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文档简介

一 、 目录 目录 j i i p l ll f f li i i f l li l l l i i ii iillf 17 8 7 3 5 5 中文摘要1 英文摘要一i l i 1i ;i 言1 1 1 畜禽粪便好氧堆肥概述:1 1 1 1 好氧堆肥的原理1 1 1 2 畜禽粪便好氧堆肥的影响因素2 1 2 畜禽粪便好氧堆肥氮素损失及其控制的研究进展4 1 2 1 畜禽粪便好氧堆肥过程中的氮素转化机理4 1 2 2 畜禽粪便好氧堆肥过程中氮素损失的研究进展。5 1 2 3 畜禽粪便好氧堆肥氮素损失控制的研究现状7 1 3 异养氨氧化作用的研究进展9 1 3 1 异养氨氧化微生物的种类一9 1 3 2 异养氨氧化作用机理的研究进展:9 1 3 3 异养氨氧化微生物应用的研究进展:1 0 1 4 氨氧化霉菌的研究进展赢1 1 1 4 1 氨氧化霉菌的发现1 1 1 4 2 氨氧化霉菌的氨氧化特性研究进展1 2 1 5 本研究的目的与意义1 2 1 5 1 研究目的1 2 1 5 2 研究意义1 2 1 6 本研究的特色与创新j 1 3 1 7 本研究的主要内容1 3 1 8 本研究的技术路线1 4 2 材料与方法1 5 2 1 氨氧化霉菌的筛选1 5 2 1 1 试验材料1 5 2 1 2 试验方法1 5 2 2 高效氨氧化霉菌氮转化特性的研究1 9 2 2 1 试验材料1 9 2 2 2 试验方法2 0 2 3 高效氨氧化霉菌同归堆肥试验2 0 2 3 1 试验材料2 0 2 3 2 试验方法2 1 3 结果与分析2 4 3 1 氨氧化霉菌的筛选2 4 3 1 1 受试卤株氮转化能力的测定2 4 l l i 东北农业火学理学硕l :学位论文 3 1 2 高效氨氧化霉菌的确定2 5 3 2 高效氨氧化霉菌氮转化特性的研究2 6 3 2 1 高效氨氧化霉菌不同生跃时期氨氧化能力及生长量的测定2 6 3 2 2 不同碳源对氨氧化霉菌氨氧化能力的影响2 8 3 2 3 不同氮源对高效氨氧化霉菌氨氧化能力的影响3 0 3 2 4 蔗糖浓度对高效氨氧化霉菌氨氧化能力的影响3 1 3 2 5 铵态氮浓度对高效氨氧化霉菌氨氧化能力的影响。3 4 3 2 6p h 对高效氨氧化霉菌氨氧化能力的影响3 4 3 2 7 培养温度对高效氨氧化霉菌氨氧化能力的影响3 5 3 3 高效氨氧化霉菌回归堆肥试验3 7 3 3 1 堆肥全程温度的变化3 7 3 3 2 堆肥全程含水量的变化3 8 3 3 3 堆肥全程p h 的变化:3 8 3 3 4 堆肥全程有机质含量的变化3 9 3 3 5 堆肥全程总氮量的变化4 0 3 3 6 堆肥全程c 肘的变化4 1 3 3 7 堆肥全程铵态氮含量的变化:4 2 3 3 8 堆肥全程硝态氮含量的变化。4 3 3 3 9 堆肥全程种子发芽指数( g i ) 的变化4 4 i 讨论:4 6 4 1 氨氧化霉菌的筛选4 6 4 2 高效氨氧化霉菌氮转化特性的研究4 6 4 3 高效氨氧化霉菌同归堆肥试验4 7 5 结论4 8 致谢z 1 9 参考文献5 0 攻读硕士学位期间发表的学术论文5 4 i i l i l i r i i c o n t e n t s c o n t e n t s c h i n e s ea b s t r a c t 1 e n g l i s ha b s t r a c t i i i 1i n t r o d u c t i o n 1 1 1i n t r o d u c t i o no f u v e s t o c km a n u r ea e r o b i cc o m p o s t i n g 1 1 1 1m e c h a n i s mo fa e r o b i cc o m p o s t i n g 1 1 1 2f a c t o r sa f f e c t i n ga e r o b i cc o m p o s t i n go fl i v e s t o c km a n u r e 2 1 2r e v i e wo f n i l r o g e nl o s sa n d i s tr e g u l a t i o nd u r i n ga e r o b i cc o m p o s t i n g 4 1 2 1m e c h a n i s mo fn i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o nd u r i n ga e r o b i cc o m p o s t i n go fl i v e s t o c km a n u r e 4 1 2 2r e v i e wo fn i t r o g e nl o s sd u r i n ga e r o b i cc o m p o s t i n go fl i v e s t o c km a n u r e 5 1 2 3r e v i e wo fr e g u l a t i o no fn i t r o g e nl o s sd u r i n ga e r o b i cc o m p o s t i n go fl i v e s t o c km a n u r e 7 1 3r e v i e w o f h e t e m t r o p h i ca m m o n i a - o x i d a t i o n 9 1 3 1k i n d so fh e t e r o t r o p h i ca m m o n i a - o x i d i z i n gm i c r o o r g a n i s m s 9 1 3 2r e v i e wo fm e c h a