初级检验技师临床免疫学和免疫检验第二十八章移植免疫及其免疫检测

1、资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除第二十八章 移植免疫及其免疫检测移植是指将健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以替代或补偿机体所 丧失的结构和（或）功能的现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植物，提供移植物的个体称为供体，接受移植物的个体称为 受体或宿主。根据移植物来源的不同，可将移植分为自体移植、同系移植、同种异体移植、异种移植；根据移植部 位的不同，可分原位移植和异位移植；视移植物种类的不同，又有器官移植、支架组织移植和细胞移植之 分。第一节 引起排斥反应的靶抗原由主要组织相容性复合体（MHC编码的人类白细胞抗原（HLA，是不同个体间进行器官或组织移植

2、时发生排斥反应的主要成分 ，这种代表个体特异性的同种抗原又称组织相容性抗原或移植抗原 。此外，与移植排斥反应相关的抗原还有：其他血细胞抗原，如红细胞血型抗原ABO和白细胞的特有抗原等；组织特异性抗原：特异地表达于构成某一组织器官的细胞表面抗原；次要组织相容性抗原，男性特有的Y染色体编码的某些蛋白质。一、主要组织相容性抗原在同种异体移植时，HLA引起移植排斥反应最强烈。在三类HLA分子中，主要由I、n类分子触发移植 排斥反应，HLA-DR反应最强。HLA-C与移植排斥反应无明显关系。移植中，来自供体的强表达HLA的APC和其他免疫细胞，即作为同种异体抗原介导宿主抗移植物反应（HVGR;也作为过客

3、细胞的重要膜分子参与移植物抗宿主反应（GVHR。HLAI1 DP ON DUDO DO DR1TAP8Prt i ft 5* » 有订 2 Bf C2 8 CE A GiN l _ I：_Ni1pclassllclassm cl ass I二、其他组织相容性抗原除MHC表达的主要组织相容性抗原（ MHA夕卜，与移植排斥反应相关的组织相容性抗原还包括mHA ABO等其他血型抗原和组织特异性抗原。（一）次要组织相容性抗原 mHA在某些组织或器官移植时发挥重要作用，特别是骨髓移植。此外，在不同性别的个体间进行移植时，由Y染色体上的座位所编码的蛋白，可能是触发轻度移植排斥反应的mHA这种与性

4、别相关的 mHA又称H-Y抗原，为男性所特有，可被 HLA-B7分子结合。（二）ABO血型抗原系统 ABO血型抗原具有极为广泛的组织分布，几乎所有人体组织器官的血管内皮细胞表面均含有此类抗原。在进行器官移植时，应尽量保证供、受体间ABO血型的一致。（三）组织特异性抗原 是一类特异性地表达于各种器官、组织、细胞上的抗原系统。不同的组织器官可有不同的组织特异性抗原。如血管内皮细胞（VEQ特异性抗原、肾特异性抗原、肝脏特异性抗原、胰腺特异性抗原、心脏特异性抗原和皮肤特异性抗原等。第二节排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应是针对移植抗原产生免疫应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害的过程。一、超急

5、性排斥反应在移植后的 数分钟至12天内发生的不可逆转的 体液排斥反应。常见于 ABO等血型不符、多次妊娠、 反复输血或接受过器官移植者 ，也可发生在被移植器官灌流不畅或缺血时间过长等情况时。超急性排斥反 应发生迅速、反应强烈、不可逆转。移植前进行仔细的 ABO Rh HLA配型和交叉配型，加之切取移植物和再灌注时熟练、精确的手术操作，多可避免此类排斥反应的发生。二、急性排斥反应发生于移植后 数周至数月内 ，是排斥反应 最常见的类型 ，患者多有发热、移植部位胀痛和移植器官功 能减退等临床表现。包括：1. 急性体液性排斥反应 由内皮细胞表面 HLA分子的抗体所介导，病理：引起移植组织或器官的 血管

6、炎。 此类排斥反应的病程进展迅速，多数免疫抑制剂治疗效果差或无效，往往被迫切除移植物。2. 急性细胞性排斥反应 又称加速性细胞排斥反应。患者的血液中，可以有抗供者的抗体，但并不一定引起有效的脉管排斥反应。病理：以移植组织或器官实质性损伤为主，伴有淋巴细胞和巨噬细胞浸润。三、慢性排斥反应发生于移植后 数月甚至数年 ，病程进展缓慢。病理： 血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成 ，时有 血管硬化性改变。纤维化的形成与在迟发型超敏反应中活化的巨噬细胞分泌的IL-1 ，以及血小板和内皮细胞产生的血小板源性生长因子（PDGF等有关。引起慢性排斥反应的因素包括：T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损

