26-2LDL设计开发方案

1、©设计开发方案编号：HR-SHSJ0026项目名称低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（直接测定法）（简称：LDL）产品概述低密度胆固醇（LDL-c）是低密度脂蛋白（LDL）中的胆固醇，它可反映低密度脂蛋 白的多少，低密度脂蛋白的主要功能是将胆固醇转运到肝外组织细胞，满足它们对胆固 醇的需要。冋时也是所有血浆脂蛋白中首要的致动脉粥样硬化性脂蛋白。是致动脉硬化 的罪魁祸首，俗称“坏胆固醇”。血清中LDL正常参考范围为 0-3.36mmol/L （各医院的 测试方法不冋，参考值不兀全相冋）。1 ）低密度脂蛋白胆固醇与动脉粥样硬化的关系血清低密度脂蛋白胆固醇水平升高是动脉粥样硬化性心脑血管疾病的主

2、要危险因 子。降低血LDL- C水平可以减少将来发生心脑血管事件的危险性，而且危险性大小取决 于LDL-C降低程度。流行病学研究表明血LDL-C水平与心脑血管事件危险性负相关。近期众多研究表明，心脑血管事件与LDL/ HDL比值明显相关。颈动脉粥样硬化近年来作为许多大规模心血管临床试验的一个“替代终点”，成为反映全身动脉粥样硬化病变的一个“窗口 ”。颈动脉内中膜厚度增厚是动脉粥样硬化的亚临床表现。在颈动脉内中膜厚度增厚时，表明已存在大动脉僵硬度增加，因此早期发现颈动脉改变对靶器官损害的评估及 处于亚临床心血管病变的患者进行旱期预防具有重要意义。2 ）低密度脂蛋白胆固醇与冠心病的关系近年来，随着

3、研究的深入，血脂代谢紊乱己被公认为冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病，CHD发病的重要因素。许多研究表明，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋自胆固醇（LDL-C）在冠心病的发生发展中起到了重要作用。人们己经逐渐认识到H DL-C对冠状动脉的保护作用以及降低LDL-C可以减少CHD的发生发展。对 LDL-C/HDL-C比值的研究发现，该比值是评估CHD勺又一重要指标。3 ）低密度脂蛋白胆固醇与糖尿病大血管并发症的关系糖尿病的大血管病变常常合并有高的LDL血症、高的TG血症、高的TC血症和低的HDL血症。在糖尿病患者的脂质代谢紊乱中，LDL与糖尿病的关系十分密切，它是糖尿病患者发生大血管病

4、变的主要危险因子。在姜丽燕的研究论文中也证实了这一点，LDL的危险性远远高于高血压、高血糖及吸烟、高尿酸血症等。糖尿病患者中会有一小部分的 病人确实存在LDL水平不是很高，大部分都会有比较高的LDL水平，但即使不是很高的LDL也足以诱发AS,糖尿病患者血中的小而密的LDL增加，而小而密的 LDL本身就是糖尿病大血管病变的独立危险因素，它可以使冠心病的危险性增加3-5倍。有研究发现，小而密的LDL增加常常合并有TG增加，HDL的减少，当这三者并存时，则冠心病的危险 性增加了 5-7倍。同时，在糖尿病患者中，糖基化的LDL以及氧化的LDL升高也是导致糖尿病大血管并发症的危险因素。TG的升咼是胰岛素

5、抵抗（IR）的标志，常常和较咼的血糖有着密切关系，TG增咼会影响LDL的代谢，促进 LDL由普通型向小而密型转换 ；并且 还会影响到HDL的代谢，使得 HDL分解代谢增加、浓度下降；并影响到凝血因子并使得 血液处于高凝状态。HDL还与脑血管疾病发病相关。UKPDS的研究发现，LDL每增加1.Ommol/L，冠心病的危险性增加1.57倍，HDL每降低Ommol/L，冠心病危险性增加0.15倍。脂质代谢紊乱确实是会增加糖尿病患者的大血管并发症危险。随着对LDL-C的深入研究，检测方法也不断发展。目前已发展了三代。最新的方法 为匀相测定法，该法免除了对样品预处理步骤，可直接上机测定，在自动生化仪普及

