心理应激性内皮损伤动物模型的初步研究

1、心理应激性内皮损伤动物模型的初步研究杨晓梅1庞广保2沈斌2韦伍英2黎木兰2封廖芸2李冠虹3石殿春3黎静 1*(1广西医科大学牛理学教研室530021； 2广西医科大学2008级七年制临床医 学专业530021)(3广西医科大学2009级五年制临床医学专业530021)【中图分类号】r742 文献标识码】a【文章编号】1672-5085 (2012) 19-0052-02【摘要】目的采用愤怒心理应激建立血管内皮损伤动物模型，并探讨血管内皮 损伤的情况。方法雄性sd大鼠随机分为对照组、模型组，采用愤怒心理应激建 立血管内皮损伤模型，放射免疫法检测血浆皮质醇的含量，采用elisa法检测血 浆肾上腺素

2、、血管性血友病因子(vwf),硝酸还原酶法检测血浆no含量，he 染色及扫描电镜观察血管内皮结构的损伤情况。结果模型组血浆皮质醇、肾上 腺素、vwf水平明显高于对照组(p<0.05),血浆no含量明显低于对照组(p&t;0.05),扫描电镜观察血管内皮细胞明显受损。结论该模型是较理想的心 理应激内皮损伤模型。【关键词】心理应激 血管内皮细胞 肾上腺素 血管性血友病因子 一氧化氮exploration animal model of vascular endothelial injured by psychological stress yang xiao-meil, pa

3、ng guang-bao2, shen bing2, wei wu-ying2, li mu-lan乙 feng liao-yun乙 shi dianchun3, li guanhong3, li jingl(1 guangxi nanning, department of physiology, 530021, china, 2 guang xi medical university 7-year program clinical medical speciality of 2008 grade, guangxi nanning, 3 5-year program clinical medi

4、cal speciality of 2009 grade.)【abstract 】objective to establish animal model of endothelial cell injured by psychological stress of an ger. methods: to set up the an imal model of en dothelial cell injured by psychological stress of an ger, adult male sd rats were ran domly divided into control grou

5、p and model group. the plasma level of cortisol was detected by radioimm uno assay, the plasma level of epinephri ne and vwf detected by elisa. the plasma no levels dectected by nitrate reductase assay. the morphology of thoracic aorta endothelium was observed by he stain and seanning electron micro

6、scopy. results: the plasma levels of cortisol, epinephrine and vwf in the model group were significantly higher than those of control group(p<0.05). the plasma levels of no was sign讦icantly lower than that of the control group (p<0.05). and the morphology of the endothelial cell was si

7、gnificantly impaired. conclusion: psychological stress was an ideal way to establish animal model of endothelial cell injured.key words psychological stress vascular endothelial cell epinephrine vwf no心理一社会因素是损伤血管内皮细胞(vascular endothelial cell, vec),导 致心脑血管疾病的重要因素。目前，在复制情绪致病动物模型方面的研究很多, 但情绪毕竟是复杂的，难以

8、将心理应激与躯体应激区分开来，给单纯研究心理应 激与心血管疾病的关系带来困难。以往的应激动物模型多采用足底电击法、束缚 等2方法，本研究拟采用改变周围环境诱发动物行为、情绪异常建立血管内皮 损伤模型，并探讨血管内皮损伤的程度。1材料与方法1.1动物和试剂成年健康雄性sd大鼠，1015周龄，体重200-250g,由广西医科大学 实验动物中心提供。皮质醇(cortisol, cor)试剂盒购于北方生物技术研究所。肾 上腺素(epinephrine, epi)> 血管性血友病因子(von willebrand factor, vwf) elisa 试 剂盒购于武汉华美生物公司。一氧化氮(no)

9、试剂盒购于南京建成生物试剂公司o1.2愤怒心理应激模型的建立与分组大鼠随机分为对照组和模型组。模 型组大鼠单独置于不锈钢笼中(50cm×30cm×20cm)饲养，自由饮 食饮水。制造昼夜颠倒环境，每晚24:00开灯，中午12:00关灯。连续孤独饲养 lod,第lldl3:3o15:30进行实验。在每只造模大鼠笼内放进1只入侵鼠(入 侵大鼠予以群居饲养，于实验前2d禁食，不禁水)，观察20min的行为变化。同 样环境下，对照组大鼠予以群居饲养，自由饮食饮水，不予以情绪刺激。1.3取材及标本处理情绪刺激后，实验大鼠腹腔注射麻醉，经颈总动脉插管取血抗凝，离心

10、分离血浆，80°c冻存。取血后立即开胸分离胸主动脉，4°c生理盐水中冲洗干 净后，剪取lcm血管剖开后置于戊二醛中4°c保存，用于扫描电镜观察血管内皮 形态。同时取lcm主动脉血管置于4%多聚甲醛中4°c保存，利用内皮细胞铺片 技术观察血管内皮he染色情况。1.4指标检测按照试剂盒说明书，采用放射免疫法检测检测血浆cor水平，采用elisa 法检测血浆epi、vwf水平，采用硝酸还原酶法检测血浆no水平。采用spss13.0统计软件进行统计学处理，结果以均数±标准差 表示，以t检验分析组间差异，显著性水平p<0.05为

