第二章食用菌三级菌种制作技术

1、第二章第二章 食用菌制种技术食用菌制种技术 v关于制种的几个概念关于制种的几个概念第一节第一节 制种场地、设备、用具及消毒药品制种场地、设备、用具及消毒药品 第二节第二节 三级菌种制作技术三级菌种制作技术v本章重点本章重点4.5学时有关概念有关概念n 菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。菌种：由人工方法培育出来的纯双核菌丝体。n 母种：由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。母种：由孢子或者组织分离而得到的最初菌种。n 原种：将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体。原种：将母种扩大到新培养基上培育出来的菌丝体。n 栽培种：由原种再扩大接种一次培养而得。直接应栽培种：由原种再扩大接种一次培养而得

2、。直接应用于生产。用于生产。n 消毒和灭菌。消毒和灭菌。母 种原 种栽培种第一节第一节 制种场地、设备等制种场地、设备等一、制种场地一、制种场地二、常用设备二、常用设备三、制种用具三、制种用具四、消毒药品四、消毒药品一、一、制种场地制种场地闲散房屋均可用。新建时选择场地要注意：交通闲散房屋均可用。新建时选择场地要注意：交通方便，水电齐全，周围环境要卫生。方便，水电齐全，周围环境要卫生。建造可参照建造可参照 “”字型房字型房，以方便生产。包括：，以方便生产。包括：配料室、灭菌室、冷却室、接种室、菌种培养室、配料室、灭菌室、冷却室、接种室、菌种培养室、销售室以及库房等。销售室以及库房等。二、二、常

3、用设备常用设备（一）（一）拌料和装料设备拌料和装料设备（二）（二）灭菌设备灭菌设备（三）（三）接种设备接种设备（四）（四）培养设备培养设备 （一）（一）拌料和装料设备拌料和装料设备v 拌料设备拌料设备：可人工拌料，也可用拌料机，：可人工拌料，也可用拌料机，有桶式和开放式两种。有桶式和开放式两种。v 装料设备装料设备：人工装料或用装瓶装袋两用机。：人工装料或用装瓶装袋两用机。关键是料的松紧度，可关键是料的松紧度，可3-53-5人合作，约人合作，约10001000袋袋/h/h。（二）（二）灭菌设备灭菌设备v根据灭菌压力：高压灭菌设备和常压灭菌设备。根据灭菌压力：高压灭菌设备和常压灭菌设备。v 高压

4、灭菌特点：高压灭菌特点：温度高温度高，灭菌速度快，灭菌彻底，灭菌速度快，灭菌彻底，但每次灭菌量小，投资较大。但每次灭菌量小，投资较大。 高压灭菌设备：手提式高压灭菌锅。立式高高压灭菌设备：手提式高压灭菌锅。立式高压灭菌锅。卧式高压灭菌锅。压灭菌锅。卧式高压灭菌锅。v常压灭菌特点：容量大常压灭菌特点：容量大(0.5-1(0.5-1吨料吨料/ /次次) )，投资，投资小，但时间长，灭菌效果较差。小，但时间长，灭菌效果较差。 常压灭菌设备：常压灭菌设备：常压灭菌灶常压灭菌灶、灭菌室、灭菌室或灭菌包或灭菌包（可利用节能型多功能蒸汽炉或普通锅炉）（可利用节能型多功能蒸汽炉或普通锅炉）。（三三）接种设备接

5、种设备n 洁净工作台：适合接母种和少量原种。洁净工作台：适合接母种和少量原种。n 接种箱：成本低，容量较大，适合各级菌种。接种箱：成本低，容量较大，适合各级菌种。n 接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。接种帐：适于接栽培袋，但效果稍差。n 接种室：与接种帐类似。接种室：与接种帐类似。n 电炉和蒸汽接种：简易，成功率电炉和蒸汽接种：简易，成功率80%80%以上。以上。（四）四）培养设备培养设备n 培养室培养室：要清洁卫生，有调温设备。可用于原种、：要清洁卫生，有调温设备。可用于原种、栽培种培养，要做一些培养架，便于菌种检查和栽培种培养，要做一些培养架，便于菌种检查和提高空间利用率。提高空间利用率。

6、n 电热恒温培养箱：温度可调，容积小。电热恒温培养箱：温度可调，容积小。三、三、制种用具制种用具、酒精灯；、酒精灯； 、托盘天平；、托盘天平；、地泵；、地泵； 、水桶、盆、铝锅；、水桶、盆、铝锅；、镊子；、镊子； 、接种钩和接种铲；、接种钩和接种铲；、试管、菌种瓶和菌种袋；、试管、菌种瓶和菌种袋；、漏斗；、漏斗； 、电炉或煤炉；、电炉或煤炉；v另外，还需温度计、湿度计、量筒和量杯、另外，还需温度计、湿度计、量筒和量杯、磨口瓶、塑料绳、报纸以及磨口瓶、塑料绳、报纸以及pHpH试纸等。试纸等。四、消毒药品四、消毒药品1. 75%酒精酒精 2. 40%甲醛高锰酸钾甲醛高锰酸钾3. 汽雾消毒剂汽雾消毒