n i s mo fh e t e r o t r o p h i ca m m o n i u m6 x i d i z a t i o n 9 1 3 3r e v i e wo fa p p l i c , a t i o no fa m m o n i a o x i d i z i n gm i c r o o r g a n i s m s 1 0 1 4r e v i e wo fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 1 1 1 4 1d i s c o v e r yo fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 1 1 1 4 2r e v i e wo fc h a r a c t e r i s t i c so fa m m o n i u mo x i d a t i o nb ya m m o n i a o x i d i z i n gm o l d s 1 2 1 5p u i p o s ea n ds i g n i f i c a n c e 1 2 1 5 1p u r p o s e :1 2 1 5 2s i g n i f i c a n c e :。1 2 1 6d i s t i n g u i s h i n gf e a t u r e s 一:一1 3 1 7m a i nc o n t e n t s 1 3 1 8t e c h n i q u el i n e 1 4 2m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 1 5 2 1s c r e e n i n go fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 1 5 2 1 1m a t e r i a l s 1 5 2 1 2m e t h o d s 1 5 2 2s t u d yo nn i t r o g e nt r a n s f o r m a i t o no fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s ,1 9 2 2 1m a t e r i a l s 1 9 2 2 2m e t h o d s 2 0 2 3e f f e c t so f r e t u r n i n ga m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d si n t oc o m p o s t i n g 2 0 2 3 1m a t e r i a l s 2 0 2 3 2m e t h o d s 2 1 3r e s u l t sa n d a n a l y s i s 2 4 3 1s c r e e n i n g o f a m m o n i a - o x i d i z i n g m o l d s 2 4 3 1 1d e t e r m i n a t i o no fn i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o na c t i v i t yft e s t e ds t r a i n s 2 4 1 i i 东北农业人学理学硕 j 学位论文 i 3 1 2d e f i n i t i o no fh i g h e f f e c t i v ea m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 2 5 3 2n i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o nc h a r a c t e r i s t i c so f h i g h - e f f e c t i v ea n m l o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 2 6 3 2 1a m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t ya n dg r o w t hw i e g t hd u r i n gd i f f e r e n tp e r i o d s 2 6 3 2 2e f f e c to fv a r i o u sc a r b o ns o u r c e so na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 2 8 3 2 3e f f e c to fv a r i o u sn i t r o g e ns o u r c e so na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 3 0 3 2 4e f f e c to fs u c r o s e c o n t e n to na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 3 1 3 2 5e f f e c to fa m m o n i u mn i t r o g e nc o n t e n to na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 3 4 3 2 6e f f e c to fp no na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 3 4 3 2 7e f f e c to fc u