食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌课件

1、食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌Introduction l产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏又称魏氏梭菌氏梭菌(Cwelchii)，为厌氧芽孢杆菌属成员。，为厌氧芽孢杆菌属成员。广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠道之中。道之中。l条件致病菌，主要引起人的食物中毒、气性坏条件致病菌，主要引起人的食物中毒、气性坏疽和动物猝死症等疾病。毒性作用较肉毒梭菌疽和动物猝死症等疾病。毒性作用较肉毒梭菌和破伤风梭菌要弱，和破伤风梭菌要弱， 但产生毒素

2、种类繁多。但产生毒素种类繁多。食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌Contentsl产气荚膜梭菌的生物学性状产气荚膜梭菌的生物学性状l产气荚膜梭菌的致病性产气荚膜梭菌的致病性l产气荚膜梭菌的流行病学产气荚膜梭菌的流行病学l产气荚膜梭菌的检验产气荚膜梭菌的检验l产气荚膜梭菌的快速检测方法产气荚膜梭菌的快速检测方法l产气荚膜梭菌的污染及控制产气荚膜梭菌的污染及控制食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌1.形态与染色形态与染色l革兰氏阳性粗大杆菌，专性厌氧。革兰氏阳性粗大杆菌，专性厌氧。l无鞭毛，体内有明显荚膜。无鞭毛，体内有明显荚膜。l芽孢椭圆形，不大于菌体，位于次极端。芽孢椭圆形，不大于菌体，位于次极端。

3、l单独或成双排列，有时也呈短链排列。单独或成双排列，有时也呈短链排列。一、产气荚膜梭菌的生物学性状一、产气荚膜梭菌的生物学性状食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌纯培养的镜下形态产气荚膜梭菌纯培养的镜下形态电镜下的产气荚膜梭菌（电镜下的产气荚膜梭菌（C.perfringens）食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的生物学性状产气荚膜梭菌的生物学性状2.培养特性培养特性l生长活跃，代谢迅速。生长活跃，代谢迅速。l血琼脂平板：双层溶血环（靶形溶血）血琼脂平板：双层溶血环（靶形溶血） 内环完全溶血内环完全溶血 外环不完全溶血外环不完全溶血l含铁牛奶培养基：含铁牛奶培养基： “汹涌发酵

4、汹涌发酵” （stormy fermentation）食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌疱肉培养基中的产气荚膜梭菌疱肉培养基中的产气荚膜梭菌血琼脂平板上的菌落形态血琼脂平板上的菌落形态含铁牛奶中的产气荚膜梭菌含铁牛奶中的产气荚膜梭菌食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的生物学性状产气荚膜梭菌的生物学性状3.生化特性生化特性l能发酵多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和能发酵多种糖类，如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖，产酸产气；乳糖，产酸产气；l不发酵甘露糖或水杨酸。不发酵甘露糖或水杨酸。l能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的能液化明胶，产生硫化氢，不能消化已凝固的蛋白质和血清。蛋白质和血清。

5、返回食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌二、产气荚膜梭菌的致病性二、产气荚膜梭菌的致病性l多种外毒素、肠毒素；多种外毒素、肠毒素；l侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶和胶原酶等。酸酶和胶原酶等。 l分成分成A、B、C、D、E5个毒素型。个毒素型。lA型主要引起气性坏疽和食物中毒。型主要引起气性坏疽和食物中毒。C型则型则引起坏死性肠炎。引起坏死性肠炎。 食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌所致疾病所致疾病1.气性坏疽气性坏疽l致病条件与破伤风梭菌相同致病条件与破伤风梭菌相同l潜伏期短，发病迅速，病情险恶，死亡率高。潜伏期短，发病迅速，病情险恶，死亡率高。以组