6、的 基础上很快被临床实验室接受，该方法的原理为试剂1使血清中高密度脂蛋白胆固醇和极低密度脂蛋白胆固醇经化学反应被消除。试剂2中的变性剂释放出低密度脂蛋白胆固醇后，LDL在胆固醇酯酶的作用下生成胆固醇，胆固醇再氧化为H2O2利用H2O2与4-氨基安替比林和HDAOSS行反应，生成有色醌亚胺，根据醌亚胺颜色深浅测出LDL-C的含量。引用标准和规范GB/T 191-2009包装储运图示标志YY/T 0466.1-2009医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号第1部分GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）全国临床检验操作规程（第3版）体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求

7、意见稿）国食药监械2007229号体外诊断试剂注册管理办法（试行）国食药监械2007240号体外诊断试剂临床研究技术指导原则 国食药监械2007240号体外诊断试剂说明书编写指导原则国家食品药品监督管理局令第10号医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定产品构成试剂盒由液体双试剂组成。试剂1主要成分：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、硫酸葡糖糖、二甲基苯胺钠盐（HDAOE N- （2-乙酰氨基）-2-氨基乙磺酸等。试剂2主要成分：过氧化物酶、4-氨基安替比林、曲拉通、Proclin300 ）等。预期用途本试剂盒用于体外定量测定人体血清中低密度脂蛋白胆固醇（LDL）的含量，临床上主要用于高胆固

8、醇血症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。主要技术参数或指标1、 试剂空白：试剂空白吸光度A空白w0. 100 （37C，光径1cm, 546nm）,2、 分析灵敏度：浓度为 3.36mmol/L时，吸光度差值 A> 0. 100;3、准确度：质控品测试，测定结果在质控范围内；4、精密度：重复性 CV（ % w 5%批间差w 8%5、 线性范围：在（0.1-10.00 ） mmol/L 线性范围内，r > 0.990。在1.50-10.00 ） mmol/L范围内偏差不超过10% 测疋结果（0.1-1.50 ） mmol/L时绝对偏差不超过 0.15mmol/L。I 几申 U I U

9、 M U ILJ长沙海润生物技术有限公司n 长沙海润生物技术有限公司湎罚*T同申 n 9_f JMi d 円 Q u 尸6、稳定性：原包装试剂盒在2C8C密闭避光贮存，有效期为12个月。开瓶后，28 C避光储存可稳定 2周。检验原理本试剂盒米用直接测定法，试剂1使血清中高密度脂蛋白胆固醇和极低密度脂蛋白胆固醇经化学反应被消除。试剂2中的变性剂释放出低密度脂蛋白胆固醇后，LDL进行以下反应。胆固醇酯+H2O胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸胆固醇+Q胆固醇酯氧化酶胆淄烯酮+HbQH2Q+4-氨基安替比林+HDAQS过氧化物酶 醌亚胺+4H2Q通过在546nm测定醌染料的吸光度，计算出LDL的含量。实施方案

10、本项目开发实施计划周期为：2013年07月01日起2015年09月30日止，具体进度安排如下：1、2013年07月01日8月30日完成主要原材料的研究、筛选与米购工作。2、2013年09月05日前完成主要原材料的验收检验工作。3、2013年09月20日前完成配方和工艺的选定，样品小试及试生产验证工作。4、2013年11月20日前完成中试生产放大与验证工作。5、2015年01月31日前完成分析性能评估、稳定性研究及机型验证。6、2014年11月10日2014年12月31日间完成注册及临床样品的生产与自检。7、2015年03月31日前完成产品的注册检验。& 2015年05月31日前完成产品的临床试验。9、2015年06月30日前完成注册申报资料的整理及注册申报工作。10、2015年09月30日前完成体系考核，跟