l t u r et e m p e r a t u r eo na m m o n i a - o x i d i z i n ga c t i v i t y 3 5 3 3e f f e c t so fr e t u r n i n ga m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d si n t oc o m p o s t i n g 3 7 3 3 1 c h a n g eo ft e m p e r a t u r ed u r i n gc o m p o s t i n g 3 7 3 3 2c h a n g eo fw a t e rc o n t e n td u d n gc o m p o s t i n g 3 8 3 3 3c h a n g eo fp nd u r i n gc o m p o s t i n g 3 8 3 3 4c h a n g eo fo r g a n i cc o m p o u n dc o n t e n td u r i n gc o m p o s t i n g 3 9 3 3 5c h a n g eo ft o t a ln i t r o g e nc o n t e n td u r i n gc o m p o s t i n g 4 0 3 3 6c h a n g eo fc nd u r i n gc o m p o s t i n g 4 1 3 3 7c h a n g eo fa m m o n i u mn i t r o g e nc o n t e n td u r i n gc o m p o s t i n g 4 2 3 3 8c h a n g eo fn i t r a t en i t r o g e nc o n t e n td u r i n gc o m p o s t i n g 4 3 3 3 9c h a n g eo fg id u r i n gc o m p o s t i n g 4 4 4d i s c u s s i o n - 4 6 4 1s c r e e n i n go fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 4 6 4 2n i t r o g e nl r a n s f o r m a t i o nc h a r a c t e r i s t i c so f h i g h - e f f e c t i v ea m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s 4 6 4 3e f f e c t so f r e t u r n i n ga m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d si n t oc o m p o s t i n g 4 7 5c o n c l u s i o n 4 8 a c k n o w l e d g e m e n t ;z 1 9 r e f e r e n c e 5 0 a c a d a m i cp a p e rp u b l i s h e dd u r i n gt h em a s t e rd e g r e e 5 4 i v i k 一 顾 j :学位论文独创声兀j 和使用授权书 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得 ( 洼;塑遗查基丝委要挂别直塑的! 查拦亘窒2 或其他教育机构的学位或证 书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名:喻婪帐日期:叫。年f 月7 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。 本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解 密后适用本授权书) 学位论文作者签名:料朱嗍厶伊咱7 日 导师 签名:彳秒 日期:叫。年月夕日 1 一 _ i l , 摘要 摘要 异养氨氧化作用是异养型的细菌或霉菌等将铵态氮或其他负三价氮氧化为羟胺、亚硝态 氮或硝态氮的过程。作为氮素循环的重要环:肯,异养氨氧化作用对高有机物、高氮环境中的 氮素转化具有重要意义。鸡粪等固体废弃物的好氧堆肥是高有机物、高氮的好氧体系,因其 中的氨挥发致使氮素严重损失,影响堆肥肥效。在该体系中强化异养氨氧化,即将铵态氮转 化为亚硝态氮和硝态氮,具有遏制其中氮素挥发、保持肥效的意义。 本研究以鸡粪好氧堆肥中分离的1 0 株霉菌为对象,测定受试菌株的氮转化能力,筛选高 效氨氧化菌株;测定高效氨氧化菌株不同生长时期的氮转化能力,明确菌体生长与氮转化作 用的关系;改变培养条件,明确各环境冈素对高效氨氧化菌株氮转化作用的影响;将高效菌 株回归至鸡粪好氧堆肥,验证其实际效果。该研究旨在明确鸡粪好氧堆肥体系中氨氧化霉菌 的存在情况、作用特性及实际效果,为降低该体系的氮素损失提供依据。 主要研究结果: ( 1 ) 受试的1 0 株霉菌均能将铵态氮氧化为硝态氮和硝态氮,即均为氨氧化霉菌,提 示该类霉菌在鸡粪好氧堆肥中普遍存在。确定的两株高效氨氧化霉菌菌株m 2 5 2 2 ( p e n i c i l l i u m s p ) 与m 4 0 - 4 ( a s p e r g i l l u ss p ) 在氨氧化霉菌培养基中培养5 d 后,均能使铵态氮降低0 3 m g m l 1 以上,生成弧硝态氮和硝态氮总量分别约在1 1 x l o 3 m g m l 1 、1 5 x 1 0 3 m g m l 1 。 ( 2 ) m 2 5 2 2 菌体生长量及铵态氮利用率在1 5d 迅速增加;硝态氮浓度3 5 d 上升迅 速,以后维持在1 1 1 劲g m l l ;亚硝态氮在2 d 后开始有微量生成,4 d 后是降低趋势。m 4 0 - 4 菌体生长量及铵态氮利, l 率在1 3 d 迅速增加;硝态氮3 5 d 迅速增加;亚硝态氮在2 d 厉开 始增加,4 d 后趋于稳定。提示两株菌的氨氧化作用均属于次级代谢。 ( 3 ) m 2 5 - 2 2 与m 4 0 4 均能在以葡萄糖、蔗糖、淀粉或纤维素为唯一碳源的培养基中进 行氨氧化作朋,能氧化硫酸铵、蛋白胨、乙酰胺、尿素或l - 天冬氨酸中的负三价氮,其中可 溶性淀粉、纤维素、蛋白胨等缓效碳、氮源对该作用更有利。在以蔗糖为唯一碳源、铵盐为 唯一氮源的培养基中,m 2 5 2 2 氨氧化的最适条件为:蔗糖浓度1 2 9 l - 1 、铵态氮浓度2 4 3 8 m g m l 1 、p h7 5 和培养温度3 0 c ;m 4 0 4 氨氧化的最适条件为:蔗糖浓度1 0 9 l - 1 、铵态氮 浓度2 0 1 4m g m l l 、p h7 0 和培养温度4 5 。 ( 4 ) m 2 5 - 2 2 与m 4 0 4 分别回归堆肥后,均能明显降低堆肥氮素损失,促进堆肥腐熟, 在鸡粪等吲体废弃物的好氧堆肥中具有应州价值。 关键词如氧堆肥;氨氧化;霉菌:筛选;氮素损失;氮转化 一 l 卅 1lli - i o a b s t r a c t s c r e e n i n ga n db i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c so f a m m o n i a o x i d i z i n gm o l d si na e r o b i cc h i c k e n m a n u r ec o m p o s t i n g a b s t r a c t h e t e r o t r o p h i ca m m o n i u m o x i d a t i o ni sap r o c e s st h a ta m m o n i u mn i t r o g e no rn e g a t i v et r i v a l e n t o r g a n i cn i t r o g e n a r eo x i d i z e di n t o h y d r o x y l a m i n e ,n i t r i t en i t r o g e n o rn i t r a t e n i t r o g e nb y h e t e r o t r o p h i cb a c t e r i ao rm o l d s a sa l li m p o r t a n tp a r t o fg l o b a ln i t r o g e nc y c l e ,h e t e r o t r o p h i c a m m o n i u mo x i d a t i o np l a y sas i g n i f i c a n tr o l ei nn i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o ni ns y s t e m sc o n t a i n i n gh i g h c o n t e n t so fo r g a n i cc o m p o u n d sa n dn i t r o g e n a e r o b i cc o m p o s t i n go fs o l i dw a s t e ,s u c ha sa e r o b i c c h i c k e nm a n u r ec o m p o s t i n gi ss u c has y s t e mi nw h i c ha m m o n i u mv o l a t i l i z a t i o nr e s u l t e di ns e r i o u s n i t r o g e nl o s s t h ee n h a n c e m e n to fh e t e r o t r o p h i ca m m o n i u mo x i d a t i o n i so fs i g n i f i c a n c ei n p r e v e n t i n gn i t r o g e nl o s s i nt h es t u d y , n i t r o g e nf f a n s f o r m a t i o na c t i v i t i e so f1 0s t r a i n so fm o l d si s o l a t e df r o ma e r o b i c c h i c k e nm a n u r ec o m p o s t i n gw e r ed e t e r m i n e dt os c r e e na m m o n i a o x i d i z i n gm o l d sa n dd e f i n e h i g h e f f e c t i v es t r a i n s c u l t u r ec o n d i t i o n sw e r ec h a n g e dt oe v a l u a t ee f f e c t so fe n v i r o n m e n t a lf a c t o r s o nt h en i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o na c t i v i t yo fh i g h e f f e c t i v es t r a i n s