榆黄蘑、红平菇和双孢菇子实体中α.doc

1、榆黄蘑、红平菇和双抱菇子实体中a-半乳糖苷酶理化性质的研究a -半乳糖苷酶(a-galactosidase, EC 321.22) 是一种催化移除低聚糖或 多糖末端非还原性D-半乳糖的外切糖苷酶。a -半乳糖苷酶在食品和饲料工业、 血型转换、治疗法布里氏病及器官移植等方面有着广泛的应用。尤其在饲料工业中，a -半乳糖苷酶是去除豆粕中a -半乳糖苷寡糖类抗营养 因子的有效方法。本研究从榆黄蘑、红平菇、双抱菇子实体中纯化分离该酶 , 并 对其理化性质以及对棉籽糖家族的降解效果做了较深入全面的研究。以新鲜的榆黄蘑子实体为材料 , 结合使用阴阳离子交换层析和凝胶过滤层析 , 分离纯化出一种酸性a -半

2、乳糖苷酶PCGI,纯化倍数为264倍,纯化后酶的比活为 7.92 U/mg。该酶是一种双亚基蛋白，分子量为57 kDa,大亚基分子量为34 kDa, 小亚基分子量为 26 kDa。以pNPG为底物，该酶的最适pH和最适温度分别为5.0和500C。PCGI对酸 性蛋白酶、中性蛋白酶、 a- 糜蛋白酶、胰蛋白酶具有显著的抗性。SDS, Cd2+, Cu2+, Hg2+, AI3+, Fe3+ 和Ag+寸其具有强烈的抑制作用。 NBS 显著抑制该酶活性表明色氨酸残基是酶活性中心的必需基团。DEPC显著提高该酶的活性表明组氨酸是该酶活性中心的必需基团。底物多 样性和薄层色谱分析结果表明 PCGI能够高

3、效并完全降解棉籽糖和水苏糖。以新鲜的红平菇子实体为材料，分离纯化出一种酸性a -半乳糖苷酶PDGI, 纯化倍数为 290倍,纯化后酶的比活为 52.18 U/mg 。该酶是一种单亚基蛋白 ,分 子量为 60 kDa。以pNPG为底物，该酶的最适pH和最适温度分别为5.0和500E。该酶具有 较宽的pH稳定性和良好的温度稳定性，此外，该酶对酸性蛋白酶具有一定抗性。PDG受 K+,Cd2+,Cu2+,Hg2+,AI3+,Fe3+ 和 Ag+勺强烈抑制。化学修饰剂 DEPC. 丁二酮(DIC)和TNBS寸该酶具有显著的激活作用,表明组氨酸残基,赖氨酸残基 和精氨酸残基参与了该酶的催化反应。NBSff

4、i PCM对酶活性具有强烈的抑制作用,表明色氨酸残基和巯基是酶活性 中心的必需基团。 底物多样性和薄层色谱分析结果表明该酶能够有效并完全降解 棉籽糖和水苏糖。以新鲜双抱菇子实体为材料,分离纯化出一种酸性a -半乳糖苷酶ABGI，纯 化倍数为3079倍,纯化后的酶的比活为193.12 U/mg。该酶为单亚基蛋白,属于 GH27家族,分子量为43 kDa。以pNPG为底物，该酶的最适pH和最适温度分别为4.0和60C。该酶具有较 宽范围的pH稳定性,并对中性蛋白酶和a -糜蛋白酶具有抗性。SDS,Cu2+, Hg2+, Fe3+和 Ag+强烈抑制9 ABGI的活力。化学修饰剂 DEPCDIC、TNBS寸ABGI具有一定的激活作用，NBSDTT二硫苏糖醇)和PCMB对氯汞苯甲酸) 则强烈抑制ABGI的活力。双抱菇a-半乳糖苷酶能够高效降解pNPG棉籽糖、水苏糖、瓜尔豆胶、槐 树豆胶和蜜二糖 , 降解率分别为 100%、148.3%、41.5%、30.1%、20.0%和 4.4%。 以上结果表明,榆黄蘑、红平菇、双抱菇a -半乳糖苷酶具有良好的pH稳定性和 蛋白酶抗性，进一步拓宽了优良a -半乳糖苷酶的来源，同时对降解豆科植物中的 容易引起胀