7、剂 4. 高锰酸钾（高锰酸钾（0.1%-0.2%）5. 5%石炭酸石炭酸(苯酚苯酚) 6. 1%-2%来苏儿来苏儿7. 2%-5%漂白粉漂白粉 8. 硫磺硫磺v各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。各种药品最好轮换使用，以防产生抗药性。第二节第二节 三级菌种制作技术三级菌种制作技术一、母种制作技术一、母种制作技术（一）（一）母种培养基制备母种培养基制备 （二）组织分离法（二）组织分离法（三）母种的扩大（三）母种的扩大二、原种制作技术二、原种制作技术（一）原种培养基的制备（一）原种培养基的制备 （二）原种的制作（二）原种的制作三、栽培种制作技术三、栽培种制作技术（一）栽培种培养基制备（一）栽培种

8、培养基制备 （二）栽培种的制作（二）栽培种的制作四、菌种污染的原因及防止措施四、菌种污染的原因及防止措施一、母种制作技术一、母种制作技术n 培养基的概念培养基的概念n 常用的母种培养基配方常用的母种培养基配方n 母种培养基的制作母种培养基的制作（一）母种培养基的制备（一）母种培养基的制备1.1.培养基的概念培养基的概念培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种培养基是按照食用菌生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。营养，用人工方法配制而成的营养基质。2. 母种培养基配方母种培养基配方(g/1000ml)除配方除配方1 1，其它均需加入，其它均需加入KHKH2 2POPO4 43

9、3克，克，MgSOMgSO4 41.51.5克，克，VBVB1 12 2片。片。 编号土豆棉籽皮木屑发酵料麸皮葡萄糖琼脂蛋白胨120020202200202031001005020202-1041001005020205520020205-103.3.母种培养基的制作母种培养基的制作PDAPDA培养基的制作过程：培养基的制作过程： 煮土豆，取滤液。开锅后，文火煮煮土豆，取滤液。开锅后，文火煮3030minmin，适当适当搅拌，使营养充分溶出。搅拌，使营养充分溶出。 补足水，加药品溶化。琼脂溶解较慢并易溢锅，补足水，加药品溶化。琼脂溶解较慢并易溢锅，烧开后减小火力并搅拌烧开后减小火力并搅拌1mi

10、n1min左右。左右。 分装试管。常用试管为分装试管。常用试管为18mm180mm，每管约，每管约装培养基装培养基8-10ml。加棉塞后。加棉塞后3个一把绑好。个一把绑好。 高压灭菌。在高压灭菌。在1.1-1.2kg/cm2压力下灭菌压力下灭菌30-40min。灭菌程序：灭菌程序：放入物品，拧紧锅盖加热，当压力达放入物品，拧紧锅盖加热，当压力达到到0.5kg/cm2时，排出冷空气，关闭放气阀。压力时，排出冷空气，关闭放气阀。压力上去后记时，维持所需时间。上去后记时，维持所需时间。 摆斜面。灭完菌后，锅体自然冷凉，压力降到摆斜面。灭完菌后，锅体自然冷凉，压力降到0.5kg/cm2以下时，缓慢放气

11、，气排尽后取出试以下时，缓慢放气，气排尽后取出试管，趁热摆斜面，管，趁热摆斜面，40以下即可凝固。以下即可凝固。母种培养基制作流程母种培养基制作流程（二）菌种组织分离法（二）菌种组织分离法n 组织分离的概念、种类和特点组织分离的概念、种类和特点n 组织分离的方法组织分离的方法 1.1.组织分离的概念、组织分离的概念、种类和特点种类和特点v 概念：概念：是指在双核菌丝的组织上切取一块组织，是指在双核菌丝的组织上切取一块组织，使其在培养基上萌发而获得纯双核菌丝体的方法。使其在培养基上萌发而获得纯双核菌丝体的方法。称作原始母种。称作原始母种。v 种类：种类：据切取组织的来源，分为子实体组织分离、据切

12、取组织的来源，分为子实体组织分离、菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。菌核、菌索组织分离和基内菌丝组织分离。v 特点：特点：简单易行；为无性繁殖。简单易行；为无性繁殖。2.2.平菇子实体组织分离方法平菇子实体组织分离方法n 培养基制备。培养基制备。n 种菇选择：是指用来进行组织分离的子实体。种菇选择：是指用来进行组织分离的子实体。要选择适宜出菇期出菇早、出菇整齐、形态正要选择适宜出菇期出菇早、出菇整齐、形态正常、无病虫害、产量高的栽培袋，从上选择肥常、无病虫害、产量高的栽培袋，从上选择肥大、肉厚、大、肉厚、6 6成熟的幼嫩子实体，切去多余菌柄。成熟的幼嫩子实体，切去多余菌柄。n 接种场地消毒

