高中生物选修复习

1、果酒制作原理：酵母菌在有氧条件下，进行有氧呼吸，大量繁殖；在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精和CO2。菌种酵母菌：、真核生物（真菌）；、异养兼性厌氧；、腐生生活，属于分解者；、在营养条件良好时行出芽生殖，在不良条件可以进行有性生殖；20 左右最适合酵母菌繁殖（酒精发酵时一般将温度控制在1825 ）；、生活环境：含糖较高的偏酸环境，特别是土壤中。菌种来源：传统发酵使用的酵母菌主要来源于附着在葡萄皮上的野生型酵母菌；工业生产中为更好地抑制其它微生物的生长、提高果酒品质一般使用人工培养的菌种。果酒制作过程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒装瓶：加入的葡萄汁量不超过发酵瓶容积的2/3。防止杂菌污染：葡萄应冲

2、冼后去枝梗；榨汁机用温水清洗、晾干；发酵瓶要清洗干净后，用体积分数为75%的酒精消毒；注意排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖，避免空气中微生物进入发酵液等。及时排气：由于酒精发酵过程会不断产生CO2，导致发酵瓶内压力增大发酵条件的控制：温度严格控制在1825，时间在1012天左右。发酵过程中的变化：、有机物总量减少、种类小分子有机物（如氨基酸等）增多；、发酵液密度减小（发酵过程中有CO2放出，溶液中物质总质量减少）；、发酵液中不断有气泡（CO2）产生，pH减小；、酒精含量增加；、酵母菌数量出现增长稳定衰亡特征。酒精的检测原理：酒精遇酸性重铬酸钾反应出现灰绿色方法：2mL发酵液3滴3mol/L

3、H2SO4（振荡后），常温下饱和的3滴重铬酸钾溶液（振荡观察）。对照组方法以等量培养液代替发酵液，其它与实验组相同。（注意：先加酸，振荡后再加高锰酸钾！）1. 果醋的制作果醋制作原理：醋酸杆菌在有氧条件下利用糖或乙醇氧化成醋酸。总公式：、在氧气、糖源都充足时：C6H12O62O2 2CH3COOH2CO22H2O能量酶、当缺少糖源时：C2H5OHO2 CH3COOHH2O能量酶菌种醋酸杆菌：、原核生物；、分裂生殖；、异养需氧型，对O2特别敏感，短暂缺氧可能导致醋酸杆菌的死亡，因此，发酵过程中要特别注意通气；、菌种来源：传统发酵来自于变酸的酒表面菌膜。果醋制作过程：挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发

4、酵果醋氧气控制：（先密闭制酒，）后通气制醋。制酒菌种：传统上来自附着在葡萄外的野生型酵母菌；发酵条件：制酒阶段：1825，1012d；制醋阶段：通气，3035，78d2. 腐乳的制作腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的以蛋白酶为主的各种酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，脂肪酸与醇类作用生成酯。主要菌种：毛霉（此外酵母、青霉、曲霉等）i. 毛霉结构：丝状真菌，它的菌丝可分为直立菌丝和匍匐菌丝，其中构成腐乳“体”的主要是匍匐菌丝。、生殖：孢子生殖；、代谢类型：异养需氧型；、毛霉在腐乳制作中的作用：在豆腐的发酵过程中，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐的蛋白

5、质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。、腐乳的生产中毛霉来源：传统生产中来自于空气中的毛霉孢子，而现代的腐乳生产是在无菌条件下，将优良毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品质量。腐乳制作实验过程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制i. 豆腐含水量：70左右，水分过多则腐乳不易成形。ii. 长毛霉的条件：1518，大约5天后豆腐表面丛生直立菌丝，当毛霉生长旺盛并呈淡黄色。iii. 加盐：豆腐块与盐的质量分数比为5：1，分层加盐，并随层加高而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些，以防止杂菌从瓶口进入。加盐的作用：a.调味；b.抑制微生物生长，避免豆腐

6、变质；c.浸提蛋白酶等，有利于后期腐乳的成熟。iv. 加酒：酒精含量控制在12左右为宜，酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。影响腐乳品质的主要因素： i. 菌种和杂菌：菌种是生产发酵的关键，如果菌种退化则表现出生化功能的变化，如水解速率、代谢产物等都会发生变化，从而影响品质。如有杂菌污染则直接影响产品的色、香、味。ii. 发酵及后成熟的温度：温度影响菌丝的生长和代谢，如温度过低，则菌丝生长缓慢，不能进入豆腐块的深层；温度高，菌丝易老化和死亡，影响品质；温度还影响生化反应速度。发酵时间：发酵时

