利用峰面积分析混合DNA样品

利用峰面积分析混合DNA样品 【关键词】阴道混合物，强奸，dna 【】d9192；q75 【】b 【】10079297(20xx)01005103 在法医dna检验过程中，经常会遇到多个体的混合样本， 如受害人和嫌疑人的混合样品，几个嫌疑人的混合样品。荧光 标记自动分析str系统，不仅能根据位点等位基因的个数判断 样品是否为混合样品，而且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光 总强度)确定混合样品中各组分的混合比例，推断混合样品中各 组分的基因分型_1j。gill等建立了利用峰面积分析混合样品的 方法_2。本文利用该法对一宗案件中的混合样品进行了分析， 推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型。 材料和方法 20xx年于中山某地发生一宗强奸案，送检材料为事主血纱， 嫌疑人1血纱，嫌疑人2血纱，以及在嫌疑人2住处提取的一根 带毛囊的阴毛(上沾有少量分泌液)，分别编为14号样品。按 chelex一100法 提取dna，采用ampfi str identifiler复合扩 增试剂盒(美国abi公司)同时扩增d8sl179、d21sll、d7s820、 ( f1p0、193s1358、tho1、d13s317、d16s539、d2s1338、 d19s433、vwa、tpox、d18s51、d5s818、fga等15个位点和性 别位点amelogenin，扩增产物在abi310遗传分析仪上进行电泳 分离，genescan30软件分析结果，genotypern 25软件进行基 因分型。 结 果 一 、样品分型 样品分型结果见表1。 表1 样品分型结果 二、结果分析 结果分析方法参照文献2。 (一)确定是否有混合样品 1根据谱带数目。正常情况下进行常染色体str分型时， 纯合子应检出一条带，杂合子检出2条带，混合样品会出现谱带 数目增多。4号样品在d8sl179等3个位点检出4个等位基因 (表现为4条谱带)，在d21s11等6个位点检出3条谱带，提示 该样品为混合样品。 2等位基因峰面积的不对称。理论上对于杂合子来说，两 个等位基因的峰面积应大致相等，比例接近于1；而混合样品由 于等位基因的叠加，可能会出现不正常的杂合子现象，两个等位 基因的峰面积差异会增大。表2列出了混合比例为1：10、1：1、 10：1时出现2个等位基因时峰面积的比例。4号样品在th01、 d13s317、tpox、d18s51、amelogene等位点均检出2条带，类似 杂合子，但2条带的峰面积明显不平衡(见表3)，同样提示4号 样本为混合样本，且为男女混合。 (二)确定混合样品中供体的数目 样品4所有位点出现的等位基因数最多为4个，提示供体数 为2个。 (三)确定混合样品中各供体的基因型组合 对于杂合子来说，两个等位基因的峰面积应大致相等，比例 接近于1。基于此原理，分析者可以通过观察到的峰面积来推断 可能的基因型组合和各组分的比例。对确定是二供体组成的混 合样本来说，分型结果可以表现为一带型、二带型、三带型或四 带型。除一带型外，其余各种表现均可提供基因型组合的信息。 其中四带型由于直观地表现出2个供体的基因型，所以最易于 通过其推断2个供体的基因型组合及其比例。 假设某一位点出现的4个等位基因依片段由小到大的顺序 定为a、b、c、d，观察到的面积分别为paa、pab、pac、pad，定义 mx为所有位点都接近相等，然后给出一个估计的混合比例 (mx)，如果解释正确的话，观察值和期望值应接近，这对任意基 因型组合可用峰面积的剩余值eq来检验，峰面积的剩余值eq= (pa观察值一pa期望值) ，峰面积的剩余值越低，该基因型组 合的可能性越高。以4号样品的d8sl179位点为例，混合物中 检出10(a)、14(b)、15(c)、16(d)，据eq值可推断混合比例 (mx)bcad=062，相反混合比例(mx)adbc =038，其他的 基因型组合(如ab，cd)不可能存在，因为eq不可能接近零。 表4列出了对出现4个等位基因的位点的分析，在列出某个 位点的所有可能的基