13、。接种场地消毒。n 种菇处理：表面消毒。种菇处理：表面消毒。n 接种过程接种过程：双手表面消毒，把种菇带入接种箱，：双手表面消毒，把种菇带入接种箱，点燃酒精灯，种菇表面消毒后从中间纵向撕开，点燃酒精灯，种菇表面消毒后从中间纵向撕开，用无菌小镊子夹取菌柄、菌盖交界处的菌肉，迅用无菌小镊子夹取菌柄、菌盖交界处的菌肉，迅速放入培养基上，塞上棉塞。速放入培养基上，塞上棉塞。特殊种类特殊种类：灵芝、：灵芝、金针菇、鸡腿菇等。金针菇、鸡腿菇等。n 培养。适宜条件下，培养。适宜条件下，2-3天组织块上即萌发出菌丝，天组织块上即萌发出菌丝，8-10天可长满。期间要检查，从中选留无污染、天可长满。期间要检查，从

14、中选留无污染、菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。菌丝洁白浓密、长速正常的菌种。 基内菌丝组织分离以及菌核和菌索的组织分离过基内菌丝组织分离以及菌核和菌索的组织分离过程类似，只是所取部位不同。程类似，只是所取部位不同。 原始母种还可转接扩繁原始母种还可转接扩繁3-4次，以增加母种量。次，以增加母种量。 长满后暂时不用的母种要置于长满后暂时不用的母种要置于2-5下冷藏。下冷藏。（三）母种的扩大（三）母种的扩大n 培养基的制备（同前）培养基的制备（同前）n 接种场地的消毒灭菌（同前）接种场地的消毒灭菌（同前）n 母种的扩大母种的扩大n 培养培养3.3.母种的扩大母种的扩大q要严格无菌操作。母种试管表面消

15、毒，然后靠近要严格无菌操作。母种试管表面消毒，然后靠近灯焰用接种钩将母种横切成若干份，再用接种铲灯焰用接种钩将母种横切成若干份，再用接种铲将横切的母种分成将横切的母种分成2-32-3份，取一份带份，取一份带1 1 2mm2mm厚的厚的培养基放入新的培养基斜面上。培养基放入新的培养基斜面上。4.4.培培 养养q在适宜条件下培养。在适宜条件下培养。2-32-3天后，检查菌丝的生长天后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况，若在接种块或培养基表面上出及杂菌污染情况，若在接种块或培养基表面上出现独立的小菌落或奶油状小点，即为污染，应立现独立的小菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰。即淘汰。二、原种制作技术二

16、、原种制作技术（一）原种培养基的制备（一）原种培养基的制备（二）原种的制作（二）原种的制作（一）原种培养基的制备（一）原种培养基的制备1.1.常用原种培养基配方常用原种培养基配方(%)(%)麦粒预处理：麦粒预处理：冷水浸泡冷水浸泡1212小时后水煮，开锅后文火小时后水煮，开锅后文火2020minmin左右，麦粒左右，麦粒煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。煮透，胀而不破，用水冷却后沥干表面水分，拌入石膏即可。 编号编号 麦粒麦粒 棉子皮棉子皮木屑木屑麸皮麸皮玉米面玉米面蔗糖蔗糖石膏石膏1982265332377-8720-101248210512541411512682151

17、22.2.原种培养基制备原种培养基制备n 选定配方。分别称取各物质。选定配方。分别称取各物质。n 加水拌料。含水量约加水拌料。含水量约60%65%，料水比约，料水比约1:1.31.5。关键是拌匀，用量少的水溶性物质。关键是拌匀，用量少的水溶性物质要先溶于水，再拌入料中。要先溶于水，再拌入料中。n 装瓶。常用容器为装瓶。常用容器为750ml罐头瓶或菌种瓶，每瓶罐头瓶或菌种瓶，每瓶装干料装干料2.53两。料要装匀，松紧适度，装至瓶两。料要装匀，松紧适度，装至瓶肩下肩下1cm处，料面压平。处，料面压平。n 打洞封口。擦净瓶口，中央打直径打洞封口。擦净瓶口，中央打直径2cm的孔至瓶的孔至瓶底。用两层报

