【毕业学位论文】（Word原稿）采用免疫组化法检测u-PA与VEGF在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌生物学行为的关系

- 1 - 第一章 前言 胃癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，根据最近的癌症统计数据， 2011年全球新发胃癌病例约 例，死亡病例约 例 ，约占全部癌症死亡人数的 l/101，其在恶性肿瘤中的死亡率居第二位 1,2，胃癌高发地区主要集中在东亚、拉丁美洲和中欧地区，其中东亚地区以日本、韩国和中国为主，这三国胃癌病例数约占全球总数的 2/3。我国胃癌的年发病率占世界胃癌的 42%，是影响人民健康的主要疾病之一 3。胃癌的高发病率和高死亡率一直严重威胁着人类身心健康，给患者家庭和社会带来了极其沉重的经济和社会负担 4。对于可切除胃癌来说，根治性手术是主要治疗手段之一，早期胃癌手术根治率可达 90%以上，然而我国胃癌早期检出率仅为 10%，远低于同为胃癌高发地区的日本和韩国(50%60%)5。也就是说，大部分胃癌患者就诊时肿瘤已属进展期，导致术后复发转移率高达 406，其主要原因是胃癌患者症状、体征不典型，检测时缺乏特异性标志物 ， 绝大多数患者在确诊时已进入晚期，或伴有广泛的淋巴结转移、腹膜转移或远处脏器转移而丧失了手术根治机会 7，无法行胃癌根治手术，导致胃癌患者 5 年生存率不足 20%8，其浸润和转移是影响生存质量 和预后 的主要因素，也是影响治疗效果的重要因素之一 9。 胃癌发生的病因尚不明确，目前尚无证据表明任何一种单一的因素是胃癌发病的直接原因，可能的致病因素有：饮食因素、胆汁反流、幽门螺杆菌感染、亚硝胺以及以上多种因素和遗传因素等。胃癌的发生发展大部分需要经历正常胃粘膜慢性胃炎 萎缩性胃炎肠上皮化生上皮内瘤变早期胃癌进展期胃癌这一多阶段、多步骤、逐渐演变的过程。吸烟、幽门螺杆菌感染、摄入亚硝酸盐食物（腌制和熏烤类食物）、高盐饮食等多种因素造成正常胃粘膜细胞发生原癌基因激活和抑癌基因失活，导致正常胃粘膜细胞逐渐恶变为胃癌细胞 10。多数研究表明胃癌的浸润和转移是多基因、多因子协同作用的结果 11，主要涉及肿瘤细胞的粘附改变；细胞外基质 ( 降解增加；细胞增殖改变；细胞迁移能力增强；新生血管形成等。其中细胞外基质 (基底膜 (降解是肿瘤侵袭和转移过程中极其重要的一个步骤。胃癌患者的预后与胃癌临床病理分期、组织类型、浸润胃壁深度、淋巴结转移情况以及治疗措施有关，而胃癌的侵袭和转移能力是影响病人预后的最主要因素，转移往往是导致病人死亡的直接原因。 肿瘤细胞的侵袭转 移是一个复杂的生物学过程，涉及癌细胞从原发灶脱落 、- 2 - 侵袭和穿透基底膜，降解细胞外基质和向远处转移等步骤。肿瘤转移主要包括：血管生成，肿瘤细胞脱离原发部位，浸润周围正常组织，与细胞外基质 (包括基底膜 )发生粘附并使之降解，穿越血管或淋巴管壁进入管腔并到达远处部位，在继发部位不断增殖形成转移瘤。癌细胞的侵袭转移能力与其产生降解细胞外基质的蛋白酶的能力密切相关，其中纤溶酶原激活因子 (降解细胞外基质的过程中起着关键性作用 12。纤溶酶原激活因子包括尿激酶型（ 组织型 (尿激酶型纤溶酶原激活剂（ 一种多功能丝氨酸蛋白酶，具有水解蛋白和信号传导等多种功能，其中最重要的作用是激活纤溶酶原转变为纤溶酶，后者可催化降解细胞外基质 (重要组成部分 (纤维蛋白和层粘连蛋白）和基底膜等多种底物，与肿瘤侵袭转移密切相关 13，它既可以通过催化纤溶酶原转化为纤溶酶导致细胞外基质和基底膜的降解，从而促进肿瘤细胞 侵袭与 转移 14；也可通过与细胞表面的特异性受体结合促进细胞的迁移和增殖 15。另外，活性纤溶酶还能激活基质金属蛋白酶的前体，活化的 进一步降解 细胞迁移和肿瘤侵袭转移过程中细胞外基质的降解有重要作用 16。