蛋白 相关试剂

1、4牛血清蛋白(BSA）（10mg/ml）组份浓度 10mg/ml牛血清蛋白配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂。牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）100mg 2.向15ml试管中加入9.5ml的去离子水。 3.把称好的试剂装入含9.5ml的去离子水的试管中，（为削减变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白）盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止，不要涡旋混合。 4.加去离子水将溶液定容至10ml后，然后分装成小份贮存于-20。5二硫苏糖醇（DTT）（1mol/L）组份浓度 1mol/L二硫苏糖醇配制量 32.4ml配制方法 1.称量下列试剂，置于100 ml烧杯

2、中二硫苏糖醇5g 2.向100 ml烧杯中加入32.4ml水或0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2），充分搅拌溶解。 3. 分成小份贮存于-20。留意事项：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。6苯甲基磺酰氟（PMSF）（100mmol/L）组份浓度 100mmol/L PMSF配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中苯甲基磺酰氟174mg 2.向15ml试管中加入9.5ml异丙醇，充分搅拌溶解，定容到10ml。 3. 分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。留意事项：PMSF严峻损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸取后有致命危急。一旦眼睛或皮

3、肤接触了PMSF，应马上用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丢失速率随pH值的上升而加快，且25的失活速率高于4。pH值为8.0时，20mmol/L PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调整 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可平安地予以丢弃。7蛋白酶K（proteinase K）（20mg/ml）组份浓度 20mg/ml蛋白酶K配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中蛋白酶K200mg 2.向15ml试管中加入9.5ml水，轻

4、轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml。 3. 分成小份贮存于-20。8过硫酸铵溶液（10%）组份浓度 10%过硫酸铵溶液配制量 10ml配制方法 1.称量下列试剂，置于15ml试管中过硫酸铵1g 2. .向15ml试管中加入9.5ml水，充分搅拌溶解，定容到10ml。 3. 可在4保存数周。9-巯基乙醇（BME）溶液组份浓度 14.4mol/L-巯基乙醇配制方法 一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4。留意事项：BME或含有BME的溶液不能高压处理。10十二烷基硫酸钠（SDS）溶液（10%）组份浓度 10%十二烷基硫酸钠配制量 1L配制方法 1.称

5、量下列试剂，置于l L烧杯中。十二烷基硫酸钠100g 2.向烧杯中加入约900 ml的去离子水，加热至68助溶。 3.加去离子水将溶液定容至l L后，分装备用。留意事项：SDS的微细晶粒易集中，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10% SDS溶液无须灭菌。11丙烯酰胺溶液（30%）组份浓度 30%丙烯酰胺配制量 100ml配制方法 1.称量下列试剂，置于100ml烧杯中。丙烯酰胺29gN，N-亚甲双丙烯酰胺1g 2.向烧杯中加入约60 ml的去离子水，加热至37溶解。 3.加去离子水将溶液定容至100m后，用Nalgene滤器（0.45m孔径）过滤除菌，查证

6、该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 留意事项：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸取，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，由于它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。12丙烯酰胺溶液（40%）组份浓度 40%丙烯酰胺配制量 100ml配制方法 1.称量下列试剂

7、，置于100ml烧杯中。丙烯酰胺38gN，N-亚甲双丙烯酰胺2g 2.向烧杯中加入约60 ml的去离子水，加热至37溶解。 3.加去离子水将溶液定容至100m后，用Nalgene滤器（0.45m孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。 留意事项：丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸取，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，由于它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt

8、），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定.13 Tris溶液(1mol/L，pH7.4)组份浓度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris碱121.91g 2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加水定容至1L，加入浓HCl约70ml调整 pH值至所需值。溶液应冷却至室温后方可最终调定pH值。 4.分装后高压灭菌。留意事项：如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。Tris溶液的pH值因温度而

9、异，温度每上升1，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。14 Tris溶液(1mol/L，pH7.6)组份浓度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris碱121.91g 2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加水定容至1L，加入浓HCl约60ml调整 pH值至所需值。溶液应冷却至室温后方可最终调定pH值。 4.分装后高压灭菌。留意事项：如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每上升1，pH

10、值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。151mol/L Tris溶液(1mol/L，pH8.0)组份浓度 1mol/L Tris配制量 1L配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。Tris碱121.91g 2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加水定容至1L，加入浓HCl约42ml调整 pH值至所需值。溶液应冷却至室温后方可最终调定pH值。 4.分装后高压灭菌。留意事项：如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。Tris溶液的pH值因温度而异，温度每上升1，pH值大约降低

11、0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5、25、和37时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。16电泳液(Western杂交用) 组份浓度 250 mM Glycine，25 mM Tris，0.1%(W/V)SDS配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Glycine18.8 gTris3.02 gSDS1 g 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至1L后。 4.室温保存。17膜转移缓冲液(Western杂交用) 组份浓度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V

12、)甲醇配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。Glycine2.9 gTris5.8 gSDS0.37 g 2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。 4.室温保存。18TBST Buffer(Western杂交膜清洗液) 组份浓度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。NaCl8.8 g1 M Tris-HCl(pH8.0)20 ml 2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.加入0.5 ml Tw