11、差异有统计学意义。2结果2.1大鼠血浆皮质醇、肾上腺素的测定结果由表1可见，模型组大鼠血浆皮质醇、肾上腺素水平与对照组有显著性 差异(p<0.05),模型组大鼠血浆皮质醇、肾上腺素水平显著升高。表1各组大鼠血浆皮质醇、肾上腺素水平(x-±s, n=12)tabl the plasma level of cor and epi of rats (x-±s, n=12)cor (mg/l)epi (ng/l)control group 14.14±2.882.66±1.09model group

12、20.41 ±3.50*7.37±2.21* p<0.01 vs control group2.2大鼠血浆vwf、no的检测结果由表2可见，模型组大鼠血浆vwf含量显著高于对照组(p<0.01, 见表2),血浆no含量显著低于对照组(p<0.05)o表2各组大鼠血浆vwf及no的水平(x-±s, n=12)tab2 the plasma level of no and vwf of rats (x±s, n=12)vwf (mg/l)no (mol/l)contro

13、l group 77.52±8.5725.01±3.95model group 97.37±8.52*19.19±3.78* p<o.ol vs control group2.3大鼠主动脉血管内皮细胞形态学观察结果图1结果显示，模型组和对照组血管内皮细胞铺片he染色显示内皮细 胞的形态和数量无明显区别，但扫描电镜显示，对照组血管内皮细胞呈条索状, 沿血管纵轴紧密排列，表面光滑，细胞核部分微隆起，细胞间隙小；而模型组大 鼠血管多数内皮细胞失去正常外观，呈梭形、蝌蚪形，表面皱缩、凹凸不平，呈 螺纹

14、样改变，且细胞间隙增宽。3讨论大量研究表明心理一社会因素是导致心脑血管疾病的重要因素。在健康 的个体，急性心理应激能导致内皮功能可逆的损害4。慢性交感神经的兴奋可 导致内皮损伤，交感神经兴奋可升高血压和心率，血管内压力升高可导致血管壁 的切应力增强，同时内源性肾上腺素增多，产生的代谢产物也能够损伤血管内皮 细胞。常用的建立应激模型的方式有电击、噪音、束缚等，还有研究应用连 续的水压力实验建立心理应激内皮损伤动物模型；还有研究通过改变猴子的栖息 地，研究心理应激对内皮介导的动脉粥样硬化的影响6,但是这些方法操作繁 琐，周期较长，而口受实验条件限制不容易实现。本实验参考breuer me的方 法，

15、建立大鼠愤怒心理应激模型。此模型躯体刺激已减少到极小，因此主要是心 理应激成分在起作用，是一种更接近人类发怒的愤怒动物模型，口造模周期相对 较短。应激时交感神经兴奋、下丘脑一垂体一肾上腺轴和肾素一血管紧张素系 统引起各种应激激素如肾上腺素、皮质醇等的释放。本研究中发现肾上腺素、皮 质醇升高，说明本研究心理应激模型建立成功。vwf是一种主要由vec合成释 放的高分子糖蛋白，当vec受刺激活化或损伤时，vwf释放会增加，血浆vwf 的水平就会增高，因而血浆vwf水平的变化可作为一个敏感指标反映vec损伤 程度8。vec可分泌多种血管舒缩因子如no、et、血栓素a2和前列环素等，以 调节血管正常的舒

16、缩状态，从而维持基础张力的稳定。no是内源性血管舒张 因子的主要活性成分，参与维持内皮依赖性舒张活性、防止内膜形成血栓等10。 本研究的结果显示，心理应激后，血浆vwf水平升高、no水平降低，提示血管 内皮发生了损伤，而且导致了内皮细胞功能障碍，释放血管舒张因子减少。本实 验中形态学观察进一步证实血管内皮受损，出现了内膜凹凸不平、呈虫蚀状改变、 排列紊乱等现象。综上所述，本研究中心理应激导致了大鼠血管内皮的损伤，该模型操 作方便、周期短，是较理想的心理应激性内皮损伤动物模型，其能够为研究心理 应激在心血管疾病发生、发展及药物治疗作用提供一种较好的模型依据。参考文献1 李福平，高凌云，肖颖彬，等

17、大鼠慢性多垂应激模型的建立现代生物医学 进展，2008, 8(1):27-29.2 shinba t, shinozaki t, mugishima g, et al clonidine immediately after immobilization stress prevents iong-lasting locomotion reduction in the rats j. proq neuropsychopharmacology and biol psychiatry, 2001, 25(8):1629-1640.3 秦瑾，王丽，刘正湘.oxldl诱发大鼠血管内皮细胞凋亡模型的建立.中

18、国组 织化学与细胞化学杂志，2003,12 (1)： 7-11.4 ghiad oni l, donald ae, cropley m, et al. men tai stress in duces transie nt endothelial dysfunotion in humansj. circulation, 2000,102(20):2473-2478.5 yu ph, lai ct, zuo dm formati on of formaldehyde from ad re naline in vivo; a potential risk factor for stress-related angiopathyj. neurochemical research, 1997, 22(5): 615