同时， 过与细胞表面特异性尿激酶受体 (合启动 赖的蛋白水解系统，进而促进肿瘤的侵袭、转移， 统与多种实体肿瘤的浸润、转移和肿瘤血管生成有关 17。 肿瘤生长具有明确的血管依赖性，新生血管的形成，是实体肿瘤发生、发展甚至转移的必要途径 18。肿瘤通过新生血管从宿主获取营养成分，又经过血管向宿主输送肿瘤细胞，增强肿瘤灶的远处转移能力 19。肿瘤血管 生成与肿瘤的生长、浸润、转移及预后密切相关 20。在众多与血管新生有关的因子中，血管内皮生长因子 (其受体 (肿瘤新生血管形成过程中起重要作用。血管内皮生长因子（ 血管内皮细胞的特异性有丝分裂原 21，是恶性肿瘤细胞分泌的最重要的血管生成促进因子 22，主要 通过结合 细胞外的信号传递到细胞内，引起下游信号瀑布样级联反应，从而发挥其重要的生物学作用 23。要通过刺激血管内皮细胞的增殖、分化与迁移、增加微小血管的通透性及促进基质降解等机制来促进肿瘤的浸润与转移 24，它与恶性肿瘤患者预后的关系是近年来的研究热点。本研究旨在通过采用免疫组化法检测 胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌生物学行为的关系，并进一步为临床诊断、治疗及预后提供较为可靠地依据。 - 3 - 第二章 材料与方法 本来源 收集甘肃省人民医院和兰州大学第一医院 2011 年 10 月 2012 年 10 月期间手术切除并经病理证实的 98 例胃癌标本，所有患者术前均未接受过放化疗，其中男 62 例，女 36 例，年龄 39，平均年龄 53 岁，中位年龄 55 岁，根据 2003年国际抗癌联盟（ 布的胃癌 期标准为胃癌患者进行临床分期， 期 30 例， 68 例；高、中分化腺癌 45 例，低分化腺癌 53 例；浸润达浆膜层者 60 例，浸润未达浆膜层者 38 例；发生淋巴结转移者 66 例，未发生淋巴结转移者 32 例。随机选取上述手术切除标本的癌旁正常胃组织（距胃癌组织边缘 5 上）作为对照组。所选组织均经 4多聚甲醛固定 24 h，常规石蜡包埋， 4 m 厚连续切片，供免疫组化检测。 要试剂 试剂名称 公司名称 兔抗人 用型） 武汉博士德生物工程有限公司 兔抗人 用型） 武汉博士德生物工程有限公司 剂盒 武汉博士德生物工程有限公司 武汉博士德生物工程有限公司 苏木素 兰州大学第一医院制备 二甲苯 西安三浦化学试剂有限公司 盐酸 杭州市长征化工厂 磷酸盐 (冲液 北京中杉金桥生物技术有限公司 枸橼酸三钠 湖北省医药公司 主要仪器 仪器名称 公司 名称 - 4 - 石蜡切片机 德国 恒温电烤箱 冰箱 山东省青岛海尔公司 电磁炉 学显微镜 日本 湿盒 武汉博士德生物技术有限公司 不锈钢 压力锅 福州迈新生物技术开发有限公司 恒温孵育箱 上海益恒试验仪器有限公司 显微摄像系统 日本 实验方法 石蜡切片置烤箱 58 30 使切片紧密粘附。 切片常规脱蜡水化：石蜡切片经二甲苯和梯度酒精逐级脱蜡，水化至蒸馏水， 冲洗 5 次。 3%温作用 10 分钟以灭活内源性酶。 洗 5 次。 热修复抗原：将切片浸入 橼酸盐缓冲液（ 放入电热式压力蒸汽灭菌器中高压修复 20 然冷却， 5 次。 吸去片上的 加 10%正常山羊血清，室温下置湿盒内 30 弃去多余的血清，滴加适当稀释的一抗， 4 过夜（ 16 h 以上）。 自冰箱中取出湿盒，室温下复温 30 洗 5 次。 甩去 ，滴加生物素化山羊抗兔 37 孵育 20 洗 5 次。 甩去 ，每张切片滴加过氧化物酶标记链酶卵白素工作液， 37 孵育 20 洗 5 次。 色 ： 使用 色试剂盒 (取 1 馏水 ， 加入试剂盒中 A、 B、 C 试剂各 1 滴 ， 混匀后加至切片。室温显色 ， 镜下控制反应时间。 