7、伤； B细胞产生的抗体活化补体或通过 ADC（破坏血管内皮细胞；急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变， 此与细胞和体液免疫均有关系；非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。慢性排 斥反应对免疫抑制疗法不敏感，目前尚无特异性治疗方法，最终需要重新进行器官移植。四、移植物抗宿主反应在骨髓移植 时，由于移植的骨髓也含有丰富的免疫细胞，且受体处于严重的免疫抑制状态，因而对供 者骨髓表现免疫无能，使供者骨髓中的免疫细胞不仅得以生长，而且以受者细胞为抗原产生免疫应答，引 起攻击受者的移植物抗宿主反应（GVHR。GVHF也可见于脾、胸腺和小肠移植。第三节 HLA分型一、血清学分型法

8、应用一系列已知抗 HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞 裂解的细胞毒试验。因分型血清和淋巴细胞用量少，称为补体依赖的微量细胞毒（CDC试验。能够应用该法检测的抗原称为 SD抗原，包括HLA-A、HLA-B、HLA-C HLA-DR HLA-DQ二、细胞学分型法以混合淋巴细胞培养（MLC或称混合淋巴细胞反应（MLR为基本技术的 HLA分型法。能用本法测定 的抗原称为LD抗原，包括HLA-D HLA-DP（一）单向 MLC1. 阴性分型法 又称纯合子细胞分型法。2. 阳性分型法 阳性分型法又称预致敏淋巴细胞分型法（PLT）。HLA-D抗原可用阴性和阳性分型法检

9、测，HLA-DP抗原只用阳性分型法检测 。（二）双向 MLC遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向 MLC。本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度，双向MLC虽度与两个体间 HLA抗原差异成正比，器官或细胞移植时，应选择MLC最弱者为供体。三、分子生物学分型法（一）RFLP与PCR-RFLP分型法 限制性片段长度多态性（RFLP分析，称为 DNA-RFLPDNA片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度增加，此类方法称为PCR-RFLP分型法。PCR-RFLP分型法所应用的 P

10、CR引物为HLA组特异性的，此法特别 适应于小量 标本的研究和异基因骨髓移植供者的选择 。（二）PCR-SSO分型法序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-SSO是PCR与杂交相结合的技术， 从而对扩增产物作出 HLA型别判断。PCR-SSO1H类HLA分型应用最广泛的方法，能鉴定所有已知序列的HLA-DR HLA-DQ HLA-DP等位基因。基因芯片是与 PCR-SSO吉合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。（三）PCR/SSP分型法应用HLA等位基因的序列特异性引物（SSP，对待测DNA进行PCR扩增，从而 获得HLA型别特异

11、性的扩增产物。（四）PCR-SSCP分型法单链构象特异性-聚合酶链反应（PCR-SSCP，是以待测基因PCRT增为基础， 对扩增的DNA单链（ssDNA）的HLA分型方法。（五）SBT分型法基于序列的HLA分型法（SBT）,可通过对扩增后的 HLA基因片段进行的核酸序列测 定判断HLA型别。第四节 常见的组织或器官移植临床上开展较多的移植有角膜移植、皮肤移植、胰腺移植、肾移植、心脏移植、肺移植、肝移植和骨 髓移植等。一、肾脏移植 肾脏移植是临床开展最早、应用最多和效果最佳的一种器官移植。（一）组织配型在肾脏移植中的应用组织配型是肾脏移植前选择供者的重要手段，包括ABO血型配型、HLA配型和交叉

12、配型。（二）肾移植受者的疗效检测肾移植中，急性、超急性排斥反应和慢性排斥反应均可出现。二、肝脏移植三、心脏移植与心肺联合移植四、骨髓与其他来源的干细胞移植第五节 排斥反应的预防与治疗一、组织配型（一） HLA配型多用血清学方法作 HLA-A、HLA-B HLA-DR配型，然而需要 MLC确定的HLA- H类分子资料收集于网络，如有侵权 请联系网站删除是否匹配，是关系到移植物能否长期存活更有用的指标。（二）HLA交叉配型与预存抗体的检测移植前如果受者血清中预先存在抗供者淋巴细胞的抗体，移植后80%发生超急性排斥反应，因此必须做HLA交叉配型，以检测受者体内抗供者淋巴细胞的细胞毒性抗体。（三）群体

