实验二琼脂糖凝胶电泳

1、 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳一、实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度。DNADNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。用下向正极泳动。DNADNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同子筛效应。不同DNADNA的分子量大小及构型不同，电的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。泳时的泳动率就不同，从而分出不

2、同的区带。二、实验目的 通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳分离电泳分离DNADNA的原理和技术。的原理和技术。植物基因组植物基因组DNADNA电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。微波炉，紫外透射检测仪等。 琼脂糖，琼脂糖，1 1TAETAE电泳缓冲液，溴化乙锭（电泳缓冲液，溴化乙锭（EBEB），），6 6载样缓冲液载样缓冲液 ： 0.25% 0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%0.25%二甲苯青二甲苯青 ，40%40%蔗糖水溶液蔗糖水溶液; ; 0.25% 0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%0

3、.25%二甲苯青二甲苯青 ，30%30%甘油水溶液甘油水溶液三、实验材料、器具及药品三、实验材料、器具及药品(一)制胶1.1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。准备好凝胶成型器，插入成型梳。2.2.将将0.8g0.8g琼脂糖加至琼脂糖加至100 ml 1100 ml 1TAETAE缓冲液中，摇匀。在缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至6060以下。以下。3.3.加入加入5ul5ul溴化乙锭（终浓度溴化乙锭（终浓度0.5ug/ ml 0.5ug/ ml ）至熔化的琼脂）至熔化的琼脂糖液中混匀，注意避免出现气泡。糖液中混匀，注意避免出现气泡。 4.

4、4.将冷却的将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器琼脂糖倒入凝胶成型器，制备凝胶。，制备凝胶。四、实验步骤（二）电泳1.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约2020分钟），小分钟），小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加1 1TAETAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm1-2mm。2.2.用移液器吸取用移液器吸取2l 2l 的的6 6载样缓冲液于封口膜上，再加载样缓冲液于封口膜上，再加入入5l5l样品，混匀后，样品，混匀后，小心加入点样孔小心加入点样孔。 3.3.接通电源，调节电压至接通电源，调

5、节电压至4-5V/cm4-5V/cm，DNADNA从负极移到正极。从负极移到正极。电泳时间电泳时间30306060分钟。分钟。4. 4. 电泳结束，关掉电源。电泳结束，关掉电源。1. 1. 将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统 的平台中间；的平台中间；2. 2. 开通紫外光，可见到发出荧光的开通紫外光，可见到发出荧光的DNADNA条带，在条带，在 电脑中观察图像；电脑中观察图像；3. 3. 关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；4. 4. 根据图像判断结果。根据图像判断结果。五、结果分析五、结果分析 图图1 1 玉米基因组玉米基因组DNA1%DNA1%琼脂凝胶电泳琼脂凝胶电泳 图图2 2 PCRPCR