神经病学专业毕业论文[精品论文]大鼠局灶脑缺血再灌注后核因子c-Rel、Bcl-xl表达及其作用机制的实验研究

1、神经病学专业毕业论文 精品论文 大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel、bcl-xl表达及其作用机制的实验研究关键词：脑血管病 脑缺血再灌注 核因子c-rel bcl-xl 细胞凋亡 神经保护摘要：脑血管病是中枢神经系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的

2、重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗

3、氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl

4、-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+pdtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl

5、-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p>0.05）；随着缺血/再灌注的时间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注

6、2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24

7、h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。 （3）核因子c-rel免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染，胞核无黄染；i/r组：再灌注2h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见阳性细胞增多，胞核明显黄染；和nc组、sc组比较，有显著差异（p&

8、amp;lt;0.05）；再灌注6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐增多（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （4）bcl-xl免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染（p>0.05），i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位bcl-xl阳性表达明显增加，

9、至12h达顶峰，和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （5）bcl-xl mrna检测结果：i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐增加，12h达顶峰，和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；缺血/再灌注24h、48、72h，bcl-xl mr

10、na表达相对强度逐渐减少，24h和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：和nc组、sc组比较，bcl-xl mrna表达相对强度略有增加，无显著差异（p>0.05）。 结论：（1）wistar大鼠脑局灶性缺血/再灌注后2h，大鼠缺血区核因子c-rel激活并表达逐渐增加，至12h达高峰，随着再灌注时间延长，核因子c-rel表达下降，48h、72h降至基础水平，而缺血区神经元神经元的凋亡表现出和核因子c-rel相反的时相规律，说明核因子c-rel的活化和表达增高抑制了缺血/再灌注

11、后神经元的凋亡。 （2）局灶脑缺血/再灌注后2h，bcl-xl的表达逐渐增高，至12h达高峰，48h、72h降至基础水平，表现出和核因子c-rel相同的规律，说明局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （3）用pdtc干预后，局灶脑缺血/再灌注后大鼠缺血区核因子c-rel和bcl-xl表达的时相规律消失，提示局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的活化和表达增高诱导和上调了bcl-xl的表达。 （4）核因子c-rel诱导bcl-xl表达，抑制局灶脑缺血/再灌注导致的细胞凋亡，发挥神经保护作用。正文内容 脑血管病是中枢神经系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死

12、亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不

13、同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-re

14、l及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+p

15、dtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p>0.05）；随着缺血/再灌注的时

16、间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神

17、经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、

18、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。 （3）核因子c-rel免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染，胞核无黄染；i/r组：再灌注2h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见阳性细胞增多，胞核明显黄染；和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐增多（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺

19、血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （4）bcl-xl免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染（p>0.05），i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位bcl-xl阳性表达明显增加，至12h达顶峰，和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马

20、等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （5）bcl-xl mrna检测结果：i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐增加，12h达顶峰，和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；缺血/再灌注24h、48、72h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐减少，24h和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：和nc组、sc组比较，bcl-xl mrna表达相对强度略有增加，无显著差异（p&

21、;gt;0.05）。 结论：（1）wistar大鼠脑局灶性缺血/再灌注后2h，大鼠缺血区核因子c-rel激活并表达逐渐增加，至12h达高峰，随着再灌注时间延长，核因子c-rel表达下降，48h、72h降至基础水平，而缺血区神经元神经元的凋亡表现出和核因子c-rel相反的时相规律，说明核因子c-rel的活化和表达增高抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （2）局灶脑缺血/再灌注后2h，bcl-xl的表达逐渐增高，至12h达高峰，48h、72h降至基础水平，表现出和核因子c-rel相同的规律，说明局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （3）用pdtc干预后，局灶脑缺血/

22、再灌注后大鼠缺血区核因子c-rel和bcl-xl表达的时相规律消失，提示局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的活化和表达增高诱导和上调了bcl-xl的表达。 （4）核因子c-rel诱导bcl-xl表达，抑制局灶脑缺血/再灌注导致的细胞凋亡，发挥神经保护作用。脑血管病是中枢神经系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因

23、此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋

24、亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-

25、xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+pdtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神

26、经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p>0.05）；随着缺血/再灌注的时间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完

27、整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经

28、元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。 （3）核因子c-rel免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染，胞核无黄染；i/r组：再灌注2h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见阳性细胞

29、增多，胞核明显黄染；和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐增多（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （4）bcl-xl免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染（p>0.05），i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，

30、大鼠脑缺血区皮质、海马等部位bcl-xl阳性表达明显增加，至12h达顶峰，和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （5）bcl-xl mrna检测结果：i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐增加，12h达顶峰，和nc组比较，有显著差异（p<0.0

