2013体检培训——血红蛋白

1、北京市中小学生健康体检规范化培训,血红蛋白检测方法,北京市学校卫生防病工作领导小组办公室 2013.3,一、项目简介,（一）血红蛋白评价贫血的标准 （二）血红蛋白的检测原理,（一） 血红蛋白评价贫血的标准 表1 WHO2001年诊断贫血的血红蛋白水平,（二）血红蛋白的检测原理,方法：氰化高铁血红蛋白法 原理： 血红蛋白 铁氰化钾 高铁血红蛋白 氰化钾 氰化高铁血红蛋白 氰化高铁血红蛋白：显红色，极为稳定。,二、检测流程,（一）试剂 （二）采血 （三）检测,（一）试剂,采用文齐氏液。 文齐氏液(Hb试剂)为浓缩50倍的贮备液，用时加蒸馏水稀释50倍。 如：配制1000ml工作液时，取文齐氏浓缩液

2、20ml。,文齐氏液,（1）配制方法： 取棕色容量瓶，先加蒸馏水800ml，后用吸量管吸取文齐氏液20ml，最后加蒸馏水直至1000ml刻度线，混匀即可。 配置好的文齐氏液,应为清晰透明的淡黄色溶液。,棕色容量瓶（1000ml）,（2）注意事项： 为保证配制试剂浓度准确，必须采用标准量器操作。 取文齐氏液应用吸量管（5ml或10ml）；加蒸馏水稀释应用容量瓶（1000ml棕色）。 容量瓶、吸量管须每3年计量一次；有计量所出具的计量报告。,配液量器,（3）试剂保存 文齐氏浓缩液应储存于4冰箱，有效期2年。 稀释后的试剂应储存于棕色玻璃瓶中，一般室温可存放一个月。 若暴露于光线，则试剂不稳定；受冰

3、冻可破坏分解。如试剂出现浑浊则不能用。,棕色磨口瓶(2000ml),（二）采血,1.加样：用瓶式分液器加样，每批加样前，使用5ml容量瓶校正。,瓶式分液器的校正,方法： （1）分液器刻度调整到2.5ml；连续按动分液器以排出管路中的空气。 （2）按动分液器二次（即为5ml），将液体加入5ml容量瓶中，观察凹液面与容量瓶刻度是否水平。 （3）呈水平则分液器准确可用；反之须调整分液器，再次校正，直至凹液面与刻度线呈水平。,2. 器具：,（1）消毒棉签； （2）75酒精； （3）一次性采血针； （4）微量血红蛋白吸管（10l或20l）； （5）一次性塑料试管（5ml）； （6） 试管塞； （7） 利

4、器盒,18,19,3. 步骤,（1）用瓶式分液器将2.5ml文齐氏液加入试管内； （2）用酒精棉签消毒左手无名指； （3）待酒精挥发后， 用采血针向左手无名指指尖迅速垂直刺入，深约23mm，让血液自然流出； （4）去掉第一滴血； （5）用血红蛋白吸管吸血至10 l刻度，擦净管壁外余血； （6）置于盛有2.5ml文齐氏液的试管中，冲洗干净并混匀。 （7）用无菌棉签按压止血。 （8）血样避免太阳光直射，放置至少15分钟后比色。,23,24,25,27,补充混匀照片,4.质量控制要点：,（1）体检前： 使用定值溶血液（盲样），对采血人员进行岗前培训与技术考核。 此考核亦为中心实验室对各点实验室检测能

5、力的技术考核。,表2 血红蛋白检测质控考核记录表,区县： _ 单位：_ 检测日期：_ 质控品编号：_ 质控品真值：_ 采血者：_ 检测仪器：_ 检测者：_ 是否经过计量部门检定：（是 否） 检测仪器最近检定日期：_,表3 采血人员考核记录表 定值血Hb值 100 采血人 赵敏敏 考核人 孙颖,对考核结果是否合格的判定 （1）X的均数 X103+ 103+ 104+ 104+ 108+101+ 104+ 104+ 112+108 10 105.1 （2） DI1.02 （3）判断标准： DI 0.5 优秀 0.5 DI 1.0 良好 1.0 DI 2.0 及格 2.0 DI 3.0 不及格，应注

6、意 判断：采血人员赵敏敏 及格,4.质量控制要点：,（2）体检过程中： 采血员操作步骤质控：a.左手无名指 b.酒精完全挥发 c.擦去第一滴血 d.局部勿用力挤压 e.采血准确到刻度 f.采血管内无气泡 g.擦净管壁外余血 h.管内血液无残留 i.试管编号与被采血者编号统一 j.分液器用5ml容量瓶校准 k.样品避光保存,表4 质量控制人员应对采血员的现场采血过程进行监督 日期 2005.3.22 学校 大兴榆垡中学 质控员 符筠,平行样质控法： 平行样数占总样本数的5。 具体方法：同一采血员对同一对象采2个血样，由实验室检测后，如两个血红蛋白值在T0.05T范围内，则采血员合格；反之，则为不