7、间影响生化反应度及生化产物的量。iii. 调味品：加入的各种酒类、糖类等辅料的多少也对口感有重要影响。3. 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 酶种类：碱性蛋白酶、碱性脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶，目前洗衣粉中主要加入的是碱性蛋白酶、碱性脂酶等复合酶。 加酶洗衣粉中的酶活性容易受温度、酸碱度和表面活性剂的影响。 保护加酶洗衣粉中酶活性的方法：、科学家通过基因工程生产出耐酸碱、较能耐受表面活性剂、能耐受较高温度的酶；、通过特殊化学物质将酶包裹，与洗衣粉的其他成分隔离。 合理设置探究温度对加酶洗衣粉洗涤效果的影响：根据一年中的实际气温变化来确定水温，这既是确定实验变量的基本原则，温度范围一般为535（不低于0、

8、高于45） 使用加酶洗衣粉时必须注意以下几点：、碱性蛋白酶能使蛋白质水解，因此，蛋白质类纤维（羊毛、蚕丝等）织物就不能用加酶洗衣粉来洗涤，以免使纤维受到破坏；（2）使用加酶洗衣粉时，必须注意洗涤用水的温度。碱性蛋白酶在35 50 时活性最强，在低温下或70 以上就会失效；（3）加酶洗衣粉也不宜长期存放，存放时间过长会导致酶活力损失；（4）加酶洗衣粉不宜与三聚磷酸盐共存，否则酶的活性将会丧失；（5）添加了碱性蛋白酶的洗衣粉可以分解人体皮肤表面蛋白质，而使人患过敏性皮炎、湿疹等，因此，应避免与这类洗衣粉长时间地接触。4. 酵母细胞的固定化 直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点：类型优点不足

9、直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等。对环境条件非常敏感，容易失活；酶难回收，提高了生产成本；酶与产物混合，不易分离，可能影响产品质量。固定化酶酶既能与反应物接触，又能与产物分离，可以被反复利用一种酶只能催化一种化学反应固定化细胞成本低，操作更容易固定后的细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降 固定化酶或细胞的方法：包埋法、化学结合法和物理吸附法。由于细胞个体大难吸附或结合，而酶分子小容易从包埋材料中漏出，因此，酶更适用于化学结合和物理吸附法，细胞固定多采用包埋法。 酵母细胞固定化过程：步骤主要操作注意事项酵母细胞的活化干酵母蒸馏水，搅匀后放置1h左右活化时间充足，以恢复酵母细胞的生活

10、状态配制CaCl2溶液浓度0.05mol/L CaCl2配制海藻酸钠溶液称取0.7g海藻酸钠50mL蒸馏水加热溶解海藻酸钠用小火加热或间断加热，边加热、边搅拌，防止海藻酸钠焦糊海藻酸钠溶液与酵母细胞混合将溶好并冷却至室温的海藻酸钠加入已活化的酵母细胞，搅拌，使其混合均匀海藻酸钠应冷却至室温，防止高温影响酵母菌的活性；充分搅拌，使酵母细胞分布均匀固定化酵母细胞恒速、缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液，凝胶珠在CaCl2溶液浸泡30min左右控制注射器挤压速度、注射器与CaCl2溶液的距离，使凝胶珠呈球形或椭球形 用固定化酵母细胞发酵 用蒸馏水冲洗固定好的酵母细胞凝胶珠23次加150mL1

11、0%葡萄糖溶液，密封，25下发酵24h。观察发酵液是否有气泡，能不能闻到酒味。 实验结果评价：、加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的成败。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少。、检验凝胶珠的质量是否合格：一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。、凝胶珠颜色和形状：如果凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海

12、藻酸钠的浓度偏高。5. DNA粗提取和鉴定 DNA粗提取的原理：、在0.14 mol/LNaCl溶液中DNA溶解度最小，当浓度高于或低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度均会增加，；、DNA不溶于酒精，但某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理可以将DNA与结合的蛋白质进一步分离；、蛋白酶能水解蛋白质但对DNA没有影响；、大多数蛋白质不能耐受6080的高温，而DNA在80以上才会变性。 DNA鉴定的原理：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会染成蓝色；注意：、二苯胺试剂要现配现用；设置对照实验（向5mL的 2 mol/L NaCl溶液中加入4mL二苯胺试剂，混匀后，沸水浴）。 以鸡血为实验材料进行D