31、5）；缺血/再灌注24h、48、72h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐减少，24h和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：和nc组、sc组比较，bcl-xl mrna表达相对强度略有增加，无显著差异（p>0.05）。 结论：（1）wistar大鼠脑局灶性缺血/再灌注后2h，大鼠缺血区核因子c-rel激活并表达逐渐增加，至12h达高峰，随着再灌注时间延长，核因子c-rel表达下降，48h、72h降至基础水平，而缺血区神经元神经元的凋亡表现出和核因子c-rel相反的时相规

32、律，说明核因子c-rel的活化和表达增高抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （2）局灶脑缺血/再灌注后2h，bcl-xl的表达逐渐增高，至12h达高峰，48h、72h降至基础水平，表现出和核因子c-rel相同的规律，说明局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （3）用pdtc干预后，局灶脑缺血/再灌注后大鼠缺血区核因子c-rel和bcl-xl表达的时相规律消失，提示局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的活化和表达增高诱导和上调了bcl-xl的表达。 （4）核因子c-rel诱导bcl-xl表达，抑制局灶脑缺血/再灌注导致的细胞凋亡，发挥神经保护作用。脑血管病是中枢神经

33、系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发

34、挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及

35、时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），

36、单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+pdtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p

37、>0.05）；随着缺血/再灌注的时间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸

38、，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺

39、血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。 （3）核因子c-rel免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染，胞核无黄染；i/r组：再灌注2h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见阳性细胞增多，胞核明显黄染；和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐增多（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p

40、>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （4）bcl-xl免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染（p>0.05），i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位bcl-xl阳性表达明显增加，至12h达顶峰，和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p&gt

41、;0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （5）bcl-xl mrna检测结果：i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐增加，12h达顶峰，和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；缺血/再灌注24h、48、72h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐减少，24h和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：和nc组、sc组比较，bcl-xl mr

42、na表达相对强度略有增加，无显著差异（p>0.05）。 结论：（1）wistar大鼠脑局灶性缺血/再灌注后2h，大鼠缺血区核因子c-rel激活并表达逐渐增加，至12h达高峰，随着再灌注时间延长，核因子c-rel表达下降，48h、72h降至基础水平，而缺血区神经元神经元的凋亡表现出和核因子c-rel相反的时相规律，说明核因子c-rel的活化和表达增高抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （2）局灶脑缺血/再灌注后2h，bcl-xl的表达逐渐增高，至12h达高峰，48h、72h降至基础水平，表现出和核因子c-rel相同的规律，说明局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl抑制了缺血/再灌注后神经

43、元的凋亡。 （3）用pdtc干预后，局灶脑缺血/再灌注后大鼠缺血区核因子c-rel和bcl-xl表达的时相规律消失，提示局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的活化和表达增高诱导和上调了bcl-xl的表达。 （4）核因子c-rel诱导bcl-xl表达，抑制局灶脑缺血/再灌注导致的细胞凋亡，发挥神经保护作用。脑血管病是中枢神经系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一

44、，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用

45、的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达

46、及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+pdtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学

47、变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p>0.05）；随着缺血/再灌注的时间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细

48、胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现

49、为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。 （3）核因子c-rel免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染，胞核无黄染；i/r组：再灌

50、注2h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见阳性细胞增多，胞核明显黄染；和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐增多（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （4）bcl-xl免疫组化结果：nc组和sc组大鼠脑缺血区皮质、海马等部位可见少量阳性细胞，胞浆黄染（p>0.0

51、5），i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位bcl-xl阳性表达明显增加，至12h达顶峰，和nc组、sc组比较，有显著差异（p<0.05）；再灌注24h、48、72h，大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞逐渐减少，48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：大鼠脑缺血区皮质、海马等部位阳性细胞稍增多，和nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）。 （5）bcl-xl mrna检测结果：i/r组脑缺血/再灌注2h、6h、12h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐增加，12h达顶峰，和

52、nc组比较，有显著差异（p<0.05）；缺血/再灌注24h、48、72h，bcl-xl mrna表达相对强度逐渐减少，24h和nc组比较，有显著差异（p<0.05）；48h、72h与nc组、sc组比较，无显著差异（p>0.05）；i/rp组：和nc组、sc组比较，bcl-xl mrna表达相对强度略有增加，无显著差异（p>0.05）。 结论：（1）wistar大鼠脑局灶性缺血/再灌注后2h，大鼠缺血区核因子c-rel激活并表达逐渐增加，至12h达高峰，随着再灌注时间延长，核因子c-rel表达下降，48h、72h降至基础水平，而缺血区神经元

53、神经元的凋亡表现出和核因子c-rel相反的时相规律，说明核因子c-rel的活化和表达增高抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （2）局灶脑缺血/再灌注后2h，bcl-xl的表达逐渐增高，至12h达高峰，48h、72h降至基础水平，表现出和核因子c-rel相同的规律，说明局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl抑制了缺血/再灌注后神经元的凋亡。 （3）用pdtc干预后，局灶脑缺血/再灌注后大鼠缺血区核因子c-rel和bcl-xl表达的时相规律消失，提示局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的活化和表达增高诱导和上调了bcl-xl的表达。 （4）核因子c-rel诱导bcl-xl表达，抑制局灶脑缺血/再灌注导致

