细菌内毒素检查法测定利巴韦林注射液的热原

1、    细菌内毒素检查法测定利巴韦林注射液的热原        摘要目的:建立利巴韦林注射液的细菌内毒素检查方法。方法:参照中国药典1995年版二部收载的细菌内毒素检查方法进行实验。结果:通过干扰实验证明，利巴韦林注射液对鲎试剂的凝集反应无干扰作用，用灵敏度为0.5 EU.ml-1的鲎试剂检查细菌内毒素的方法可行、有效。结论:可以用细菌内毒素检查法替代家兔热原法来控制三磷酸腺苷二钠注射液的质量。关键词利巴韦林注射液；细菌内毒素；热原实验中分类号：R927.2文献标识码：A文章

2、编号：1001-5213(2000)06-0348-02The bacterial endotoxin test for monitoring pyrogen of ribavirin injectionGu Weihua,Gu Bingren(Su Zhou Institute for Drug Control,Jiangsu Suzhou 215002)ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a bacterial endotoxin method for monitoring pyrogen of ribavirin injection.METHODS：Bacter

3、ial endotoxin test method of the chinese pharmacopoeia was used.RESULTS：The test showed that the reaction with amebocyte lysate was not disturbed by ribavirin injection,sensitivity was 0.5 EU.ml-1.CONCLUSIONS：Amebocyte lysate method can be used in place of rabbit method for pyrogen monitoring of rib

4、avinin lnjection.KEY WORDSribavirin injection;bacterial endotoxin;pyogen test利巴韦林注射液(ribavirin injection)为抗病毒药。现有标准采用家兔法进行热原检查1。本文采用细菌内毒素检查法，通过干扰实验，建立了其细菌内毒素限量检查的方法，现报道如下。1材料鲎试剂(TAL，湛江安度斯生物有限公司，批号：981113，规格：=0.5 EU.ml-1，并经复核符合规定)；细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所，批号：9808，效价：40 EU.支)；细菌内毒检查用水(BET水，湛江安度斯生物有限公司，批

5、号：981211，内毒素含量0.015 EU.ml-1)；利巴韦林注射液(苏州第六制药厂，批号：990223，990224，990225，规格1 ml100 mg，经热原测定均符合规定)。2方法与结果2.1细菌内毒素限值(L)的计算标准1的热原检查(RT)方法是：将本品用氯化钠注射液稀释成含20 mg.ml-1的溶液，剂量按家兔体重注射2 ml.kg-1。即剂量(M)：40 mg.kg-1，人体致热阈值(K)：5.0 EU.kg-1，则L=K/M=0.125 EU.mg-12。2.2最大有效稀释倍数的确定将本品用BET水稀释成20 mg.ml-1的溶液，其中细菌内毒素限度应不得超过0.125&

6、#215;20=2.5 EU.ml-1，则对应于灵敏度()：0.5，0.25，0.125，0.06，0.03 EU.ml-1的鲎试剂，选择的稀释倍数分别为5，10，20，40，80倍。2.3干扰试验预试验取1批RT检查合格的供试品，用BET水将其配制成20 mg.ml-1的溶液，再作5，10，20，40，80倍稀释。用每个稀释度溶液来溶解并稀释细菌内毒素工作标准品，使内毒素的含量均为1.0 EU.ml-1，与鲎试剂(=0.5 EU.ml-1)反应，并作阴性对照。每个稀释度做2管，结果本品对细菌内毒素检查未见抑制作用。2.4干扰试验取3批RT检查合格的供试品，用BET水配制成20 mg.ml-1

7、的溶液，再稀释5倍后，分别用此溶液和BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成1.0，0.5，0.25，0.125 EU.ml-1的溶液，与鲎试剂(=0.5 EU.ml-1)进行反应。每个浓度做4管，结果见表1。从表1的结果看，鲎试剂在BET水和3个批号供试品中的值为0.420.50 EU.ml-1，均在0.52.0范围内，符合中国药典3对细菌内毒素检查有效性的规定。表1利巴韦林注射液干扰试验结果样 品阴性对照内毒素浓度(EU.ml-1)灵敏度EU.ml-10.1250.250.51.0BET水-+0.50990223-+-+0.42990224-+0.50990225-+-+0.42注：灵敏度=a

8、ntilg(lg 0.5+lg0.5+lg 0.5+lg 0.5)/4=0.5;=antilg(lg 0.5+lg 0.5+lg 0.25+lg 0.5)/4=0.42 2.5细菌内毒素检查实验根据2.4项下的结果，选用为0.5 EU.ml-1的鲎试剂进行实验。取3批RT检查合格的供试品，用BET水配制成20 mg.ml-1的溶液，作5倍稀释后依法3检查，并增设(2)的供试品阳性管，结果见表2。从表2的结果看，供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品阳性管和阳性对照管均呈阳性，实验结果成立。3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定，与家兔法结果一致。表2利巴韦林注射液的细菌内毒素检查结果试验管别供试品990223990224990225供试品管-供试品阳性管(2)+阴性对照管-阳性对照管(2)+3小结 试验结果表明，本品对鲎试剂的凝集反应无干扰作用，用细菌内毒素检查法来替代家兔热原法对利巴韦林注射液进行质量控制是可行的。方法是先将样品用BET水配制成20 mg.ml-1的溶液，作5倍稀释后，与灵敏度为0.5 EU.ml-1或灵敏度更高的鲎试剂反应，结果稳定、可靠。顾蔚华（苏州市药品检验所，江苏 苏州 215002）顾