13、NA的粗提取：、本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因：一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。、主要实验步骤：步骤主要操作原理注意事项破碎细胞释放DNA加入蒸馏水搅拌34层纱布过滤，取滤液鸡血细胞渗透吸水沿一个方向快速搅拌，但不能太快太猛，防止打碎DNA。溶解细胞核内DNA加入两倍体积的浓度为2 mol/LNaCl溶液DNA能溶解于2mol/LNaCl溶液注意应沿一个方向搅拌，使DNA充分溶解析出DNA加蒸馏水降低NaCl溶液浓度，使DNA析出DNA在0.14 mol/LNaCl溶

14、液中溶解度最小缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌；注意控制加水量DNA的初步纯化DNA黏稠物再溶解（加2 mol/L NaCl溶液）加95的乙醇搅拌DNA不溶于酒精沿同一个方向缓慢、均匀地搅拌，减少DNA断裂以菜花为实验材料进行DNA的粗提取：、研磨时加入洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，目的是使植物细胞膜破碎，释放DNA；、加盐的目的是溶解细胞核内DNA课题成果评价：i. 提取的DNA不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；、二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。ii. 本实验提取的DNA粗制品有可能

15、仍然含有核蛋白、多糖等杂质。iii. 实验结果比较方法，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等。6. 血红蛋白的提取和分离 凝胶色谱法原理：是根据分子量的大小分离蛋白质的方法之一，相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，通过的路程较短，移动速度较快，先流出凝胶柱；反之，则慢，后流出。 透析原理： 电泳原理：利用待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。许多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等，在某个特定的pH下会带上正电或负电。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于测

16、定的蛋白质分子量或鉴定蛋白质样品的纯度。实验中通常选用一组已知分子量的标准蛋白与样品同时进行电泳，根据已知分子量的标准蛋白的电泳区带位置，可以测出未知蛋白的分子量。 缓冲液的作用：维持反应体系的pH不变 血红蛋白提取和分离的程序：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定，其中，样品的处理包括洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，样品的粗分离方法是经过透析去除分子量较小的杂质；样品的纯化方法是通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去；纯度鉴定利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行的。 与“血红蛋白的提取和分离操作”有关的问题：iv. 材料选择：血红蛋白呈红色，在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色

17、来判断收集洗脱液的时间，使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。哺乳动物血红细胞内血红蛋白含量丰富，且与鸟类等其它动物细胞内其它蛋白质、DNA少，因此容易提纯血红蛋白。v. 红细胞洗涤：试剂是生理盐水（细胞的等渗溶液，可以保持细胞的正常形态）；方法是低速度短时间离心分离，反复洗涤三次，直到上清液中没有黄色。vi. 凝胶色谱柱的装填：干凝胶用先用蒸馏水充分溶胀后配制成凝胶悬浮液，装柱后要用磷酸缓冲液平衡凝胶；装填中时凝胶装填得紧密、均匀，特别要防止色谱柱中存在气泡、，以免搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果；一旦发现有气泡应该重新装填；加样时注意不要破坏凝胶面，要保持凝胶面始终平

18、整。vii. 加样操作顺序：参照课本P69 图5-22，打开下端流出口使缓冲液慢慢下降到与凝胶面平齐关闭下端流出口，用吸管贴壁将样品加到色谱柱的顶端打开下端流出口，使样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口加缓冲液到适当高度连接洗冲装置，进行连续洗脱待红色蛋白质接近色谱柱底端时，收集流出液，每5mL收集一管。viii. 洗脱液：pH为7.0的磷酸缓冲液，目的是使蛋白质分子在色谱柱内，随洗脱液向下移动，同时，防止pH变化破坏蛋白质的结构。一、  基因工程1、（a）基因工程的诞生（一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特

19、性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。2、（a）基因工程的原理及技术原理：基因重组技术：（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）

20、的比较：相同点：都缝合磷酸二酯键。区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”载体（1）载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保存。具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌

21、染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。3.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至9095DNA解链；第二步：冷却到5560，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目

22、的基因能够表达和发挥作用。2.组成：目的基因启动子终止子标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步：将目的基因导入受体细胞_1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和花粉

23、管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞：3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的 抗体进行抗原抗体杂交。4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。（三）

24、（b）基因工程的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）（a）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）（1）蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质（2）蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结