54、的细胞凋亡，发挥神经保护作用。脑血管病是中枢神经系统（cns）常见病、多发病，具有高致病率、高死亡率、高复发率，严重危害人类的生命健康，给社会和家庭带来沉重负担，但由于缺血再灌注的病理损伤机制尚未完全阐明，一直是国内外研究的重点和难点。随着研究脑缺血再灌注病理生理机制的进展，发现凋亡是脑缺血再灌注后神经元死亡的两种形式之一，是脑缺血再灌注后半影区神经元损伤的最终环节，因此，深入研究脑缺血再灌注后细胞凋亡机制，是目前研究脑缺血的重点之一，抑制神经元凋亡可能成为脑缺血治疗新的靶点。 核因子-b（nf-b）是一种重要转录调节因子，存在于脑血管内皮细胞、神经元、胶质细胞中，在脑缺血时，被特异性激活，表

55、达增高，在脑缺血再灌注时炎症、凋亡等病理过程中发挥重要作用。核因子-b（nf-b）5种亚基组成不同的同源或异源二聚体，在脑缺血后损伤中可能发挥不同的作用。核因子c-rel是核因子-b的亚基之一，在各种病理生理过程中主要是抗凋亡作用，但脑缺血后c-rel的作用及表达尚不清楚。bcl-2家族蛋白是一类对细胞凋亡具有重要调控作用的蛋白，bcl-xl是其重要成员之一，主要起抗凋亡作用，bcl-xl蛋白是核因子c-rel的下游靶基因。抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸酯（pyrrolidinedithiocarbamate，pdtc）能够选择性抑制转录因子nf-b的活性，阻断其促进下游靶基因表达的作用。因此，拟探

56、讨脑缺血再灌注时c-rel及bcl-xl的表达及时空规律与pdtc的干预效果，探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 目的：（1）探讨wistar大鼠局灶脑缺血/再灌注后核因子c-rel的表达及时空规律；（2）探讨大鼠局灶脑缺血/再灌注后bcl-xl的表达及时空规律；（3）探讨核因子c-rel及bcl-xl在脑缺血再灌注损伤中的作用，通过分析c-rel和bcl-xl的关系及pdtc的干预效果，为选择性阻断nf-b治疗脑缺血提供实验依据。 方法：雄性wistar大鼠，通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血1.5h/再灌注模型，随

57、机分为正常对照组（nc组），假手术组（sc组），单纯缺血/再灌注组（i/r组），缺血/再灌注+pdtc100mg.kg-1组（i/rp）。除正常对照组3只大鼠，其余各组根据再灌注时间点不同分为缺血1.5h再灌注2、6、12、24、48、72h共6个亚组，每个亚组6只大鼠。 通过he染色了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化。神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测核因子c-rel、bcl-xl蛋白的表达。采用rt-pc法检测bcl-xl mrna的表达。 结果：（1）大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，再灌注2h、6h、12h，评

58、分逐渐减少的趋势，但各时相点比较差异无显著性（p>0.05）；随着缺血/再灌注的时间延长，表现出明显的神经运动功能障碍；i/r组与sc组比较，有显著差异（p<0.05）。pdtc干预组各时相点评分较sc组高，有显著差异（p<0.05）。 （2）光镜下见ns组和sc组大鼠脑组织神经细胞、胶质细胞、海马锥体细胞等排列有序，组织结构完整，间隙无异常。i/r组可见脑组织有缺血性损伤改变，再灌注2h，mca供血区大脑皮质、丘脑、纹状体神经元呈轻度缺血改变，缺血区可见脑组织轻度疏松，胶质细胞核略深染，细胞周围组织疏松，海马锥体细胞层结构基本正常；再灌注6h、12h

59、，缺血性损伤进一步加重，在缺血区出现细胞浆强嗜酸，核固缩深染，在缺血半影区可见凋亡和貌似正常的神经元；再灌注24h，缺血区扩展到整个mca供血区，呈苍白色并和周围组织分界清楚，缺血中心区神经元、胶质细胞及细胞周围均中度水肿，大脑皮质和纹状体部位多见神经元坏死，与周围组织有较大的间隙，出现细胞死亡留下的空泡，缺血边缘区也表现为水肿。再灌注48h、72h，缺血中心区明显神经元、胶质细胞溶解坏死，出现空泡结构，但整个缺血区面积较24h有所减少。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，缺血区面积均较i/r组相应减小。pdtc组也可见右侧mca区脑缺血灶，与i/r组比较，再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h，缺血区细胞水肿较轻，变性坏死数量较少，