医院消毒灭菌效果监测技术 ppt课件

1、医院消毒灭菌效果监测与检验技术医院消毒灭菌效果监测与检验技术 湖南省湖南省cdc cdc 李世康李世康目录目录目录目录洁净手术部空气洁净手术部空气医院洁净手术部建筑技术规范 gb 50333-2002皮肤黏膜消毒液皮肤黏膜消毒液皮肤消毒剂卫生要求gb27951-2011;黏膜消毒剂通用要求gb27954-2011透析用水透析用水血液透析和相关治疗用水 yy0572-灭菌医疗器具敷料等灭菌医疗器具敷料等中华人民共和国药典压力蒸汽灭菌器压力蒸汽灭菌器消毒与灭菌效果的评价方法与标准 gb 15981-1995医院污水医院污水医疗机构污水排放要求 gb 18466-2005致病菌检测中大肠、致病菌检测

2、中大肠、沙门、乙型溶链、绿沙门、乙型溶链、绿脓、金葡脓、金葡分别按gb4789.3， gb4789.4， gb/t4789.11, gb7918.4, gb7918.5方法进行。国家标准国家标准 强制性标准强制性标准新旧版主要区别：新旧版主要区别：v 环境分类、环境分类、v 高中低度危险性医疗器材分类、高中低度危险性医疗器材分类、v 空气采样方法、空气采样方法、v 增加治疗用水检查。增加治疗用水检查。重点：重点：v 4.医院消毒卫生要求医院消毒卫生要求v 附录附录a 采样及检查方法采样及检查方法 类环境：类环境：采用采用空气洁净技术空气洁净技术的诊疗场所，分洁的诊疗场所，分洁净手术部和其他洁净

3、场所。净手术部和其他洁净场所。 类环境：类环境：非洁净非洁净手术部手术部（室）；产房；（室）；产房；导管室导管室；血液病病区、烧伤病区等血液病病区、烧伤病区等保护性隔离病区保护性隔离病区；重症；重症监监护病区护病区；新生儿室新生儿室等。等。 类环境：类环境：母婴同室；母婴同室；消毒供应中心的检查包装消毒供应中心的检查包装灭菌区和无菌物品存放区灭菌区和无菌物品存放区；血液透析中心（室）；血液透析中心（室）；其他普通住院病区等。其他普通住院病区等。 iv类环境：类环境：普通门（急）诊普通门（急）诊及其检查、治疗（注及其检查、治疗（注 射、换药等）室；射、换药等）室；感染性疾病科门诊和病区感染性疾病

4、科门诊和病区。环境类别环境类别 i类环境类环境类环境类环境 类环境类环境 类环境类环境 a cfu皿为平板暴露法，皿为平板暴露法，cfu/m3为空气采样器法。为空气采样器法。 b 平板暴露法检测时的平板暴露时间。平板暴露法检测时的平板暴露时间。洁净手术部洁净手术部 其他洁净场所其他洁净场所 空气平均菌落数空气平均菌落数a cfu皿皿 符合符合gb 50333要求要求 4. 0(30 min)b 4. 0(15 min) 4. 0(5 min) 4.0(5 min) cfu/m3 150 - -物体表面平均菌落数物体表面平均菌落数cfu/cm250 50 100 100 怀疑医院感染暴发或疑似暴

5、发与医院环境有关时，怀疑医院感染暴发或疑似暴发与医院环境有关时， 应进行应进行目标微生物目标微生物检测。检测。 critical device/items 进入正常进入正常无菌组织无菌组织、脉管系统脉管系统或或有无菌体液（如血液）有无菌体液（如血液）流过，一旦被微生物污染将导致极高感染危险的器材。流过，一旦被微生物污染将导致极高感染危险的器材。 semi-critical deviceitems 直接或间接直接或间接接触黏膜接触黏膜的器材。的器材。 no-critical device/items 仅与完整皮肤接触而仅与完整皮肤接触而不与黏膜接触不与黏膜接触的器材。的器材。目录目录v 相对正压