25、构，又称为第二代的基因工程。基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列二、细胞工程（一）植物细胞工程 1.理论基础（原理）：细胞全能性2.植物组织培养技术（b）（1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 试管苗 植物体（2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。A 植物繁殖微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖作物脱毒：采用茎尖

26、组织培养来除去病毒（因为植物分生区附近的病毒极少或没有）人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经人工薄膜包装得到的种子。优点：完全保持优良品种的遗传特性，不受季节的限制；方便储藏和运输B 作物新品种培育单倍体育种：a过程：植株（AaBb）通过减数分裂得到花粉（AB、Ab、aB、ab四种类型）；对花粉进行花药离体培养（技术是植物组织培养）；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株（AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型）。b 优点：明显缩短育种年限C 突变体利用：在组织培养中会出现突变体，通过从有用的突变体中选育出新品种（如筛选

27、抗病、抗盐、含高蛋白的突变体）D 细胞产物的生产：通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养，从而让它们能够产生大量的细胞产物。（3）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。植物细胞A植物细胞B杂种细胞愈伤组织杂种植株图（2）3.植物体细胞杂交技术（1）过程：（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。（二）动物细胞工程1. 动物细胞培养（a）（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。（2）

28、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。（4）动物细胞培养需要满足以下条件无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。营养：合

29、成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。温度：适宜温度：哺乳动物多是36.50.5；pH：7.27.4。气体环境：95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。（3）体细胞核移植的大致过程是：高产奶牛（提供

30、体细胞）进行细胞培养；同时采集卵母细胞，在体外培养到减二分裂中期的卵母细胞，去核（显微操作）注：为什么要用卵细胞？它可以提供充足的营养；操作简便；细胞质不会抑制细胞核全能性的表达；将供体细胞注入去核卵母细胞；通过电刺激使两细胞融合，供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎；将胚胎移入受体（代孕）母牛体内；生出与供体奶牛遗传基因相同的犊牛（4）体细胞核移植技术的应用：加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；保护濒危物种，增大存活数量；生产珍贵的医用蛋白；作为异种移植的供体；用于组织器官的移植等。（5）体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。3.动物细胞融合（1）动物

31、细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。（4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：细胞工程植物体细胞杂交动物细胞融合理论基础细胞的全能性、细胞膜的流动性细胞增殖、细胞膜的流动性融合前处理酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）注射特定抗原，

32、免疫处理正常小鼠诱导手段物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG）物理法:离心、振动、电激化学法：聚乙二醇生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）诱导过程第一步：原生质体的制备（酶解法）第二步：原生质体融合 （物、化法）第三步：杂种细胞的筛选和培养第四步：杂种植株的诱导与鉴定正常小鼠免疫处理动物细胞的融合（物、化、生法）杂交瘤细胞的筛选与培养专一抗体检验阳性细胞培养单克隆抗体的提纯用途和意义克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围应用：白菜-甘蓝等杂种植株（1） 制备单克隆抗体（2） 诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症4.单克隆抗体（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一

33、种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。（2）单克隆抗体的制备过程：对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白（目的使小鼠产生了效应B细胞）；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合注：融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞特点是能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体；然后对它进行克隆化培养和抗体检测筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体。（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖

34、，又能产生专一的抗体。（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（5）单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。三、胚胎工程（一）动物胚胎发育的基本过程（1）精子的发生：补充，精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂；变形过程中，细胞核为精子头的主要部分，高尔基体发育为顶体，中心体演变为精子的尾，线粒体在尾基部形成线粒体鞘膜，其他物质浓缩为原生质滴直至脱落。线粒体为精子运动提供能量（2）卵子的发生：在胎儿时期

35、，卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞被卵泡细胞包围，减一分裂在排卵前后完成，形成次级卵母细胞和第一极体进入输卵管准备受精；减二分裂是在受精过程中完成的。（3）受精：精子获能（在雌性动物生殖道内）；卵子的准备（排出的卵子要在输卵管中进一步成熟到减二中期才具备受精能力）；受精阶段卵子周围的结构由外到内：放射冠、透明带、卵黄膜，a顶体反应：精子释放顶体酶溶解卵丘细胞之间的物质，穿越放射冠。b透明带反应：顶体酶可将透明带溶出孔道，精子穿入，在精子触及卵黄膜的瞬间阻止后来精子进入透明带的生理反应它是防止多精子入卵受精的第一道屏障；c卵黄膜的封闭作用：精子外膜和卵黄膜融合，精子入卵后，卵黄膜会拒绝其他