苏木素轻度复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 - 5 - 结果判定 性染色均以肿瘤细胞胞质为主，细胞质呈棕黄色染色者为阳性细胞，随机选取每张切片的 5 个高倍（ 400）视野，计数阳性细胞数并计算阳性细胞的百分率，阳性细胞数 5% 定义为 () ， 5% 25%定义为 (+)， 25%50%定义为 (+)， 50%定义为 (+)。以 (+ +)均视为阳性表达， ()视为阴性表达。 统计学分析 采用 计软件对数据进行分析，计数资料组间比 较采用 2检验，等级资料相关性分析采用 相关分析。以 P差异有统计学意义。 - 6 - 第三章 结果与讨论 果 性表达主要位于癌细胞胞质内，癌旁正常胃粘膜细胞胞质少量表达，呈棕黄色或棕褐色（图 1检测出 胃癌组的阳性表达率为 明显高于癌旁正常组 的 两组间比较差异有统计学意义（ 2=P； 胃癌组的阳性表达率为 明显 高于癌旁正常组 的 两组间比较差异有统计学意义 （ 2= P表1）。 98 例胃癌 组织 中， 低分化 胃癌 组织中的阳性 表达 率为 明显高于 中、高分化的 在胃癌浸润达浆膜层中的阳性 表达 率为 85%， 明显高于 浸润 未达浆膜层 的 在已发生淋巴结转移 胃癌组织 中的 阳性 表达 明显高于 未 发生淋巴结转移的 在胃癌 组织 期（ +期）中的阳性 表达 率为 明显高 于 期（ +期） 的 60%， 上述各组间 比较， 差异均 具有统计学意义（ 2=P=2=P=2=P2=P=（表 2） ； 低分化 胃癌 组织中的阳性 表达 率为 明显高于 中、高分化的 在胃癌浸润达浆膜层中的阳性 表达 率为 明显高于 浸润未达浆膜层的 在已发生淋巴结转移胃癌组织中的阳性 表达 率为 明显高于 未发生淋巴结转移的 在胃癌组织 期（ +期） 中的阳性 表达 率为 明显高于 期（ +期）的 50%，上述各组间比较，差异均 具有统计学意义 （ 2=2=P=2=P=2=P（表2）。 在 98 例胃癌 组织 中， 为阳性者 62 例，同为阴性者 10 例，- 7 - 二者之间在胃癌中的表达呈显著正相关（ P见表 3。 附表 表 1 胃癌组织和癌旁正常组织中的表达 of in 别 例数(n) 达 2值 P 值 达 2值 P 值 阳性 (n) 阴性 (n) 阳性率（） 阳性 (n) 阴性 (n) 阳性率（） 胃癌组 98 76 22 4 24 常对照 组 30 2 28 27 2 胃癌组织中 表达与临床病理特征的关系 of in 床病理特征 例数 达 2值 P 值 达 2值 P 值 阳性（ n） 阳 性 率（ %） 阳性（ n） 阳性率（ %） 分化程度 高 、中分化 45 30 9 分化 53 46 5 润深度 达浆膜层 60 51 2 达浆膜层 38 25 2 巴结转移 有转移 66 59 6 转移 32 17 8 期 + 30 18 60 5 + 68 58 9 3 胃癌组织中表达的相关性分析 in P 值 10 11 1 0 14 5 12 13 0 1 7 10 0 1 7 6 - 8 - 附图 图 1 免疫组化 检测 胃癌组织和癌旁正常组织中的表达 (200) 1 of in by P 00) A: of in B: of in - 9 - 图 2 免疫组化 检测 胃癌组织和癌旁正常组织中的表达 (200) 2 in by P 200) C: in D: in - 10 - 图 3 免疫组化 检测 胃癌组织和癌旁正常组织中的表达 (400) 3 of in by P 00) A: of in B: of in - 11 - 图 4 免疫组化 检测 胃癌组织和癌旁正常组织中的表达 (400) 4 in by P 400) C: in D: in - 12 - 论 恶性肿瘤是当今严重危害人类健康的疾病，其最重要的生物学特性是侵袭和转移，流行病学调查显示：大量的肿瘤 患者死亡是由肿瘤的转移（ 起。