EBA）是一种新型的层析操作方式，即结合了传统的流化床（Fluidized Bed）的进料方式，又接近于固定床（Packed Bed）的层析性能，可能看成是一种新型的集成分离技术特点用途：集成化扩张床、流化床和固定床的比较操作方式操作原理能否处理含颗粒的料液上样方式吸附效率优缺点扩张床料液接近平推流通过床层，返混小能自下而上好需特制的介质和装置流化床料液和介质充分混合，返混大能自下而上不好为达到一定吸附率，需循环上样固定床流体以平推流通过床层不能自上而下好确证可行，已广泛工业化扩张床床层基质的特性密度、粒径及其分

27、布和结构组成基质的结构A，核壳型；B，混合型；C，均一型商品扩张床介质介质生产公司组成和类型密度g/ml粒径,m/平均粒径,m功能基团StreamlineAmersham Biosciences琼脂糖-石英砂核壳型基质1.2100300/200DEAE, Q, SP, CM, Chelating, Phenyl, Heparin, rProtein AStreamlineDirect HST IAmersham Biosciences琼脂糖-不锈钢混合型基质1.880165 /130混合模式UpfrontFastline ProUpfrontChromatographyA/S琼脂糖-碳化钨混合

28、型基质2.53.520200离子交换、混合模式HyperzPALL凝胶-氧化锆“Gel in shell”3.240105 /75离子交换扩张床吸附技术的操作(1) 平衡 扩张床在每次吸附操作前需用平衡缓冲液扩张，让扩张床扩张到一定程度，并使其达到平衡。在此阶段，基质的功能基团亦达到平衡。在扩张过程中，需要确定一个合适的扩张率E（定义为扩张床床层高度H与沉降床高度H0之比）。扩张率太低，会使料液中的固体颗粒通过困难，造成局部堵塞；扩张率过高，流速太大，会导致液相返混增加，吸附效率降低。一般认为，扩张床吸附层析操作的合适扩张率为23。另外，维持一个最低的沉降床高度，对消除进口处不均匀流化的影响，

29、获得稳定的、返混程度小的床层十分重要，床层稳定时理论塔板数一般为170200 N/m，轴向混合系数在10-6m2/s数量级。(2) 吸附 待平衡操作结束后，迅速将进样口由平衡缓冲液切换成料液，开始上样吸附。由于原料液的粘度和密度一般要高于平衡缓冲液，若维持上样流速不变，床层高度就会增加。因此，为保持扩张率不变，需要降低流速；而在吸附过程后期，由于吸附了目标产物和一些杂质，基质颗粒的密度有所增加，此时需要增加流速来维持原来的扩张率。也可以维持不变、根据扩张高度的变化来调节上分布器的位置。Chang等对这两种操作方式作了比较，认为前一种方式较佳，可以获得较高的动态吸附容量。(3) 清洗 吸附操作结

30、束以后，介质内外不可避免地残留了部分料液和杂质，因此在对目标产物洗脱前，需先进行清洗操作。清洗一般仍采用扩张床方式，维持上样时的流速不变。清洗液可使用平衡缓冲液或高粘度缓冲液。采用后者可以减少清洗液的用量，同时保证清洗液以更接近于平推流的方式流过床层，获得更好的清洗效果。(4) 洗脱 洗脱是层析过程的关键步骤。扩张床层析过程有两种洗脱方式，即固定床方式（自上而下）和扩张床方式（自下而上）。如果介质与目标产物之间的结合力较弱，产物主要吸附在床层的下半部分，应采用固定床方式洗脱；如果介质的吸附容量已经达到饱和，产物相对均匀地分布于整个床层之中，则采用扩张床洗脱方式更为有效。两种洗脱方式各具特色，采

31、用固定床方式不仅可以减少洗脱液的用量，增加产物的浓度，还可以避免目标产物的过度稀释，但缺点是洗脱时间长，操作过程复杂，介质颗粒会聚集，影响其再度扩张；而采用扩张床洗脱方式的优点是过程简单，操作方便、迅速，不会造成介质的聚集，设备简单，有利于工业化控制，可以实现连续化操作。(5) 再生 再生必须在洗脱之后马上进行，是必不可少的一环。扩张床介质比传统的固定床介质更容易遭到细胞、细胞碎片、脂类、核酸等杂质的污染，这往往引起吸附容量的降低和介质颗粒之间的聚集，使介质的流体动力学特性和吸附性能的重复性不佳。再生操作首先由配基性质而定，与固定床介质的再生方式基本相同；其次根据扩张床介质的基球性质，需避免对

32、基球结构和材料的破坏。一般商品介质给出了最优的再生方案扩张床吸附技术的应用目标产物产物来源吸附剂收率纯化倍数纳豆激酶枯草杆菌Streamline SP93%8.7-乳清蛋白脱脂牛奶Streamline Phenyl人Fab片断重组大肠杆菌Red Fastmabs90%8.7融合蛋白重组大肠杆菌Streamline SP7080%100GST-(His)6重组大肠杆菌Streamline Chelating80%3.3乳酸脱氢酶猪肉浆Cibacron Blue Celbeads100%31Kinesin-(His) 6重组大肠杆菌Streamline Chelating100%-半乳糖苷酶重组大肠杆菌Streamline Chelating86%6人纤维生长因子重组大肠杆菌Streamline SP87%17人表皮生长因子重组大肠杆菌Strea