18、纸和一层聚丙烯膜封口。打洞可底。用两层报纸和一层聚丙烯膜封口。打洞可增加料底透气性。增加料底透气性。n 灭菌：高压灭菌或常压灭菌。灭菌：高压灭菌或常压灭菌。v常压灭菌：视灭菌量，需常压灭菌：视灭菌量，需810h以上。以上。注意：注意：一是培养料量要适中，物品排列合理，保证蒸汽一是培养料量要适中，物品排列合理，保证蒸汽流通。二是大火猛烧，防止压力忽高忽低。三是流通。二是大火猛烧，防止压力忽高忽低。三是灭菌后闷灭菌后闷46h再出锅。再出锅。v高压灭菌：高压灭菌：1.41.5kg/cm2压力下灭压力下灭1.52h，压压力不稳或压力低时要延时。力不稳或压力低时要延时。高压灭菌应注意高压灭菌应注意：n

19、灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会产生假蒸汽压。灭菌锅内冷空气必须排尽。否则会产生假蒸汽压。n 培养基必须排放有序，蒸汽畅通。培养基必须排放有序，蒸汽畅通。n 灭菌完毕应缓慢减压。自然降温或缓慢排气，防灭菌完毕应缓慢减压。自然降温或缓慢排气，防止液体突然沸腾弄脏瓶塞，或瓶、袋胀破。止液体突然沸腾弄脏瓶塞，或瓶、袋胀破。n 棉塞防湿。灭菌时棉塞不能接触锅壁，并盖报纸棉塞防湿。灭菌时棉塞不能接触锅壁，并盖报纸或防水纸，防止冷凝水打湿棉塞。或防水纸，防止冷凝水打湿棉塞。（二）原种的制作（二）原种的制作v场地消毒：将料瓶和用具放入接种箱熏场地消毒：将料瓶和用具放入接种箱熏0.52h。v接种接种：母种表面消

20、毒后带入接种箱，点燃酒精灯，：母种表面消毒后带入接种箱，点燃酒精灯，再次对试管外壁消毒。在灯焰范围内，用接种钩再次对试管外壁消毒。在灯焰范围内，用接种钩将母种分成将母种分成46份，取一份放入料面中部，封口。份，取一份放入料面中部，封口。两人合作既好又快。两人合作既好又快。v培养：在适宜条件下培养。定期检查。菌丝长满培养：在适宜条件下培养。定期检查。菌丝长满后，再继续培养后，再继续培养35天。天。三、栽培种制作技术三、栽培种制作技术（一）（一）栽培种培养基的制备栽培种培养基的制备v培养基配方：与原种培养基可以相同。培养基配方：与原种培养基可以相同。1. 菌种袋规格：选用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料菌

21、种袋规格：选用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料袋。袋。1732cm，一端开口，每袋装干料一端开口，每袋装干料6两。两。1740cm，两端开口，每袋装干料两端开口，每袋装干料1斤。斤。n拌料装袋，注意：拌料装袋，注意：n 料松紧度适宜；袋壁光滑。料松紧度适宜；袋壁光滑。n 料面要平，中间打孔，以利通气。料面要平，中间打孔，以利通气。n 绳要绑紧，尽量排除袋内空气，防止涨袋。绳要绑紧，尽量排除袋内空气，防止涨袋。n灭菌：与原种相同。灭菌：与原种相同。（二）栽培种的制作（二）栽培种的制作n 场地消毒：同前。场地消毒：同前。n 接种方法接种方法：双手表面消毒后进入接种箱；原种：双手表面消毒后进入接种箱；原种表

22、面消毒，放于三角架或空瓶上，瓶口表面消表面消毒，放于三角架或空瓶上，瓶口表面消毒、火焰灭菌；用镊子把菌种扒成毒、火焰灭菌；用镊子把菌种扒成1-2cm小块，小块，均匀接于料面，绑口。均匀接于料面，绑口。n接种时注意：接种时注意：n接种过程应在酒精灯旁进行。接种过程应在酒精灯旁进行。n每瓶原种接栽培种每瓶原种接栽培种1015袋袋(两头接种两头接种)或或50瓶瓶左右。左右。n接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。接种用具使用前表面消毒，火焰灭菌。n接完种后，据接种量确定封口松紧度。接完种后，据接种量确定封口松紧度。n 培养：同原种。培养：同原种。三级菌种生产的工艺流程三级菌种生产的工艺流程四、菌种污染原因及防止措施四、菌种污染原因及防止措施（一）常见杂菌种类：细菌、酵母菌、放线菌和（一）常见杂菌种类：细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。霉菌。（二）污染原因及防止措施（二）污染原因及防止措施v培养基灭菌不彻底。表现为瓶壁和袋壁上出现培养基灭菌不彻底。表现为瓶壁和袋壁上出现杂菌菌落。原因：灭菌压力或时间不足，或者杂菌菌落。原因：灭菌压力或时间不足，或者高压灭菌时锅内空气没有排尽。高压灭菌时锅内空气没有排尽。措施措施：锅内空气排尽；保证灭菌压力和时间。：锅内空气排尽；保证灭菌压力和时间。v菌种带杂菌。表现为