当肿瘤被确诊后，对于尚未扩散到肿瘤起始器官以外组织的肿瘤，其治愈率大多数可以达到 100%。然而当肿瘤发生远处转移时，通常难以治愈。事实上，目前临床新发现的肿瘤患者中大约 30%首诊时即有转移发生， 30%患者在随后的几年中将发生转移。尤其是死亡率靠前的肿瘤，如肺癌、胃癌等，患者在被临床确诊时，往往已处于晚期。给外科手术的切除和系统性抗癌药物的使用带来一定的困难，为此 ， 探索肿瘤浸润、转移的分子机制对其早期诊断、治疗及预后的评估有着重要价值。 肿瘤 细胞的侵袭转移是一个复杂的生物学过程，主要涉及癌细胞从原发部位脱落 、 侵袭和穿透基底膜，降解细胞外基质 (包括基底膜 )和向远处转移等步骤。肿瘤的浸润（ 指肿瘤细胞破坏基底膜并渗透到基质中，但尚未进入局部毛细血管和淋巴管的阶段，是恶性肿瘤的典型特征。具体包括细胞间粘着的丧失、细胞 胞外基质的蛋白酶解以及肌动蛋白细胞骨架改变参与的移动。浸润需要细胞间、细胞与基质间连接的改变，这是由基质降解和细胞迁移相 互 协调的结果。肿瘤转移（ 指肿瘤细胞脱离原发 生长部位，通过各种途径的转运，在机体内远隔部位的器官或组织继续增殖生长，形成同样性质肿瘤的一个复杂的多步骤的连续过程 25。 肿瘤转移主要包括：血管生成 、 肿瘤细胞脱离原发部位 、 浸润周围正常组织 、 与细胞外基质 (包括基底膜 )发生粘附并使之降解 、 穿越血管或淋巴管壁进入管腔并到达远处部位 、 在继发部位不断增殖形成转移瘤。癌细胞的浸润与转移是整个转移事件中密不可分的相互关联的两个方面，浸润是转移的基础和前提，转移是浸润的结果。癌细胞浸润四周组织为转移铺平道路，浸润中有转移，转移中有浸润。由此可见肿瘤的浸润与转移是多步骤、多阶段逐渐演进的过程，涉及肿瘤细胞与宿主细胞间的一系列相互作用，涉及某些基因的异常表达，并受多种细胞因子的影响和调控。 在 癌细胞的浸润和转移过程中会遇到一系列的组织屏障，这些屏障由 主要成分包括：胶原、糖蛋白、层黏蛋白（ 纤连蛋白等。研究表明，肿瘤细胞的浸润与转移必须突破其周围的基质屏障。在恶性肿瘤侵袭和转移的过程中 ， 细胞外基质和基底膜是肿瘤细胞侵袭的第一道屏障 26。由于肿瘤细胞要多次穿越基底膜并 侵入周围组织，因此对 括基底膜）的降解是肿瘤浸润转移的关键步骤之一。已有充分的证据表明肿瘤细胞的侵袭转移能力与其产生或诱导宿主细胞产生降解 基底膜的蛋白酶能力相- 13 - 关 27，各种 分的降解需要多种基质水解酶的协同作用才能完成，这些酶有的由癌细胞直接分泌，有的则由癌细胞诱导宿主的其他细胞产生。癌细胞通过其表面受体与 分粘附后，激活和释出各种蛋白溶解酶来降解基质成分，为癌细胞的移动形成通道。与肿瘤细胞降解 关的蛋白水解酶主要分为：丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、弹力蛋白酶和半黄氨酸蛋白酶。丝氨酸蛋白酶类包括血浆纤溶酶原激活因子（ 白细胞弹力蛋白酶及组织蛋白酶G（ ）。 尿激酶型（ 组织型（ 种形 式，分别具有不同的生理功能。 用系统在细胞外基质和基底膜的降解、促进肿瘤侵袭和转移过程中起核心作用 28，纤溶酶原（ 纤维蛋白溶解酶激活因子（ 作用下形成纤溶酶（ 后者可降解细胞外基质，并且可促使胶原酶原变为活性的胶原酶共同参与 降解过程。这种组织基质的降解作用在肿 瘤的转移过程如肿瘤血管生成、肿瘤细胞脱落、基质浸润、侵入和逸出循环系统、继发脏器移行和环境改造等重要步骤中体现出极为重要的效应。 肿瘤的生长可分为无血管期（ 血管期（ 体积超过 1肿瘤即进入血管期，需要新生血管维持营养供给和排泄代谢产物从而迅速生长并发生转移。否则，氧气和营养在其中的扩散就会受到限制。通过血管生成形成的肿瘤血管系统克服了这种限制，同时也提供了肿瘤细胞转移的 通 道 。 