常用生化试剂作用

常用生化试剂作用： 1、蛋白酶 K：能水解消化蛋白质，特别是与 DNA 结合的组蛋白， 在尿素和 SDS 中稳定。一般工作浓度是 50100g/ml，推荐反应 缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。 2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶 解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白 质结合而沉淀。 3、IPTG ：异丙基-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及 IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG 和乳糖的结构相似，所以它和乳 糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白的空间构 像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从 而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的 酶类。与乳糖不同的是，IPTG 不被 -半乳糖苷酶水解。常与 X- GAL 一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十 分稳定。 4、X-gal ：5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷，是 IPTG 的显色试剂， 在 IPTG 的催化下显蓝色。常跟 IPTG 一起用与蓝白斑筛选。 5、G418：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染 最常用的选择试剂。当 neo 基因被整合进真核细胞基因组合适的地 方后，则能启动 neo 基因编码的序列转录为 mRNA，从而获得抗性 产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有 418 的选择性培养基中生长。418 的这一选择特性 ，已在基因 转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。 6、DMSO：二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂，同时用作 测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。 7、曲拉通 X-100：TritonX-100，用的细胞裂解液成分之一，在保 护蛋白活性方面有一定作用， 能力介于 NP40 和 SDS 之间，偏向 于 NP40。 8、NP-40 ：很温和的去垢剂，1% 浓度的基本可以破坏掉胞膜，而 对核膜破坏的作用弱，结合特定的 buffer 可以获得胞浆蛋白。 9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起维持渗透压作用、PH 缓冲作用、 载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起 到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗 体稀释液。 10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝胶电泳中 RNA 的稳定剂，也用于稳 定毛细管电泳中的变性单股 DNA。 11、 TEMED：四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性 pH 条件下， 加入 TEMED 可加速凝胶聚合。 12、巯基乙醇：一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保 持溶解状态，有利于与 SDS 的结合。使蛋白解离成单个亚基。 13、甲叉双丙烯酰胺：N，N- 甲叉双丙烯酰胺，别名 MBA，又叫亚 甲基双丙烯酰胺，次甲基双丙烯酰胺，N，N-甲撑双丙烯酰胺。作 交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。 14、过硫酸铵：过硫酸铵（APS）的作用主要是提供自由基，然后 在促凝剂 TEMED 的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。 15、 B27：一种添加剂，用于神经肝细胞培养，被认为具有抑制胶 质细胞生长的作用。 16、 DTT：二硫苏糖醇，常用还原剂，既有抗氧化作用。它能保护 酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。又是一 种蛋白质变性剂，破坏二硫键，浓度不同，起到的作用也不同。 17、弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏完全佐剂是一种油包水 的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中 免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初 次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完 全佐剂用于加强弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有 效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞 壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫 原的持续释放，并刺激局部免疫反应。 18、吐温 20：Tween-20 ，常用的非离子去垢剂。 19、吐温 80：weenum 80 ，除作乳化剂外，也用作某些水中难溶 药物的增溶剂。 20.、十二烷基肌氨酸钠 ：脱细胞试剂，制备脱细胞组织工程支架 材料。 21.PVPP： PVPP 对片剂具有崩解作用，能和各种不溶于水的药物 共容，能稳定化各种悬浮剂，又具有形成络合物的能力以及吸附作 用等，因而可用作医药助剂。也用于除去啤酒中的多酚。 22、 PIPES：哌嗪-N，N- 二（2-乙磺酸） ,实验室做缓冲剂用。全 名是哌嗪-N,N-二（2-乙磺酸） ，pKa 是 6.80。不参与也不干扰生物 化学反应，价格比较贵。常用在免疫和细胞类的实验中，PIPES 有 时还被用来制备大肠杆菌感受态。 23、 CTAB：十六烷基三乙基溴化铵，一种去污剂，可溶解细胞膜， 它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶 的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中 沉淀，通过离心就可将 CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分 开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀 DNA，而 CTAB 溶于乙醇或异丙醇 而除去。CTAB 法是现在实验室最常用的一种提取核酸的手段。 24、 HEPES：羟乙基哌秦乙硫磺酸，一种弱酸缓冲剂，主要作用是 防止培养基 pH 迅速变化。在开放式培养条件下，培养基脱离了 5%CO2 的环境， CO2 气体迅速逸出，pH 迅速升高，若加了 HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添 加 HEPES。 25、 MOPS：一种缓冲液，有抑制 RNA 酶的作用，一般和甲醛 （用于变形 RNA）用于 RNA 变性电泳。 26、 盐酸胍：盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂，这增加 了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度，减少了疏水相互作用。 27、 PMSF：Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺 酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤， 吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了 PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被 PMSF 污染的衣物应予丢弃。 PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解 缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加 快，且 25的失活速率高于 4。pH 值为 8.0 时，20mmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 85min，这表明将 PMSF 溶液调节为 碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 28、溴酚蓝：pH 指示剂，pH=3.0 时呈黄色，pH=4.6 时呈蓝紫色。 酸碱指示剂；非水滴定用指示剂，蛋白电泳染色；病毒化验等。 29、 台盼兰：台盼蓝（Trypan Blue）或称台盼兰，是细胞活性染料， 常用于检测细胞膜的完整性。 30、 二甲苯青 FF：用于琼脂糖聚丙烯酰胺凝胶电泳的示踪染料， 易溶于水和醇，可与溴芬蓝按照一定比例配置 loading buffer。 31、 吖啶橙：是一种荧光色素，与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在 差别，可发出不同颜色的荧光，与 DNA 结合量少发绿色荧光，与 RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透 过细胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。在荧光显微镜下观察，吖啶橙 可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡 细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。 吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏 死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙 AO 常与溴化乙啶 EB 合用双 染，因 EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细 胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂，能镶嵌 于两个相邻的碱基对之间，这样在 DNA 复制过程中，会使 DNA 链 增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要 戴手套，需避光。 32、 EDTA 和 EGTA： EDTA-乙二胺四乙酸 EDTA 是螯合剂的代表 性物质。能和碱金属、稀土元素和过渡金属等形成稳定的水溶性络 合物。此外 EDTA 也可用来使有害放射性金属从人体中迅速排泄起 到解毒作用。也是水的处理剂。EGTA- 乙二醇双（ 2-氨基乙基）四 乙酸在 Mg2+存在下测定 Ca2+时，可用 EGTA 直接滴定, 滴定误差 小于 0.3% ，比用 EDTA 滴定提高了选择性。此外它与金属离子形 成的配合物的稳定性普遍比相应的 EDTA 配合物差。 33、 TRICINE：N-三（羟甲基）甲基 甘氨酸， 常见的电泳系统是 Tris甘氨酸系统；TrisTricine 电泳则用于分子量小于 10kDa 的 多肽和蛋白的电泳，能够获得较好的分离效果。可以用前者代替。 34、 PVP40：PVP40 中的 CO - N = 有很强的结合酚类化合物的能 力，与其形成稳定的复合物，常用于提取 RNA 时除去酚类。 35、 脱氧胆酸钠：离子型去垢剂，作用有：1、裂解细胞；2、溶解 蛋白，尤其是可以溶解一些难溶于水的蛋白，如膜蛋白等；3、很适 合做 WB，但在 Co-IP 中使用，需要谨慎。 36、 6-BA：细胞培养中用到，细胞分裂素。 37、 碘代乙酰胺：也叫作碘乙酰胺，2-碘乙酰胺。用于有机合成， 在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及 酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。 38、 萘乙酸：N