6、织坏死、气肿和全身中毒为特征。以组织坏死、气肿和全身中毒为特征。2.食物中毒食物中毒l食入被大量细菌污染的食物（肉类）食入被大量细菌污染的食物（肉类）l临床表现：剧烈腹绞痛、腹泻；可自愈临床表现：剧烈腹绞痛、腹泻；可自愈3.坏死性肠炎坏死性肠炎返回食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌三、产气荚膜梭菌的流行病学三、产气荚膜梭菌的流行病学l在世界各地出现，但血清型分布不同。在世界各地出现，但血清型分布不同。l可以引起地区性流行，也有散发性报道。可以引起地区性流行，也有散发性报道。l中毒最常发生于儿童和老人。中毒最常发生于儿童和老人。l多发生在夏、秋季。多发生在夏、秋季。 返回食品卫生微生物学检验产气荚

7、膜梭菌四、产气荚膜梭菌的检验四、产气荚膜梭菌的检验l设备和材料设备和材料冰箱：冰箱：0 -4-4。恒温培养箱：恒温培养箱：3636士士11恒温水浴锅：恒温水浴锅：4646士士11显微镜：显微镜：1010100 100 均质器或灭菌乳钵均质器或灭菌乳钵厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式灭菌吸管：灭菌吸管：1mL1mL（具（具0.01mL0.01mL刻度），刻度），10mL10mL（具（具0.1mL0.1mL刻度）刻度）灭菌试管：灭菌试管：16mmX160mm16mmX160mm灭菌平皿：直径灭菌平皿：直径90mm90mm灭菌锥

8、形瓶：灭菌锥形瓶：500mL500mL食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的检验产气荚膜梭菌的检验l培养基和试剂培养基和试剂1.疱肉培养基：疱肉培养基：GB/T4789.28-2003中中4.672.亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺嘧啶琼脂亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺嘧啶琼脂(SPS) ： GB/T4789.28-2003中中4.693.液体硫乙醇酸盐培养基液体硫乙醇酸盐培养基(FT) ： GB/T4789.28-2003中中4.704.动力一硝酸盐培养基：动力一硝酸盐培养基：GB/T4789.28-2003中中4.725.含铁牛奶培养基：含铁牛奶培养基：GB/T4789.28-2003中中4.7

9、16.卵黄琼脂培养基：卵黄琼脂培养基：GB/T4789.28-2003中中4.687. 0.1蛋白陈水：蛋白陈水：GB/T4789.28-2003中中4.858.硝酸盐还原试剂：硝酸盐还原试剂：GB/T4789.28-2003中中3.179.革兰氏染色液：革兰氏染色液：GB/T4789.28-2003中中2.2食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的检验产气荚膜梭菌的检验l活菌计数培养检验程序食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的检验l确证试验检验程序食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌确证实验确证实验l1.革兰氏染色镜检：产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，

10、位于菌体中央或近末端，其宽度一般不大于菌体。l2.动力-硝酸盐还原实验 用接种环（针）穿刺接种动力一硝酸盐培养基，于36士1培养24h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯磺酸液各0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌确证实验确证实验l3.取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基，46水浴中培养2h，观察有无“暴烈发酵”现象，5h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。l4.用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平板至少可

11、接种10点），于36士1厌氧培养24h，观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌的检验l菌数计算菌数计算 根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，根据黑色菌落的计数和确证试验的结果，计算每克（毫升）食品检样的含菌数。计算每克（毫升）食品检样的含菌数。l例如：10-4稀释液的平板长有黑色菌落100个，而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含产气荚膜梭菌数为： 100X0.7X1047X105返回食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌五、产气荚膜梭菌快速检测方法五、产气荚膜梭菌快速检测方法 随着产气荚膜梭菌分子生物学研究的深入，随着产气荚膜梭菌分子生物学研究的深入，该菌的毒素基因相继被克隆测序，在此基础上该菌的毒素基因相继被克隆测序，在此基础上出现了许多鉴定菌型和判断致病性的方法。出现了许多鉴定菌型和判断致病性的方法。l缩短了时间，能够较快得到结果，操作简单缩短了时间，能够较快得到结果，操作简单l比如比如PCR、LAMP等。等。返回食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌六、产气荚膜梭菌的污染及控制六、产气荚膜梭菌的污染及控制 掌握产气荚