肿瘤生长和转移的形态学基础是肿瘤新生血管的形成 ， 肿瘤新 生血管的形成是多基因、多环节、多程序调控的结果。阻遏其中一个或多个基因表达，有可能抑制肿瘤新生血管的形成，从而抑制肿瘤的生长和转移 29。缺乏血管生成，肿瘤生长受到限制，肿瘤细胞发生转移的可能性也较小 30。有研究表明肿瘤组织的血管新生被抑制，肿瘤的生长速度明显变慢以及肿瘤组织的体积较不被抑制的情况 明显减小 31。血管生成的快慢及其滋生的丰富与否，决定肿瘤发展速度的快慢和侵袭能力的强弱，也就是说，肿瘤的发生、发展和侵袭与血管生成密切相关。一般情况下，血管化常常是肿瘤向恶性阶段演进的关键时期，超微结构和免疫组化的观察发现，不同人类肿瘤组织中血管的数量和密度与肿瘤的侵袭转移潜能密切相关 32。作为肿瘤间质的组成成分，肿瘤内血管生成不仅供给原发肿瘤生长所需的营养，也使肿瘤细胞易于向远处播散，更是肿瘤细胞能否在转移部位生存的重要条件。 目前一般认为血管形成有两种形式：血管发生（ 血管生成（ 两阶段合称为血管新生。正常情况下，血管新生主要见于胚胎发育阶段，当机体处于 “ 促血管生成环境 ” 下，如伤口愈合、组织缺氧、炎症或肿瘤 33，生理性血管生成的平衡才 会 被打破。血管发生是指在胚胎发育阶段，中胚层源的成血管细胞（ 途、聚集，相互联接形成早期原始的血管结- 14 - 构，这一过程形成人体的主要大血管。血管生成是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉以出牙方式发展出来的新生血管，是肿瘤细胞为了适应局部缺氧环境而发生的由已经存在的微血管芽生出新的毛细血管。血管生成过程包括生理性血管生成和病理性血管生成，具体为： 血管通透性的增加； 内皮细胞活化分泌出血管生成所需要的蛋白酶降解基底膜和细胞外基质； 内皮细胞增殖与迁移； 新生血管床的成熟和固定。血管生成受一些分子的调节，这些分子既存在于健康组织中，也存在与病理组织中。 肿瘤血管通过多重机制生长，其中有一些在形式上与正常血管发育中观察到的一样，其机制表现为： 内皮细胞出牙形成桥（ 间质组织延伸到血管腔中（ 同正常的血管发育相比，控制这些事件发生的信号是高度无序的，从而导致混乱的血管组织，不均匀的血管流以及局部的缺氧。除此之外，骨髓及外周血中的内皮细胞前体成为肿瘤的发生源。 在这里他们能够直接或间接地形成肿瘤血管内皮内衬。围绕在肿瘤周围的淋巴管运输间质液并为肿瘤细胞的转移提供通路 34。 肿瘤血管的生成是一个复杂的过程，一般涉及到肿瘤细胞、内皮细胞、吞噬细胞及其分泌因子的紧密相互作用。肿瘤血管生成的的发生主要是由于肿瘤细胞释放血管生成因子激活血管内皮细胞，促进内皮细胞的增殖和迁移，同时内皮细胞旁分泌某些血管生长因子刺激肿瘤细胞的生长。肿瘤细胞和内皮细胞的相互作用自始至终贯穿于肿瘤血管生成的全过程。通常肿瘤新生毛细血管由之前存在的旧血管通过扩展而形成，此过程必须依靠血管内皮细胞间的 相互 黏附。内皮细胞通过细胞外基质的粘附作用侵入血管周围间质，并通过细胞间的黏附作用促进血管条索的形成 35。与正常组织相比，肿瘤内的毛细血管往往处于持续生长状态。这些血管极少分化成熟，且在形态学上表现出很大的差异，如结构粗糙、走形紊乱、常呈不规则的狭窄、扩张及扭曲。多数血管壁薄，细胞间间隙较大，血管基质 不完善，这种微血管容易发生肿瘤细胞渗漏进入血管腔，进而向远处播散，肿瘤的血管生成受到来自宿主细胞和肿瘤细胞本身产生分泌的血管生成刺激因子和抑制因子的 双重 调节。目前明确的有调节血管生成作用的内源性因子主要包括： 血管生成刺激因子： 。 血管生成抑制因子： 血管内皮细胞的特异性有丝分裂原 21，是恶性肿瘤细胞分泌的最重要的血管生成促进因子 22， 为一种特异性作用于血管内皮的生长因子，在肿瘤新生血管 形 成过程中起着至关重要的作用 36。