6、洁净的条件进行试验。相对正压洁净的条件进行试验。v 100100级空气洁净实验室级空气洁净实验室、100100级空气洁净操作台级空气洁净操作台v p p2 2生物安全柜、生化培养箱、霉菌培养箱、采样箱、干燥生物安全柜、生化培养箱、霉菌培养箱、采样箱、干燥箱、高压锅、冰箱、超净台、显微镜、紫外线测定仪、温箱、高压锅、冰箱、超净台、显微镜、紫外线测定仪、温湿度计、照度计等设备湿度计、照度计等设备v 计量认证：仪器、设备、定期计量认证。计量认证：仪器、设备、定期计量认证。v 监测人员需经过专业培训，掌握一定的消毒知识，熟悉消监测人员需经过专业培训，掌握一定的消毒知识，熟悉消毒设备和药剂性能，具备熟悉

7、的检验技能；选择合理的采毒设备和药剂性能，具备熟悉的检验技能；选择合理的采样时间（消毒后、消毒前）样时间（消毒后、消毒前）; ;遵循严格的无菌操作。遵循严格的无菌操作。目录目录v空气微生物污染检查空气微生物污染检查v物体表面微生物污染检查物体表面微生物污染检查v医务人员手卫生检查医务人员手卫生检查v灭菌医疗器材检查灭菌医疗器材检查v消毒医疗器材检查消毒医疗器材检查v使用中消毒液染菌量检查使用中消毒液染菌量检查v治疗用水检查治疗用水检查v医疗机构污水检查医疗机构污水检查v压力蒸汽灭菌效果监测压力蒸汽灭菌效果监测类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；、 、 类环境在消毒或规定的通风换气后从事

8、医疗活动前采样1、类环境参照gb50333 ；2、 、 类环境采用平板暴露法，布点布点方法需注意。类环境暴露15min， 、 类环境暴露5min。将平板放置于37培养箱培养48h后计数。平板暴露法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿暴露时间）。gb 15982-2012gb 50333-2002放置0.8m至1.5m高台面；行走动作轻，减少走动；监测人员穿洁净服，戴口罩，注意手卫生；先布点（放皿），后开盖；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁扣放于平皿旁；同一房间的空气与物表，均由一人操作。类环境4. 0 cfu皿皿 (15 min) ； 、 类环境 4. 0 cfu皿皿 (5 min) 。具体见

9、表1（1) 室内面积30 m2，设置内、中、外对角线3 个点，内、外布点部位距墙壁1m处。 (2) 室内面积30 m2，设4角及中央5 点，4角布点部位距离墙壁1m处。潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。棉拭子法：棉拭子法：用5cm5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有的无菌棉拭子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格板面积。剪去手接触部分，并将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内，立即送检。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应。门把等小型物体则采用棉拭子直接在 物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu件表示。倾注法是指倾注法是指将采

10、样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已融化的4548的营养琼脂营养琼脂15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置361 温箱培养48h，计数菌落数。gb15982-20121.采样面积：被采表面100/cm，取全部表面；被采表面100 cm，取100 cm。2.门把手等不规则物体表面用面拭子直接涂擦采样，用cfu/件表示件表示。3.同一房间空气、物表采样，先采空气，后才物表，最好由一个人操作。4. 样品标识一定要清楚，能溯源、追踪，以便整改。5.中和剂选用0.1%硫代硫酸钠生理盐水。 、类环境5. 0 cfu

11、cm2 ； 、 类环境 10. 0 cfucm2 。- -食物、微生物或有机物接触到的物体食物、微生物或有机物接触到的物体表面，都会留下表面，都会留下atpatp（三磷酸腺苷）（三磷酸腺苷）- -物体经清洁后，部分残留的食物、微物体经清洁后，部分残留的食物、微生物或其他有机物，通过测定这些残生物或其他有机物，通过测定这些残留物细胞内留物细胞内atpatp含量，就可以反映出物含量，就可以反映出物体的清洁度。体的清洁度。atpatp生物荧光技术生物荧光技术- has become the standard method for determining cleanliness levels on c

12、ontact surfaces during past ten years.- a direct indicator of potential for contamination. -monitoring and verification of haccp and ssop.-在过去的十年里，在过去的十年里，atpatp荧光快速检测法已经变成一荧光快速检测法已经变成一种国际测定物体表面清洁水平的标准方法、得到了种国际测定物体表面清洁水平的标准方法、得到了国际公认。国际公认。-一种直接可视的污染监测手段一种直接可视的污染监测手段-得到得到haccphaccp和和ssopssop认可的监测和检验手