13、反应性抗体的检测国际上，应用群体反应性抗体（PRA水平，判断器官移植时受体的敏感程度。二、移植物与受体的预处理（一）移植物的预处理（二）受体的准备 除了进行必要的组织配型或交叉配型外， 对于移植受体， 于移植前应用 免疫抑制剂 ， 可有效地提高器官移植的成功率，尤其是在 异基因骨髓移植时 。三、免疫抑制措施 器官移植成功的最大障碍是排斥反应。移植术后，人工调节受者机体的免疫状态是控制排斥反应发生的主要途径。目前，采取的措施有： 使用免疫抑制剂，控制受者的免疫应答，降低对移植物的排斥能力； 诱导 受者对移植抗原的特异性免疫耐受 。第六节 排斥反应的免疫检测一、 体液免疫与细胞免疫水平检测的临床意

14、义（一）体液免疫水平检测的临床意义1. 特异性抗体水平的检测相关的免疫指标包括： ABO等血型和HLA抗体、抗供者组织细胞抗体、血管内皮细胞抗体、冷凝集素等。测定的方法，可以根据相应抗原的特性，分别采取各种交叉配型、补体依赖 的细胞毒性试验等。2. 补体水平的检测 补体活性与急性移植排斥反应的发生有关，这是因为在急性排斥反应中，抗体发挥 着重要作用。当移植物遭受排斥时，补体成分的消耗增加，导致血清中总补体或单个补体成分的减少，可采用溶血法或比浊法进行检测。此外，补体的裂解产物，如C3a、C3b C3d等的测定，对了解补体的活性也很有帮助，其常用的检测方法有免疫电泳、免疫标记技术等。（二）细胞免

15、疫水平检测的临床意义1. 外周血T细胞及其亚类的计数 免疫荧光法或流式细胞仪测定。CD4/CD8比值大于1.2时，预示急性排斥即将发生，而此比值小于 1.08 时则发生感染的可能性很大 。若进行动态监测，对急性排斥反应和感染 具有鉴别诊断的意义。此外，淋巴细胞转化试验也可用于T细胞总数和功能的测定，例如4小时T细胞转化试验，是一项预报急性排斥反应危象较为满意的方法。2. NK细胞活性测定3. 血清细胞因子测定骨髓移植中发生的 GVHR是移植排斥反应的特殊类型。4. 黏附分子及其配体的检测 免疫细胞以及血管内皮细胞等细胞膜表面黏附分子及其配体的表达，与急性排斥反应的发生密切相关。诸如ELAM-1

16、、VCAM ICAM和HLA分子等。二、 尿微量蛋白检测的临床意义尿微量蛋白 ，是指用常规定性或定量方法难以测出的蛋白质。机体蛋白质非正常地经尿排出，可发生 于肾脏损伤性病变。在临床移植领域，尿微量蛋白的检测，一方面有助于判断大器官移植，尤其是肾脏移植时排斥反应的 发生；另一方面，也可作为免疫抑制药物肝肾毒副作用的观察指标。传统尿蛋白检测采用免疫扩散、免疫电泳、免疫比浊、放射免疫、 ELISA 等方法；高效检测技术还有高 效液相层析、毛细管电泳、质谱等。以及生物传感器技术的生物芯片等。三、急性时相反应物质检测的临床意义临床同种异基因干细胞移植时发现，受者血清的CRP水平增高，且在移植后发生细菌

17、或真菌感染时更为显著。此外，CRP与器官移植后并发症的发生相关。四、免疫抑制剂体内药物浓度检测的临床意义移植术后的患者，常规应用 CsA FK506麦考酚吗乙酯（MMF等免疫抑制剂，这些药物的治疗窗窄、 效用强度大，加之患者本身的个体差异、状态、饮食、用药时间和次数、合并用药等因素影响，致使不同 患者甚至是同一患者不同时期的血药浓度都有很大差异。因此，对移植患者需在常规监测血药浓度的情况 下随时调整给药剂量。【习题】A. 组织特异性抗原B. 同种异型抗原C. 主要组织相容性抗原D. 主要组织相容性复合体E. 次要组织相容性抗原1. 代表个体特征性的抗原称为正确答案 A 答案解析代表个体特征性的抗原称为组织特异性抗原。2. 能引起快而强的排斥应答的抗原称为正确答案 C 答案解析能引起快而强的排斥应答的抗原称为主要组织相容性抗原。3. 编码MHC勺基因群称为正确答案 D答案解析编码 MHC勺基因群