其主要通过刺激血管内皮细胞的增殖、分化与迁移、增加微小血管的通透性及促进基质降解等机制来促进肿瘤的浸润与转移 24。 肿瘤血管形成的主要诱导剂 ， 可能直接通过作用于内皮细胞，吸引巨噬细胞、平滑肌细胞迁移并固定于微血管生成局部，使管- 15 - 腔被覆平滑肌细胞，并逐步形成肌性动脉。同时， 能间接通过刺激内皮细胞释放一氧化氮，引起冠状小动脉血管扩张，使内皮细胞产生利于肌性动脉生成的生长因子，并在这些因子的作用下形成肌性动脉 37。 胃癌的关系 一般特性 由内质网膜系统合成的一种高度特异性的丝氨酸蛋水解白酶，长度为 6.5 编码分子量为 55蛋白酶。基因位于第 10 号染色体长臂 ( 10它包括两条二硫键相连的多肽链、一个 C 端的丝氨酸蛋白酶区和一个 N 端的 氨基末端片段（ 与多种途径的信号转导，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，调节趋化、黏附、迁移 38。 细胞合成与分泌时为活性较弱的单链无活性的尿激酶原 (含有 411 个氨基酸，为糖化的单链多肽。激肽释放酶、组织蛋白酶 B 等作用下转变为有活性的双链丝氨酸蛋白酶后，迅速与 激酶型纤溶酶原激活物受体）结合，活性 催化无活性的纤维蛋白溶酶原转化为纤维蛋白溶酶 13，而生成的纤溶酶又反馈激活化为有活性的 与组织修复、炎性细胞迁移、新生血管生成等病理生理过程 39；其不仅能直接降解细胞外基质中的蛋白核心部分，还能激活基质金属蛋白酶 ( 系统这一重要的基质降解系统，并加强基底膜成份如纤维蛋白、层粘连蛋白、胶原、弹性蛋白 等的降解 40。同时与纤维蛋白溶酶一起促进细胞外基质和血管基质的降解，从而促进肿瘤的侵袭和转移 41。此外，还可引起细胞形态改 变、细胞骨架重塑及特异性角蛋白磷酸化等 42。在肿瘤侵袭转移过程中， 用系统在细胞外基质和基底膜的降解、促进肿瘤侵袭和转移过程中起核心作用 28，与肿瘤血管的生成、浸润及转移密切相关。 促进肿瘤侵袭转移过程中发挥着重要的作用，主要表现在： 活化的 直接作用于细胞外基质，降解细胞外基质中的纤维连接蛋白、胶原等成分； 激活胶原酶的特 性，使胶原酶分解胶原组织，它还可以激活纤溶酶，使基底膜中多种成分降解，从而促进肿瘤的侵袭与转移； 通过激活基质金属蛋白酶系统，进一步促进 降解 43，而 降解又有利于肿瘤新生血管的形成 ； 高表达可诱导肿瘤血管的生成，同时促使肿瘤细胞侵入血管，导致肿瘤细胞的转移； 激活 时 能上调 4， 统与 互促进，极大地增加了 降解及肿瘤新生血管的形成，从而促进了肿瘤细胞的侵袭和转移。 45 研究发现 其受体 合后，介导 胞内信号的传导，进而促进细胞- 16 - 的增殖、分化和迁移 。 表达与胃癌发生、发展的关系 46研究报道 在肾小 管上皮细胞、单核细胞、肺上皮细胞及成纤维细胞中表达，也可在肿瘤细胞内表达； 47研究发现 胃癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中的表达均明显高于正常组织，并与患者的不良预后相关；大量研究表明 乳腺癌 48、胰腺癌 49、肺癌 50等恶性肿瘤中均有过表达； 51报道胃癌、结肠癌的癌中心、癌边缘、正常组织中 性逐渐降低， 含量以 癌中心部位最高； 52发现高侵袭性胃癌细胞系的 现高水平表达； 53研究发现癌组织中的 性率明显高于癌旁非癌组织； 54的研究显示 癌组织中 表达与正常胃组织有明显的区别。 本研究结果表明：在用免疫组化方法检测 98 例胃癌组织中 表达水平时， 达阳性率为 显著高于癌旁正常组织的 两组间比较，差异有统计学意义（ 2=P提示 能在胃癌的发生、发展过程中起重要作用， 高表达可能成为胃癌早期诊断的重要分子生物学指标之一 。 