13、段认可的监测和检验手段采取手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。被检人五指并拢，用浸有的棉拭子在双手指屈面双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约一只手涂擦面积约302），），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml采样液的试管内，立即送检。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和相应中和剂剂。倾注法gb15982-2012选用0.1%硫代硫酸钠生理盐水。卫生手消毒卫生手消毒：医务人员用速干手消毒剂揉搓双手，以减少手部暂居菌的过程。外科手消毒外科手消毒：外科手术前医务人员用肥皂（皂液）和流动水洗手，再用手消毒剂清除或者杀灭手部暂居菌和减少常居菌的过程

14、。使用的手消毒剂可具有持续抗菌活性。卫生手消毒后医务人员手表面的菌落总数应10cfu/cm2；外科手消毒后医务人员手表面的菌落总数应5cfu/cm2 。2 手卫生荧光检测法手卫生荧光检测法在灭菌处理后，存放有效期内采样。直接接种法直接接种法即取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基的容器中。每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的 10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于 15ml，胰酪大豆胨肉汤培养基每管装量不少于 10ml。培养 14 天，并逐日观察。1.在洁净度洁净度100级区域级区域中进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染

15、。 2.采样后送检时间不得超过6h，样品保存于4，则不超过24h。 3.如消毒因子为消毒剂，采样液中应加入中和剂。 应采有效期有效期内的样品（高压灭菌2周；环氧乙烷2年）。4.灭菌后内镜（如腹腔镜、关节镜、胆道镜、膀胱镜、胸腔镜、脑室镜等）应每月进行生物学监测并做好记录，合格标准为无菌生长。 无菌的判断：将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；培养期间应逐日逐日观察观察并记录是否有菌生长。如在加人供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养培养3 天，天，观察接种的同种新鲜培养基是否

16、再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。阳性对照管应生长良好，阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。试验无效。表2：医疗器具供试品：最少检验数量为10（瓶或支）。 1. 无菌检查法对象与环境无菌检查法对象与环境2. 培养基及其培养基及其适用性检查适用性检查（无菌性检查和灵敏度检（无菌性检查和灵敏度检查）查）（更换新批次的培养基时需做）（更换新批次的培养基时需做）3. 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液及其制备方法（如对不能用破坏性方法（如对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品的采样过程中需使用）取样的特殊医疗用品的采样过程

17、中需使用）4. 方法适用性试验方法适用性试验（每遇到新样品类型时做）（每遇到新样品类型时做）（包括薄膜过滤法和（包括薄膜过滤法和）：如）：如薄膜过滤法主要检测水溶液供试品与注射用药物等，薄膜过滤法主要检测水溶液供试品与注射用药物等，对于小型灭菌医用器具、敷料、针灸针、肠线、缝合线等供试品使对于小型灭菌医用器具、敷料、针灸针、肠线、缝合线等供试品使用直接接种法为宜。用直接接种法为宜。6. 结果判断结果判断7. 检测量表检测量表 2015版药典无菌检查法的增、修订内容版药典无菌检查法的增、修订内容 1、方法应用范围增加、方法应用范围增加“生物制品生物制品”。 2、实验环境的修订。、实验环境的修订。

18、 3、培养基体系的修订。、培养基体系的修订。 4、检查方法的整合修订。、检查方法的整合修订。 5、参照、参照usp 对表对表2、表、表3的整合修订。的整合修订。2015版中国药典2010版中国药典2010年版无菌检查环境要求： 应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内或隔离系统进行。2015年版无菌检查 在无菌条件下进行试验，环境必须达到无菌检查的要求。 环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（环境洁净度万级（c c级）级）背景下的局部百局部百级（级（a a级）级）的单向流区域内或隔离系统中进行。其全过程必须严格遵守无菌操作。防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物

19、的检出。操作前环境洁净度应经验证。日常检验需对试验环境进行监控。2010年版 1.硫乙醇酸盐流体培养基 30 35 ； 20252.改良马丁培养基 23 28 培养。3. 选择性培养基 4. 0.5%葡萄糖肉汤培养基 5. 营养肉汤培养基6. 营养琼脂培养基 7. 改良马丁琼脂培养基2015年版1. 硫乙醇酸盐流体培养基 30 35 ； 2025培养（生）2. 胰酪大豆胨肉汤培养基胰酪大豆胨肉汤培养基 20 25培养培养。 3. 选择性培养基 4. 0.5%葡萄糖肉汤培养基5. 胰酪大豆胨琼脂培养基 6. 沙氏葡萄糖肉汤培养基 7. 沙氏葡萄糖琼脂培养基 无菌检查之培养基的适用性检查无菌检查之

