HPLC法测定阿日申―18中栀子苷的含量

1、HPLC 法测定阿日申 18 中栀子苷的含量 摘 要 目的：测定阿日申 -18 中栀子苷的含量。 方法： 采用 HPLC 法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相 为乙腈-水（15 : 85）,检测波长为238nm,流速为1.0ml/min 结果：梔子苷在 0.06500.8125卩g/ml范围内呈良好的线性 关系。栀子苷平均加样回收率为1 0 1 .7% ， RSD 为 1.5%（n=9）结论：该方法简便、灵敏，可用于制剂的质量控制。关键词 阿日申 -18；栀子苷； HPLC中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号1007-8517（2015） 06-0013-02阿日申-18

2、是由枫香脂、冬葵果、决明子、党参、草乌 （制）、麻黄、苦参、黄精、栀子、文冠木、木香、五灵脂 （制）、石菖蒲、诃子、川楝子、瞿麦、黑云香、人工麝香 十八味药组成的水丸，该方具有清热、泻火、凉血的功效 1-2 ，可治疗银屑病、皮肤瘙痒、湿疹、疖肿、梅毒等各种 皮肤病及风湿病症。该方主要成分之一栀子对本方临床疗效 有重要作用，本文采用高效液相色谱法测定栀子中主要有效 成分栀子苷的含量 3 。实验表明，该方法简单、准确、重现 性好，可有效的控制产品的质量，可作为质量控制的方法。1 仪器与试药1.1 仪器 Alltech 高效液相色谱仪 Series1500， UV201 紫外检测器，自动进样器； T

3、P-300 超声仪。1.2 试药 栀子苷对照品（批号： 110749-200613，中国 药品生物制品检定所提供） ；阿日申 -18 （批号： 080705、 090616、090617）由内蒙古通辽市蒙医研究所制剂室提供。2 方法和结果2.1色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18柱（250mm x 4.6mm, 5 卩 m）;流动相：乙腈-水（15 : 85）;流速：1.0ml/min ; 进样量：10卩l;柱温：30 C ;检测波长：238nm。理论塔板 数按栀子苷峰计算应不低于 3000。2.2对照品溶液的制备 称取梔子苷对照品16mg，精密 称定，置 100ml 量瓶中，加甲醇

4、溶解并稀释至刻度，摇匀， 精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（制成每1ml含梔子苷30卩g的溶液）。2.3 样品溶液的制备 取装量差异项下的本品适量，研 细，取约1.6g，精密称定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇 25.0ml，称定重量，超声处理（功率 160W, 50kHz） 30min , 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液3.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀， 即得。2.4 阴性对照试验 按上述方法制备样品溶液和对照品 溶液。另取阴性样品（按处方比例并以相同工艺制备的无栀 子的样品），按阿日申 -18 溶液制备法制得阴性对照

5、溶液。分 别精密吸取阴性溶液、 阿日申-18溶液、对照品溶液各10卩I, 注入Alltech高效液相色谱仪Series1500,在同一色谱条件下 进行测定，结果：阴性色谱图中，在与栀子苷对照品及样品 阿日申 -18 色谱图相同保留时间处无色谱峰出现，表明配方 中的其他组分对阿日申 -1 8中栀子苷的测定无干扰。2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 1、 2、 5、 8、10、15、20、25卩I分别进样，按上述色谱条件进行测定， 以峰面积为纵坐标（丫）,以对照品进样量为横坐标（X），绘制标准曲线。结果梔子苷在 0.37623.7620卩g/ml范围内线 性关系良好，回归方程为：丫=1.5E

6、+6X+3692.7 , r=0.99985。2.6精密度试验 精密量取梔子苷对照品溶液10卩I，在上述色谱条件下连续进样 6 次，测定栀子苷峰面积，结果栀 子苷峰面积的 RSD （n=6）为1.2%。2.7 重复性试验 精密称取同一批样品（批号：090616）6 份，研细，按上述样品制备方法制备样品溶液，在上述色 谱条件下进行分析测定，测得每份样品含量。结果栀子苷的 平均含量（n=6 ）为2.11mg/g, RSD为0.1%。见表1。2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、 2、 4、6、& 10、15、20h取样10卩I，按上述色谱条件进样测定。 RSD （n=6）为0.2%，表

7、明供试品溶液 20h内稳定。2.9 加样回收试验 取供试品（含量 1.864mg/g） 9份， 各约0.8g，精密称定，分别置 9个具塞锥形瓶中，再分别在 其中 3 个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为 0.1738mg/ml 的栀 子苷对照品甲醇溶液 5ml （约相当于供试品含有量的 75%） 及甲醇溶液20ml,另3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照 品溶液 12ml （约相当于供试品含有量的 100%）及甲醇溶液 13ml，其余3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照品溶液16ml （约相当于供试品含有量的125%）及甲醇溶液9ml，分别称定重量，超声处理 30min，取出，再称重，用甲醇补足 减失的

8、重量，摇匀，滤过。各取续滤液10卩l进样，测定每份含量，计算回收率，梔子苷平均回收率（n=6 ）为101.7%。RSD 为 1.5%。结果见表 2。2.10 样品测定 按含量项下方法制备样品溶液，在上述 色谱条件下进行测定，三批样品的测定结果见表 3。3 讨论3.1 提取条件的优化 根据文献 4-5，中药栀子的栀子苷 含量测定方法中，选用甲醇作为提取溶剂，故本研究也采用 甲醇作为提取溶剂。分别对不同溶剂体积及不同超声时间进 行了对比试验，最后得到最优化的提取方法为：溶剂甲醇， 加入量 25ml ，超声处理 30min。3.2 检测方法的优点 本文中定量方法准确、 灵敏、专属 性强，可作为控制阿日申 -18 制剂质量的检测方法。参考文献1 那莎，郭国田， 王宗殿， 等.栀子及其有效成分药理研 究进展 J. 中国中医药信息杂志， 2005，12（1）：90-92.2 方尚玲， 刘源才，张庆华，等.栀子苷镇痛和抗炎作用 的研究 J. 时珍国医国药， 2008，19（8）：1374-1376.3 刘瑛，张浩梔子药材中梔子苷的含量测定