表达与胃癌浸润、转移的关系 55和 56研究发现， 多种 肿瘤中过表达，在肿瘤的浸润和转移中起重要作用； 57研究表明许多恶性肿瘤包括肺癌、乳腺癌、大肠癌及胰腺癌等组织中发现有 高表达，且与肿瘤的侵袭转移和预后密切相关； 58发现 乳腺癌、卵巢癌及肺癌中的表达明显高于正常组织， 达的增高在肿瘤的浸润转移中扮演了重要角色； 59报道， 其受体的高表达与原发性大肠癌的远处转移呈正相关，而与大肠癌患者的生存率呈负相关，并认为 其受体可能是大肠癌的独立诊断因子； 60通过对 现阳性表达的结肠癌肝转移患者进行研究，发现在肿瘤发生转移前 高表达； 38对胰腺浸润性导管腺癌 ( 及其癌前病变患者进行长期临床随访，发现 统在胰腺癌的发生 、 发展中扮演重要角色； 28与 61研究报到 激活与恶性肿瘤的侵袭力有关； 62对 4 种胃癌细胞株的 达情况进行研究，结果显示，在胃癌细胞株 ， 达的 量最多，达的 力最强，同时，在接种过 5 的小鼠中发现了腹膜种植瘤，这表明 能与肿瘤转移密切相关。 63研究表明- 17 - 表达可能与胃癌的浸润和转移密切相关； 64研究发现 胃癌的独立预后因素； 65研究发现胃癌患者外周血与骨髓中 表达水平明显高于正常对照组，并与肿瘤侵袭、转移及术后复发显著相关，提示外周血 达是胃癌转移的标志。 66报道 性表达可提供胃癌患者预后的信息，提示 能促进了胃癌的侵袭和转移，故可 作为判断胃癌预后的指标之一。 67研究发现 胃癌组织中的 性率分别为 其中浸润型胃癌的阳性表达率明显高于膨胀型胃癌； 胃癌的阳性表达率明显高于 I、 胃癌；血管侵袭癌和远处转移的癌组织阳性表达率明显高于无血管侵袭与无远处转移的癌组织。同时 ，阴性组患者的平均生存时间明显长于阳性组。这提示 能促使肿瘤的侵袭和远处转移，故可作为胃癌预后的指标之一； 68研究发现 胃癌组织中 的阳性表达率 比正常粘膜高， 伴 淋巴结转移的胃癌组织中 达水 平 较 无淋巴 结 转移者 高 ，且 表达的胃癌患者生存率降低， 提示 统 可能 参 与了胃癌的侵袭转移过程， 统可 能 成为胃癌预后的重要指标 之一 ； 表达的胃癌患者预后不良， 提示高表达与肿瘤的侵袭能力 密切相 关。 本研究还发现胃癌分化程度不同， 表达明显不同，低分化者（ 的阳性率明显高于中、高分化者（ （ 2=P=浸润深度达浆膜层者（ 85%）明显高于未达浆膜层者（ （ 2=P=有淋巴结转移者（ 显著高于无淋巴结转移者（ （ 2=P随着临床 期的增加， 胃癌组织中的阳性表达率亦显著增加， + 期的阳性率（ 明显低于 + 期的阳性率（ （ 2=P=与 54的报道类似，其可能原因是高表达 因的癌细胞降解细胞外基质和 基底膜 的能力增强，使这部分细胞更易向组织深层和脉管浸润，更易脱离原发灶并发生远处转移，同时，高表达的 激活纤溶酶 原 转化为纤溶酶，降解细胞外基质 ，一方面有利于增生的内皮细胞穿过基底膜以出芽方式迅速迁移参与血管生成过程；另一方面有利于癌细胞穿过降解的基质迅速向周围浸润、扩散，同时侵入血管和淋巴管向远处转移。提示 过表达可反映胃癌的生物学行为，并在肿瘤浸润转移中具有重要作用，可作为判断胃癌侵袭转移潜能及预后的分子生物学指标。 一般特性 促血管生成和抗血管生成因子的局部平衡是肿瘤生长过程中的血管生成开- 18 - 关，此种平衡一旦打乱，则使肿瘤获得生长和转移的能力 69。 名血管通透性因子（ 是重要的血管生成正性调节因子，1989 年 次从牛的脑垂体细胞中发现血管内皮生长因子（ 其在生理及病理血管再生中起关键性作用 70。 族成员包括 A、 B、 C 和 等，通常讲的 指 基因位于染色体 6长 148 个外显子、 7 个内含子组成，编码产物为 45同源二聚体糖蛋白，亚基之间通过二硫键相连。 大多数哺乳动物肿瘤中表达，具有对内皮细胞的选择性和调节血管生成等多个步骤的能力， 恶性肿瘤细胞分泌的最重要的血管生成促进因子 22，即有强烈的促血管内皮细胞增殖的作用，主要通过刺激血管生成、促进内皮细胞 的 增生和迁移、增加微小血管的通透性及促进基质降解等机制促进肿瘤血管形成、浸润与转移 24。 