20、培养基的适用性检查培养基灵敏度检查实验菌株的修订 2010年版 硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌改良马丁培养基 白色念珠菌、黑曲霉 2015年版硫乙醇酸盐流体培养基:金黄色葡萄球菌cmcc(b)26 003、铜绿假单胞菌cmcc(b)10 104、生孢梭菌cmcc(b)64 941;胰酪大豆胨液体培养基:枯草芽孢杆菌cmcc(b)63 501、白色念珠菌cmcc(f)98 001、黑曲霉cmcc(f)98 0032010年版1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤培养基培养基2、接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基

21、3、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基4、接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上2015年版 1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨液体培养基2、接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基3、接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖肉汤培养基沙氏葡萄糖肉汤培养基 4、接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐的硫乙醇酸盐流体培养基流体培养基7 支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接种作为空白对照，培养3 天；v取每管

22、装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的进行产品无菌检查时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。验结果时，应重新进行方法适用性试验。v 方法适用性试验按方法适用性试

23、验按“供试品的无菌检查供试品的无菌检查” 的规定及下列要求进行操作。的规定及下列要求进行操作。方法适用性试验也可与供试品的无方法适用性试验也可与供试品的无菌检查菌检查进行。进行。 2010版 硫乙醇酸盐流体培养基接入小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌 改良马丁培养基接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉。2015版硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌大肠埃希菌ccmcc(b)44 102、生孢梭菌生孢梭菌各2管；胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨液体培养基接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌枯草

24、芽孢杆菌、白色念珠菌白色念珠菌、黑曲霉黑曲霉各2管。培养时间不得超过5天。方法适用性试验的修订在灭菌处理后，存放有效期内采样。直接接种法直接接种法即取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基的容器中。每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的 10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于 15ml，胰酪大豆胨肉汤培养基每管装量不少于 10ml。培养 14 天，并逐日观察。1.在洁净度洁净度100级区域级区域中进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染。 2.采样后送检时间不得超过6h，样品保存于4，则不超过24h。 3.如消毒因子为消毒剂，采

25、样液中应加入中和剂。 应采有效期有效期内的样品（高压灭菌2周；环氧乙烷2年）。4.灭菌后内镜（如腹腔镜、关节镜、胆道镜、膀胱镜、胸腔镜、脑室镜等）应每月进行生物学监测并做好记录，合格标准为无菌生长。 无菌的判断：将上述接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；培养期间应逐日逐日观察观察并记录是否有菌生长。如在加人供试品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，培养培养3 天，天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。阳性对照管应生长良好，阳性对照管应生长良

26、好，阴性对照管不得有菌生长。否则，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。试验无效。表2：医疗器具供试品：最少检验数量为10（瓶或支）。样品类型样品类型样本制备方法样本制备方法可用破坏性方法取可用破坏性方法取样的样的1.敷料类等非管道类样品取2个包装内的样本，剪成约10mm30mm大小的样片21片，接种含硫乙醇酸盐流体培养管5管与胰酪大豆胨肉汤培养管2管。每培养管含培养基40ml，各接种3片样片。2.注射针、针灸针、缝合针、棉签等小样本可直接接种含硫乙醇酸盐流体培养管5管与胰酪大豆胨肉汤培养管2管。每管含培养基15ml。3.输液（血）器等导管类样本选7支样本，以无菌注射器吸取5.0ml-10.

