血凝(ha)―血凝抑制(hi)试验操作要点

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 血凝(HA)血凝抑制(HI)试验操作要 点 摘要：兽医实验室检测禽流感和 鸡新城疫抗体采用血凝（HA）-血凝抑 制（HI）试验。该试验有些因素会影响 试验结果，是试验的关键环节，如配制 1%鸡红细胞时其浓度的高低会影响抗 体滴度的高低；4 单位抗原的配制需要 回滴正确；试验的反应时间和温度也要 符合要求。只有掌握好试验的关键点， 才能得出准确无误的试验结果。对该试 验的操作要点及注意事项进行了介绍。 中国论文网 /8/view-12900148.htm 关键词：禽流感抗体检测；鸡新 城疫抗体抗体检测；血凝（HA）-血凝 抑制（HI）试验；操作要点 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 中图分类号：S851.3 文献标识 码：B 文章编号：1007-273X（2016） 12-0022-01 实验室检测禽流感及鸡新城疫抗 体滴度采用血凝（HA）血凝抑制 （HI ）试验，是利用了禽流感病毒、鸡 新城疫病毒的血凝素能凝集鸡红细胞的 特性。现将 HA-HI 试验操作步骤及注 意事项介绍如下，供参考。 1 试剂配制 1.1 阿氏液配制 称量葡萄糖 2.05 g、柠檬酸钠 0.80 g，柠檬酸 0.055 g、氯化钠 0.42 g，加蒸馏水至 100 mL，加热溶解后调 pH 至 6.1，高压灭菌，4 保存备用。 1.2 1%鸡红细胞液的制备 因为每只鸡的血红细胞的结合性 不一样，所以要取 34 只公鸡血，要 求是 SPF 鸡，每 3 个月换一次鸡。采血 与等量阿氏液混合均匀，放入离心管中。 鸡红细胞的洗涤：将离心管中的血液经 2 500 r/min 离心 5 min，用吸管移去上 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜， 再重复 2 次以上过程后，用生理盐水配 成 1%红细胞悬液，4 保存备用，不 超过 5 d。离心的时间、转速不一样， t 血球压积不一样。红血球浓度低， 检测出的抗体效价就低，反应时间变长。 红血球浓度高，检测出的抗体效价就高， 会偏离正常值。转速不能超过 3 000 r/min，不然红细胞易破碎。洗红血球时 需要用和稀释液一样的液体。 2 操作步骤 2.1 抗原血凝效价测定（HA 试 验，微量法） 在一次性微量反应板的 112 孔 均加入 25 L 的生理盐水，吸取 25 L 抗原加入第一孔，混匀。从第一孔倍比 稀释至第 11 孔，从第 11 孔弃 25 L， 每孔再加入 25 L 生理盐水，每孔均加 入 25 L 1%鸡红细胞悬液，振荡混匀， 室温，25 min 观察结果，使红细胞完全 凝集的抗原最高稀释度为 1 个血凝单位。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 2.2 血凝抑制（HI）试验（微量 法） 4 单位抗原配制：终点稀释倍数 除以 4 即为含 4 HAU 的抗原的稀释倍 数。4 单位抗原在使用前最好做回滴试 验，以确保配制的抗原正好为 4 单位抗 原。具体操作方法如下：在微量反应板 的 16 孔均加入 25 L 生理盐水，吸 取 25 L 配好的 4 单位抗原，分别加入 第 1 孔和第 2 孔，混匀，从第 2 孔倍比 稀释至第 5 孔，从第 5 孔弃 25 L，26 孔再加入 25 L 生理盐水， 16 孔均加入 25 L1%鸡红细胞悬液， 室温静置 30 min，判断结果。将板倾斜， 13 孔红细胞全部凝集，第 4 孔显泪滴 状流淌，则配液正确。调整抗原浓度， 直到回滴正确。配好的抗原使用时间不 超过 4 h。4 单位抗原配制是否正确，对 试验结果影响很大。抗原-20 保存， 用时恢复至室温。抗原应分装，避免反 复冻融，否则会降低效价。 在微量反应板的第 111 孔加入 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 25 L 生理盐水，第 12 孔加入 50 L 生 理盐水。吸取 25 L 待检血清加入第 1 孔，依次倍比稀释至第 10 孔，从第 10 孔吸取 25 L 弃去。第 111 孔均加入 4HAU 混匀的抗原液 25 L，室温静置 30 min，每孔加入 25 L 1%的鸡红细胞 悬液，混匀，室温静置 30 min。结果判 定：以完全抑制 4 个 HAU 抗原的血清 最高稀释倍数作为 HI 滴度。只有阴性 对照孔血清滴度不大于 2log2，阳性对 照孔血清误差不超过 1 个滴度，试验结 果才有效。HI 效价3log2 判定 HI 试验 阴性，HI 效价=4log2 为可疑， HI 效价 5log2 为阳性。 注意，稀释液的 pH 应在 7.07.2，pH 低时，看不见效价，pH 大于 7.8 时，容易溶脱。反应时，室温 高于 37 时，血细胞易脱落，4 以下 会自凝。温度 2425 反应效果最好。 稀释溶液时，用 10100 L 量程多道 移液器，每孔反复吹吸 6