f i n a l l y , t h eh i g h e f f e c t i v es t r a i n s w e r ea d d e di n t oa e r o b i cc h i c k e nm a n u r ec o m p o s t i n gt ov e r i f ya p p l i c a t i o ne f f e c t s t h eo b j e c t i v eo f t h es t u d yi st om a k ec l e a rt h ee x i s t e n c e ,c h a r a c t e r i s t i c so fn i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o na n da p p l i c a t i o n e f f e c t so fa m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d si na e r o b i cc h i c k e nm a n u r ec o m p o s t i n g ,a n dt op r o v i d e e v i d e n c ef o rt h ei n h i b i t i o no fa m m o n i u mv o l a t i l i z a t i o ni nt h ep r o c e s so fa e r o b i cc o m p o s t i n g t h em a i nr e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ( 1 ) a l lo ft h e1 0s t r a i n sc o u l do x i d i z ea m m o n i u mn i t r o g e ni n t on i t r i t ea n dn i t r a t en i t r o g e n , s h o w i n gt h a tt h e ya r ea m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s ,a n di n d i c a t i n gt h a ta m m o n i a - o x i d i z i n gm o l d s a r e w i d e l yd i s t r i b u t e di na e r o b i cc h i c k e nm a n u r ec o m p o s t i n g b o t ho ft h et w od e f i n e dh i g h e f f e c t i v e s t r a i n s ,n a m e dm 2 5 2 2a n dm 4 0 - 4 ,c o u l dd e c r e a s ea m m o n i u mn i t r o g e nb ya b o v e0 3 m g m l l ,a n d p r o d u c en i t r i t ea n dn i t r a t en i t r o g e nw i t hat o t a lc o n c e n t r a t i o no f1 1 x 1 0 一m g 。m l 1 ,1 5 x 1 0 一m g m l 1 , r e s p e c t i v e l y ( 2 ) i nm e d i ac o n t a i n i n g ( n h o _ , s 0 4a tac o n c e n t r a t i o no f5 m g m l l ,m y c e l i u mw e i g h to f m 2 5 2 2a n di t su t i l i z a t i o nr a t i oo fa m m o n i u mn i t r o g e ni n c r e a s e dm a r k e d l yd u r i n gt h ef i r s t5d a y s ; n i t r a t ec o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e dm a r k e d l yf r o mt h e3 r dt o5 t hd a y , a n dr e m a i n e dc o n s t a n tt h e r e a f t e r ; n i t r i t ec o n c e n t r a t i o nr e m a i n e da tal o wl e v e l m y c e l i u mw e i g h to fm 4 0 - - 4a n di t su t i l i z a t i o nr a t i oo f a m m o n i u mn i t r o g e ni n c r e a s e dm a r k e d l yd u r i n gt h ef i r s t3d a y s ;n i t r a t ec o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e d m a r k e d l yf r o mt h e3 r dt o5 t hd a y ;n i t r i t ew a sp r o d u c e da f t e r2d a y s ,a n dr e m a i n e dc o n s t a n ta f t e r4 i i i k f l i b o t ho ft h es t r a i nm 2 5 2 2a n dm 4 