过多方面促进肿瘤血管的生成： (1)促进血管内皮细胞的增殖及迁移； (2)拮抗新生血管内皮细胞的凋亡； (3)直接作用于血管内皮细胞而增加血管通透性，有利于肿瘤细胞进入血管； (4)有促进血管构建的作用； 通过调节肿瘤组织 生成控制血管的舒缩，增加肿瘤细胞渗透的范围； 激活淋巴上皮细胞释放某些趋化因子，促进肿瘤细胞的转移。 为一种重要的促血管生成因子之一，在肿瘤血管新 生过程中起着至关重要的作用，其主要生物学功能包括 71： (1)刺激肿瘤新生血管的生成； (2)促进内皮细胞的分裂增殖和迁移； (3)具有强烈的血管渗透性， 导致微小血管的渗透性增加，使血浆蛋白外渗并沉积在血管外基质中，为肿瘤细胞的分化生长和新生毛细血管网的建立提供必须的营养； 72研究显示血管内皮细胞在作用下，能产生某种蛋白酶，降解之前血浆蛋白外渗形成的基质，这为肿瘤的侵袭和转移提供了良好的物质基础。 (4)促进某些蛋白水解酶的作用使细胞外基质降解。 上述作用均在胃癌的血管形成、浸润与转移中起着重要的作用。 表达与胃癌发生、发展的关系 目前研究发现， 正常人多种组织中不表达或少量表达，而在恶性肿瘤组织中常呈过量表达，并以自分泌或旁分泌作用于肿瘤细胞，促进肿瘤细胞生长和抑制凋亡，与多种肿瘤的转移、预后及复发相关 73； 74报道胃癌、食管癌、肺癌及头颈部肿瘤等血清中 度显著升高，而且其升高水平与肿瘤转移及复发与否有关； 75研究表明 肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌及人的头颈部鳞状细胞癌中的阳 性表达率增高，且与血管新生显著相关； 76研究发现， 肾脏恶性肿瘤组织中呈高表达，并通过与 合后，促进血管内皮细胞的分裂增殖，从而达到肿瘤血管的- 19 - 新生作用。 表达与临床特点和病理类型也有一定的关系，如在高龄患者和肠型胃癌更常见 77； 78研究证实胃癌组织中 表达，是比较准确的预后不良指标之一； 79报道 胃癌组织中的阳性表达率为 76 ， 且其高表达与肿瘤复发 、 预后不良等相关 80； 81研究发现 胃癌中的阳性表达率为 42%，而且 达 阳性 的 胃癌 更易发生血行转移，是较为独立的预后指标。 82报道 大多数哺乳动物肿瘤中表达，具有对内皮细胞的选择性和调节血管生成等多个步骤的能力 ； 同时具有很强的促血管内皮细胞分裂增殖作用，在实体肿瘤生长过程中起着极为重要的作用。 本组资料中， 胃癌组织中的总阳性率为 显著高于癌旁正常组织中的 10%， 两组间比较 差异有统计学意义（ 2=P与 3等和 78在报道胃癌组织中 高表达方面类似。 人体多种正常组织中低表达，而在肿瘤组织中高表达，提示 促进 肿瘤 细胞增殖 与迁移，在肿瘤新生血管生成过程中起着至关重要的作用， 表达与肿瘤的发生发展密切相关，其组织中的表达水平可作为胃癌进展状况的指标 84，这就为我们下一步探寻 胃癌侵袭转移中的作用机制打下坚实的基础。 表达与胃癌浸润、转移的关系 目前研究较广泛的具有较强促血管生成的物质，同时还与淋巴管的形成有密切关系，这些在肿瘤的侵袭和转移过程中均起着至关重要的作用； 85研究显示，肿瘤细胞的增殖和侵袭性增强可能与肿瘤细胞内 表达上调有关。 86发现， 胃癌组织中呈高表达，并与其病理学分级、微血管密度、淋巴结转移和患者预后呈 显著相关性 ， 表达越高，肿瘤侵袭及转移能力也越强； 87研究发现，在结直肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌和非小细胞肺癌等肿瘤组织中， 高表达预示肿瘤转移风险增高和预后差；在中晚期非小细胞肺癌中 表达明显增高，且淋巴结转移阳性组表达 高于阴性组，这提示 非小细胞肺癌的进展和转移密切相关， 88；