27、0ml无菌洗脱液注入管内往返摇荡5次。将样本洗脱液分别接种含硫乙醇酸盐流体培养管5管与胰酪大豆胨肉汤培养管2管。培养管含培养基15ml，每管接种样本洗脱液1.0ml。不能用破坏性方法不能用破坏性方法取样的医疗器材取样的医疗器材应在应在环境洁净度环境洁净度10 000级下的局部洁净度级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内级的单向流空气区域内或隔离系统或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于100cm2；然后将除去手接触部分的棉拭子进行。牙科手机牙科手机环境同上，将每支手机分别置于含中，页面高度应大于4.0cm，于旋涡混合器上洗涤震荡30s以上，

28、取进行无菌检查。对照与培养对照与培养培养条件：培养条件：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 30 35 2. 胰酪大豆胨肉汤培养基胰酪大豆胨肉汤培养基 20 25培养培养阳性对照：阳性对照：应根据供试品特性供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养72h内应生长良好。阴性对照阴性对照

29、:供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。在消毒处理后，存放有效期内采样。gb 15982-2012和内镜清洗消毒技术操作规范（2004年版）1.消毒剂浓度监测每日定时监测并做好记录，保证消毒效果。消毒剂使用时间不得超过产品说明书规定的使用期限。2.消毒后内镜（如胃镜、肠镜、喉镜、气管镜、鼻窦镜等）应每季度进行生物学监测并做好监测记录。3.采样时，尽量用大小一致的无菌棉签，并将棉签通过采 样管壁挤压，去除多余的采样液，使之处于湿润状态，而 不是浸泡状态，然后按30角度轻轻地有序地用力均匀地 涂抹采样品，禁用干棉签采样。医疗器材：菌落总数应20

30、cfu/件（/g或/100cm2）,不得检出致病性微生物。 ：菌落总数应200cfu/件（/g或/100cm2）,不得检出致病性微生物。详见下页样品类型样品类型样本制备方法样本制备方法可整件放入无菌可整件放入无菌试管的试管的用洗脱液浸没后震荡30s以上,取洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至4045的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml20ml，361恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/件），必要时分离致病性微生物。可用破坏性方法可用破坏性方法取样的取样的在100级超净工作台称取1g10g样品，放入装有10ml采样液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.0ml接种平皿，计数菌落数（cfu/g），必要时分离

31、致病性微生物。不可用破坏性方不可用破坏性方法取样的法取样的在100级超净工作台，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面100cm2，取全部表面，被采表面100cm2，取100cm2，然后将除去手接触部分的棉拭子进行洗脱，取洗脱液1.0ml接种平皿，用营养琼脂培养基倾注，361恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/cm2），必要时分离致病性微生物。消毒后内镜消毒后内镜取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50ml含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。混匀后取洗脱液倾皿培养。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜滤膜（0.45m）过滤浓缩

32、，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），培养计数。v 采样前准备无菌手套，采样前准备无菌手套，80ml容量的螺口瓶，及中和剂容量的螺口瓶，及中和剂 。v 螺口瓶我们用的是螺口瓶我们用的是“hxbl”和星玻璃和星玻璃 ，可以高温高压，可以高温高压，刻度为刻度为80ml。v 采样前需要瓶口酒精灯烧灼消毒采样前需要瓶口酒精灯烧灼消毒 。特此感谢陆烨提供的相关资料。特此感谢陆烨提供的相关资料。v 抽取中和剂，需要用抽取中和剂，需要用50ml的一次性注射器抽取，注意无的一次性注射器抽取，注意无菌操作。菌操作。 v 将中和剂从内镜注水口缓缓注入，避免喷溅，注意无菌将中和剂从内镜注水口缓缓注

33、入，避免喷溅，注意无菌操作，手不能接触到操作，手不能接触到“推柱推柱”内侧。内侧。 v 同时将出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。同时将出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。 v特此感谢陆烨提供的相关资料。特此感谢陆烨提供的相关资料。v 培养方法：倾皿法和培养方法：倾皿法和滤膜法滤膜法。49必要时分离致病微生物：必要时分离致病微生物：将送检液用充分震荡，取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和ss平皿，均匀涂布（），35培养48小时，观察有无致病菌生长。 库存消毒剂库存消毒剂v有效成分含量应依照有效成分含量应依照消毒技术规范消毒技术规范或或产品企业标准进行检产品企业标准进行检测。测。 使用中

34、消毒液使用中消毒液v使用中消毒液的有效使用中消毒液的有效浓度测定可用前述方浓度测定可用前述方法，也可使用经国家法，也可使用经国家卫生行政部门批准的卫生行政部门批准的消毒剂浓度试纸（卡）消毒剂浓度试纸（卡）进行监测。进行监测。采取更换前使用中消毒液与无菌器械保存液。用无菌吸管（或一次性灭菌注射器2.0ml-2.5ml）吸取消毒液1.0ml，加入到9.0ml中混匀。倾注法倾注法，用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0ml接种平皿，用营养琼脂培养基倾注，361恒温箱培养72h，计数菌落数；必要时分离致病性微生物（金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌 ）。 gb15982-2012、 消