7、合格。 若不合格，要求质量控制人员对采血员的采血过程进行检查，找出发生错误的原因并立即纠正。,表5 血红蛋白平行样测定质量控制表 日期 2005.3.22 学校 大兴榆垡中学 采血人 崔丹,5. 注意事项,（1）环境：选用明亮、通风的室内场地，面积适宜，保证学生进出安全；最好有上下水，方便工作人员随时清洗双手；桌上铺治疗巾或医用中单，防止交叉感染。 （2）保护学生：最好配置椅子，学生采血后稍作休息，防止晕针；请校医提前提醒学生洗手，更有效的保证酒精消毒的效果；嘱咐学生针刺2小时内，保持手指清洁，不接触水。提前为学生预备好糖水，以备学生突发晕针。,5. 注意事项,（3）采血过程：若血液不易流出，

8、可由掌端向指端轻轻按摩，切勿局部用力挤压。核对好姓名、编号等信息。如有不愿采血的学生，不要过分勉强。 （4）血样储存：氰化高铁血红蛋白虽性质稳定，但为避免水分蒸发，最好在当天完成检测。如不能当天检测，应使用试管塞塞紧，置暗处可存储12小时。如超过12小时，应放在4冰箱中，检测前须平衡至室温并摇匀。,5. 注意事项,（5） 医疗用品：棉签、一次性采血针、微量血红蛋白吸管要保证在消毒保质期内，不可随便打开或长久暴露。配制好的试剂避光保存。 （6） 医疗垃圾处理：按照卫生部颁布的医疗卫生机构医疗废物管理办法进行处理。利器盒盛装不得超过容量的3/4，密封后与其他医疗垃圾一并委托专业机构集中处理。,（二

9、）检测,1. 仪器 可见光分光光度计 光径1cm比色杯,49,分光光度计每年计量检定一次，有计量报告书。,比色杯检测： 在可见光分光光度计750nm处比色（蒸馏水作空白管），吸光度小于0.003时可以使用。,（二）检测,2.仪器使用注意事项： （1）放置仪器应远离电磁干扰；避免阳光直射。 （2）开机前先确认仪器样品室内没有物品遮挡光路。 （3）备有稳压器以保证电压的稳定。 （4）开机预热至少20分钟。 （5）自检过程中不可开盖，直到屏幕显示“100.0”和“546”。 （6）所用比色杯应检查其均一性，去除不符合要求的比色杯。 （7）比色杯透光部分不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不能有气泡、悬浮

10、物。 （8）仪器开机后使用血红蛋白标准液检测，久放或搬动后须四个浓度标准液校正。,3. 仪器的质控 （1）分光光度计的校正 氰化高铁血红蛋白标准液： 含50、100、150、200g/L四种浓度，每支标准约10ml。,54,表6 可见光分光光度计波长540nm，光径1.0cm 标准液允许误差,（2）校正：,血红蛋白含量与光密度符合下述公式： Hb(g/L)=OD367.7 若光密度值超出误差允许范围，则公式中的常数（367.7）需要校正。 校正公式为： 常数k=（光密度真值/光密度度数）367.7,表7 举例：某台分光光度计,OD真相值和 0.136+ 0.272+ 0.408+ 0.5441

11、.360 此分光光度计OD值之和 0.130+ 0.255+ 0.380+ 0.5151.280 常数（1.360/1.280）367.7391.1 则此台分光光度计测样品时，其光密度读数乘391.1为血红蛋白值。,（2）校正：,表8 校正后结果,（2）氰化高铁血红蛋白标准液质控法： 采用单一浓度血红蛋白标准液（中间值）； 仪器每测20个样品做一次质控； 每次质控，连续测2次血红蛋白标准液； 记录标准液测定值，画出曲线。,曲线的绘制： 以测定结果为纵坐标,测定次数为横坐标。 确定靶值线；警告线；最大容许线。 四个界限点的确定方法 ： T0.05T为上下警告界限， T0.08T为最大界限。,12

12、4.2,120.8,115.0（T）,109.2,105.8,表9 定值溶血液质控法记录表,时间 2005.3.22 标准液浓度 100g/L 操作者 孙颖,举例,定值标准液为100g/L。,100(T),g/L,105,108,95,92,次数,最大允许线,警告线,靶值线,警告线,最大允许线,1 2 3 4 5 6,废液处理,原则：不允许直接排放到下水道， 建议委托专业机构处理。 试剂含有氰化钾，使用处理不当可造成严重公害。氰化物必须在碱性及中性条件下，加入次氯酸钠进行二级分解。 医务人员使用时，应首先做好职业防护。 废液处理，首先以水稀释（1:1）；然后，稀释后的废液按每升加入35ml次氯酸钠；充分混匀后敞开容器口，放置15小时以上，使CN-氧化成CO2和N2挥发，或是水解成CO32-和NH4+，再排入下水道。,废液处理依据,临床检验基础 第2版 罗春丽 主编 人民卫生出版社,质控小结,（1）试剂质控要点：配液使用吸量管、容量瓶；瓶式分液器，每批加样前须使用5ml容量瓶校正。容量瓶、吸量管每