0 4s h o w e dt h ea c t i v i t y t oo x i d i z ea m m o n l u mn l t t o g e n 唧w i n g i nm e d i ac o n t a i n i n gg l u c o s e ,s u c r o s e ,s t a r c ho rc e l l u l o s e a st h es o l ec a r b o ns o u r c e ,a n d t 0 o x i d i z et h en e g a t i v e t r i v a l e n tn i t r o g e n o fa m m o n i u ms u l f a t e ,p e p t o n e , a c e t a 删e , u r e ao r l a s p a r t a t e s l o w i ya v a i l a b l ec a r b o no rn i t r o g e ns o u r c e s ,s u c h a ss t a r c h ,c e l l u l o s ea n dp e p t o n e , w e r eb e n e f i c i a lt 0a m m o n i u m o x i d a t i o nb yt h e m i nm e d i ac o n t a i n i n gs u c r 0 5 ea st h es o l ec a b o n s o u r c ea n da n l l t l o n i u ms u l f a t e a st h es o l en i t r o g e ns o u r c e , n i t r a t ef o r m a t i o nw a st h e m o s t d f o n o u n c e dw i t hs u c r o s ep r e s e n ta tac o n c e n t r a t i o no f1 2 9 l 1a n da m m o n i u m n i t r o g e np r e s e n a a :o n c e n 仃a “o no f2 4 3 8 m g m l 1 ,a tt h ei n i t i a lp h l e v e lo f7 5a n da t3 0 。cb yt h es t r a i nm 2 5 2 2 ,a n d w i t hs u c m s ep r e s e n t a tac o n c e n t r a t i o n o f l o g l 1 a n da m m o n i u mn i t r o g e np r e s e n t a ta c o n c e n t r a t i o no f2 0 1 4 m gm l ,a tt h ei n i t i a lp h l e v e lo f7 0a n da t4 5c a f i e ra d d e di n t oa e r o b i cc h i c k e n m a n u r ec o m p o s t i n g ,b o t ho ft h et w oh i g h 吒位c t l v es t n m 5 c o u l dd e c f e a s en i t r o g e nl o s sa n dp r o m o t et h em a t u r i t yo fc o m p o s t ,i n d i c a r i n g t h a tt h e yh a v e s i g n i f i c a n ta p p l i c a t i o nv a l u ei na e r o b i cc o m p o s t i n go f s o l i dw a s t e ss u c ha sc h l c k e nm a n u r e k e yw 。r d sa e r o b i cc o m p o s t i n g ;a n l l l l o n i u mo x i d a t i o n ;m 。l d s c r e e n i n g ;n i t r 。g e n l o s s ; n i t r o g e nt r a n s f o r m a t i o n i v c a n d i d a t e :y uq i l i n s p e c i a l t y :m i c r o b i o l o g y s u p e r v i s o r :p r o f w a n gl i q u n , 引言 1 引言 1 1 畜禽粪便好氧堆肥概述 随着世界人口的不断增长,人类对食物的需求量不断加大。畜禽养殖作为供应人类食物 的重要方式,其规模呈逐年增长态势,规模化、集约化发展成为必然趋势。我国作为人1 2 1 大 国,畜禽养殖业的规模发展更为迅速。据中国畜牧业信息网( 2 0 0 9 ) 统计,2 0 0 8 年我国畜禽 产品产量继续呈升高趋势,其中肉类总产量7 2 6 9 万吨,比2 0 0 7 年增长5 9 ;禽蛋2 6 3 8 万 吨,增长4 3 ;牛奶3 6 5 1 万吨,增长3 6 。由于养殖规模的迅速发展,畜禽粪便的产量也 随之迅速增加。它们在未经妥善处理前,含有大量的病原菌、寄生虫卵、有毒有害物质、不 稳定有机物等,若直接排放到环境中,势必造成严重的环境污染,影响人类生活质量及畜禽 健康。另外,从资源利用的角度看,畜禽粪便富含农作物必需的有机质、氮、磷、钾等营养 成分,且在腐熟过程中形成的腐殖质等活性物质能改善土壤理化性

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