35、毒技术规范消毒技术规范2002版版3.17.9.21.采集消毒液样品时应在消毒液内没有物品或放入物品消毒作用到规定时间之后进行采样。2. 不同消毒剂使用与之中和，以中和被检液的残效作用。3.样品标识一定要清楚，不仅要注明采样地点，且需要注明消毒液名称和有效浓度等信息，确保。如：该院13手术室洁冠牌75%乙醇消毒液（20140902）常德市汉辅医用消毒剂有限公司。灭菌用消毒液的菌落总数应为0cfu/ml；皮肤粘膜消毒液的菌落总数应符合相关标准要求（如）；其他使用中消毒液的菌落总数100cfu/ml，不得检出致病性微生物。52消毒液类别醇酚类含氯、含碘、过氧化物氯己定（洗必泰）季胺盐类醛类含有表面

36、活性剂的各种复方消毒液相相应应的的中中和和剂剂普通普通营养营养肉汤肉汤在肉汤在肉汤中加入中加入中和剂中和剂0.1%0.1%硫硫代硫酸代硫酸钠钠在肉汤中在肉汤中加入加入3%3%（w/vw/v）吐）吐温温8080和和0.3%0.3%卵磷卵磷脂脂在肉汤在肉汤中加入中加入0.3%0.3%甘甘氨酸氨酸在肉汤中在肉汤中加入加入3%3%（w/vw/v）吐）吐温温8080n本标准适用于完整皮肤和破损皮肤消毒的消毒剂，不适用于手消毒剂。n完整皮肤常用消毒剂的种类：完整皮肤常用消毒剂的种类：醇、碘、胍、季铵盐、酚、过氧化物等。n微生物污染指标微生物污染指标：完整皮肤消毒剂菌落总数 10cfu/ml(g)，霉菌和酵

37、母菌，不得检出致病菌；破损皮肤的消毒剂应。n禁用、限量：禁用、限量：铅汞砷v总结：总结：v灭菌用消毒液的菌落总数应为灭菌用消毒液的菌落总数应为0 cfu/ml；v破损皮肤的消毒剂菌落总数应为破损皮肤的消毒剂菌落总数应为0 cfu/ml；v完整皮肤黏膜消毒液的菌落总数应完整皮肤黏膜消毒液的菌落总数应10cfu/ml；v其他使用中消毒液的菌落总数应其他使用中消毒液的菌落总数应100cfu/ml。v致病菌：不得检出。致病菌：不得检出。1.应采用常规的微生物检验方法(倾注平板法)获得细菌总数计数(标准培养皿计数)。培养基应为胰蛋白酶大豆琼脂或等价物，计算菌落数目应在 35 37 下培养 后进行。48h

38、 后若呈阴性，可于后再检查。这是2.应用鲎试剂法检查内毒素，测定是否有致热原。每月1次。若采样结果超标时，须重复检查，怀疑或确定病人在治疗中有热原反应和菌血症时，应随时检测。应在按比例配制透析液装置的入口处或在混合罐的入口处，收集处理水的试样。 血液透析相关治疗用水yy0572-2005中国药典2015年版1143细菌内毒素检查法试样应在收集后 30 min 内进行化验，或立即放在 1 5下储存，并按常规程序在收集后24 h内化验。1.处理水所含细菌总数，应不得超过 。2.在水处理装置的输出端的细菌内毒素，应不得超过 ;在血液透析装置人口的输送点上的细菌内毒素，应不得超过 。5 鲎试剂鲎试剂2

39、 2支支（阴性对照管阴性对照管）+ +各各100ul100ul细菌内毒素检查用水+ +各各100ul100ul无热原水无热原水37371h1h；鲎试剂鲎试剂2 2支支（阳性对照管阳性对照管）+ +各各100ul100ul细菌内毒素检查用水+ +各各100ul100ul标准品稀释液标准品稀释液37371h1h；鲎试剂鲎试剂2 2支支（样品阳性对照管样品阳性对照管）+ +各各100ul100ul标准品标准品稀释液稀释液+ +各各100ul100ul样液样液37371h1h。鲎试剂鲎试剂2 2支支（样品管样品管）+ +各各100ul100ul细菌内毒素检查用水+ +各各100ul100ul样液样液3