36、精子再进入卵内的过程它是防止多精子入卵受精的第二道屏障；精子尾部脱落，原有核膜破裂形成雄原核，同时卵子完成减二分裂，形成雌原核注意：受精标志是第二极体的形成；受精完成标志是雌雄原核融合成合子。（4）胚胎发育：a卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；b桑椹胚：32个细胞左右的胚胎之前所有细胞都能发育成完整胚胎的潜能属全能细胞；c囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔注：囊胚的扩大会导致透明带的破裂，胚胎伸展出来，这一过程叫孵化；d原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层

37、包围的囊腔叫原肠腔。细胞分化在胚胎期达到最大限度9 胚胎工程的理论基础（识记）（1）胚胎工程的概念及技术手段：对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。（2）体外受精属有性生殖过程：a卵母细胞的采集和培养 对体型小的动物用促性腺激素处理，从输卵管冲取卵子（可直接受精）；对体型大的动物从卵巢中采集卵母细胞（要在体外培养成熟）b精子的采集 假阴道法、手握法和电刺激法；获能 对啮齿动物、兔、猪等的精子用培养法（放入人工配制的获能液中）；对牛、羊等精子用化学法（放在肝素或钙离子载体溶液中）（3）胚胎的早期培养：a培养液成分：无机盐、有机盐

38、、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等注意与动物细胞培养液成分的比较；b当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。（4）胚胎移植：a概念：将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。是生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程，通过转基因、核移植、体外受精获得的胚胎必须移植给受体才能获得后代。b优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力，缩短供体本身的繁殖周期。c胚胎移植的生理学基础：同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的对供体和受体进行同期发情处理；早期胚胎形成后处于游离状态，为胚胎的收集提供可能；受体对移入子宫的

39、外来胚胎基本不发生免疫排斥反应；移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。d胚胎移植的程序：对供、受体母牛进行选择，用激素进行同期发情处理；对供体母牛用激素做超数排卵处理；选择同种优秀公牛配种有性生殖过程；对胚胎进行收集此时胚胎处于游离状态；对胚胎进行质量检查此时胚胎应发育到桑椹胚或囊胚；胚胎移植或冷冻保存；检查受体母牛是否受孕；产下胚胎移植的犊牛。（5）胚胎分割：a概念：用机械方法将早期胚胎切割成2、4、8等分等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术可看作是动物无性繁殖或克隆b基本过程：选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植

40、给受体。注意：内细胞团要均等分割，否则会影响胚胎的恢复和进一步发育10 胚胎干细胞的移植（识记）（1）胚胎干细胞的含义：由早期胚胎囊胚或原始性腺胎儿中分离出来的一类细胞，又叫ES或EK细胞。（2）特征：形态上体积小、细胞核大、核仁明显；功能上具有发育的全能性，即可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。体外培养下，ES细胞可以只增殖不分化（3）应用：用于治疗人类疾病，如利用ES细胞诱导其分化成新的组织细胞特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位得以修复。1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需

41、移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。2、动物胚胎发育的基本过程（1）受精场所是母体的输卵管。（2）卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。 （3）桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到32个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。（4）囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔。（5）原肠胚：特点：有了三胚层的分化，具有囊胚腔和原肠腔。（二）胚胎干细胞1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离

42、出来。2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。3、胚胎干细胞的主要用途是：可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；是在体外条件下研究细胞分化的理想材料，在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可以诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段；可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ES细胞可使坏死或退化的部位

43、得以修复并恢复正常功能；随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。（三）胚胎工程的应用1.体外受精和胚胎的早期培养(1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。(2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。(3) 受精：获能

44、的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。(4)胚胎的早期培养：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植。)2.胚胎移植(1)胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎，移植到

45、同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”。（供体为优良品种，作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎，都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序”。(2) 胚胎移植的意义：大大缩短了供体本身的繁殖周期，充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。(3) 生理学基础：动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可

46、能。受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。(4) 基本程序主要包括：对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。配种或人工授精。对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵)。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入196的液氮中保存。对

47、胚胎进行移植。移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。3.胚胎分割(1)概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。(2)意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。(3)材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）(4)操作过程：对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。（四）生物技术的安全性和伦理问题1.转基因生物的安全性争论 ：(1)基因生物与食物安全：反方观点：反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变正方观点：有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据(2)转基因生物与生物安全：对生物多样性的影响反方观点：扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为