金黄色葡萄球菌检验课件

金黄色葡萄球菌 检测 生物学特性 -菌体形态及培养特征 n革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检 时呈单个、成对、四联或不规则的簇群； n无芽孢，不运动； n兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； n可在15%氯化钠和40%胆汁中生长 生物学特性 -菌体形态及培养特征 n大多数菌株能生长在6.5-46之间（最 适温度30-37）能在pH4.2-9.3之间生 长（最适pH为7.0-7.5）； n大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞 团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产 生取决于生长的条件，而且在单个菌 株中可能也有变化 生物学特性 -菌体形态及培养特征 n好氧生长的细胞产生接触酶； n产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白 ，例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊 和多肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷 脂蛋白质，并释放脂肪酸； n所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 致病性 n金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分、四种，能损伤血小板 ，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使 血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞 噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶 有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核 酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎 的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。 致病性 金黄色葡萄球菌 是人类化脓感染中最常 见的病原菌，临床表 现多种多样，可引起 局部化脓感染，也可 引起肺炎、伪膜性肠 炎、心包炎等，甚至 败血症、脓毒症等全 身感染。 致病性 n葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所 引起的疾病，可引发不同程度的急性胃肠 炎症状，恶心、呕吐最为突出而且普遍， 腹痛、腹泻次之。 n当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等， 在温度条件适宜时，经8-10小时即可相当数 量的肠毒素。 分布 n在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。 n作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和 动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的 皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受 其污染的机会很多。 n传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如 剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉 、蛋类等。被污染的食物在室温20-22放置5小 时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。 葡萄球菌皮肤感染 流行病学 n季节分布，多见于春夏季； n中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其 制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉 粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道 感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性 感染部位常成为污染源。 流行病学 金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引 起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33% ，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的 此类中毒事件也非常多。 流行病学 肠毒素形成条件： 存放温度，在37C内，温度越高，产毒时 间越短； 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒 素； 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时 含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 耐受力 n几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金 黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用 n肠毒素可耐受100 30分钟不被破坏。 n对于加工过的食品或食品加工设备而言， 此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件 差的一种指标。 污染的控制 n防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对 生产加工人员进行健康检查，患局部化脓 性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸 道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾 病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗 位。 污染的控制 n防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染 ：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能 挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后， 要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细 菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注 意低温保存。 污染的控制 n防止金黄色葡萄球菌污染食品 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、 畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适 当方式处理后进行加工生产。 污染的控制 n防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物， 以防肠毒素形成； 在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴 凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻 底加热。 检测步骤 -增菌 n利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受 15%的氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨 大豆肉汤增菌。 检测步骤 -分离 n血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素 ，因此在血平板上产生明显的溶血环。 n血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为 白色，大而突起，圆形，不透明，表面光 滑，有溶血圈。 检测步骤 -分离 nBP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮 源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分 解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的 其它菌株有抑制作用。 检测步骤 -分离 n在BP平板上其典型菌落为：圆形，光滑突 起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉 色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带 灰色或黄色的白色），周围为一混浊带， 在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌 落似有黄油树胶的粘稠感。 n偶然会遇到不分解脂肪菌株，除无混浊带 及透明圈外，其他外观基本相同。 n长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌 落，其黑色常较典型菌落淡些，且外观可 能粗燥，质地较干燥。 B-P平板 检测步骤 -鉴定 n金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对 其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。 n对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其 他实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖 发酵、溶葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核 酸酶实验等。 n所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的 依据。 25g样品+ 225ml 生理盐水 5mL样品匀液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉汤 血平板 36 1 24hr 镜 检 营养肉汤 血浆凝固酶 实验 报告结果 定性定性 检测检测 36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 6hr BP平板 25g样品+ 225ml 生理盐水 选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤 将有生长的管划线接种 36 1 48hr 镜 检 营养肉汤 血浆凝固酶 实验 报告结果 MPN/g(mL) 定量定量 检测检测 （MPNMPN法）法） 36 1 48hr 36 1 24hr 36 1 6hr 适用于检测可能含适用于检测可能含 有有少量少量金黄色葡萄金黄色葡萄 球菌，却带有球菌，却带有大量大量 竞争菌竞争菌的样品的样品 梯度稀释 25g样品+ 225ml 生理盐水 选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种之至表面 干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL） 平板计数（分别记录每种 类型的菌落数） 36 1 48hr 镜 检 营养肉汤 血浆凝固酶