40、7371h1h。共8支鲎试剂支鲎试剂，封闭管口，震荡混匀试管内容物，垂直放入371水浴中保温60602min2min，温育期间避免振动，轻轻取出，观察结果。 细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法。凝胶法分为和半定量试验，适用于：一次性使用输液器、输血器、注射器、透析水。、恒温培养箱、恒温水浴箱、电热干燥箱、漩涡混合器。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶限度试验结果为准。试验器械试验器械v 移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头）、凝集管移液管（或刻度吸管、微量加样器及无热原吸头）、凝集管（1075mm）、试管、试管架、洗耳球、封口膜、计时器、）、试管、试管架、洗耳球、封

41、口膜、计时器、75%酒精棉、剪刀、砂轮。酒精棉、剪刀、砂轮。v 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。常用的方法是在用的方法是在250 干烤至少干烤至少30分钟，也可采用其他确证不干扰分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。细菌内毒素检查的适宜方法。v 若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。试验操作过程应防止微生物是污染。微生物是污染。细菌内毒

42、素国家标准品的稀释细菌内毒素国家标准品的稀释制备：制备：v取细菌内毒素国家标准品或取细菌内毒素国家标准品或工作标准品一支，加入规定量工作标准品一支，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合置旋涡混合器上混合15分钟。分钟。v然后进行稀释，制备成然后进行稀释，制备成4个浓个浓度的细菌内毒素标准溶液度的细菌内毒素标准溶液,即即2.0、1.0、0.5、0.25（为所复核的鲎试剂的标示灵敏为所复核的鲎试剂的标示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合混合器上混合30秒钟。秒钟。v

43、坚实凝胶坚实凝胶v阳性阳性“+”v未形成凝胶未形成凝胶 凝胶不坚实凝胶不坚实 v阴性阴性“”供试品溶液供试品溶液 供试品阳性对照供试品阳性对照 阴性对照阴性对照 阳性对照阳性对照 供试品溶液供试品溶液 供试品阳性对照供试品阳性对照 阴性对照阴性对照 阳性对照阳性对照 此透析用水的内毒素含量小于1eu/ml或者5eu/ml，符合规定此透析用水的内毒素含量不小于1eu/ml或者5eu/ml，不符合规定供试品溶液供试品溶液 供试品阳性对照供试品阳性对照 阴性对照阴性对照 阳性对照阳性对照 复试时，供试品溶液需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；四管中如有一管为阳性，即可判供试品不符

44、合规定。供试品溶液供试品溶液供试品阳性对照供试品阳性对照阴性对照阴性对照阳性对照阳性对照 须复试总余氯：总余氯：采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口总余氯每日监测不得少于每日监测不得少于2次次（采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测）。粪大肠菌群：粪大肠菌群：每月每月检测不得少于1 次次。致病菌：致病菌：检测沙门菌（每季度不少于1次）和志贺菌（每年不少于2次），结核病医疗机构应根据需要检测结核杆菌。污水监测项目：污水监测项目：总余氯、粪大肠菌群、肠道致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌）；结核病医疗机构增测结核杆菌。gb18466-2005.附录a、b、c、e标准4.1.2中明确指出：排入终端已建有正常运行城

45、镇二级污水处理厂的下水道的污水，执行预处理标预处理标准准。参照gb18466-2005：详见后页 医院医院类型类型分类分类总余氯总余氯粪大肠菌群粪大肠菌群消毒接触池的接触时间1.5h,接触池出口总余氯6.510 mgl100 mpnl100 mpnl排放排放标准标准消毒接触池的接触时间1h,接触池出口总余氯310 mgl500 mpnl预处理预处理标准标准消毒接触池的接触时间1h,接触池出口总余氯28 mgl5000 mpnl（沙门氏菌、志贺氏菌、结核杆菌）总余氯的检测总余氯的检测邻联甲苯胺比色法邻联甲苯胺比色法1日常监测一般采用比色计：在含5ml样品的比色管内滴加邻联甲苯胺溶液2滴3滴，混匀