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文档简介
1、摘要:肝炎病毒核酸检测和临床诊断治疗的最新进展,由:目录,第1部分肝病聚合酶链反应检测的国内外需求和现状第2部分肝病聚合酶链反应检测的最新解决方案第3部分肝病聚合酶链反应检测的发展趋势,目录, 第一部分肝脏疾病聚合酶链反应检测的国内外需求和现状第二部分肝脏疾病聚合酶链反应检测的最新解决方案第三部分肝脏疾病聚合酶链反应检测的发展趋势、国际需求、美国肝病学会2008年慢性乙型肝炎防治指南:持续消除HBV是乙型肝炎的治疗终点,HBV DNA的病毒载量尽可能小于或等于10国际单位/毫升。 根据国际需求,欧洲肝病学会2010年指南指出,尽可能将HBV病毒载量控制在10-15 IU/ml,可有效预防疾病复
2、发。欧洲肝病研究学会2011年版指南指出,丙型肝炎患者的治疗目标是丙型肝炎病毒核酸的病毒载量应低于50国际单位/毫升。(1)核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎的路线图。在治疗的第12周,对初次治疗失败的HBV-脱氧核糖核酸水平进行了评估,该水平比基线水平降低了1微克/毫升。如何检测60IU/ml?美国坦福大学医学中心Keeffe教授(专家组)提供的国际治疗路线*、国内行业指导原则和国家SFDA技术审评中心“863”项目HBV DNA定量试剂技术审评指导原则指出,HBV DNA的推荐最低检测限应为30 IU/mL。沸腾法不推荐用于提取和纯化脱氧核糖核酸。国内行业标准,内部标准参与全过程!核酸的装载
3、量为20 ul!国内现状、技术落后、工艺复杂、国内现状、国内HBV DNA检测方法多为煮沸法,试剂灵敏度为500国际单位/毫升或1000国际单位/毫升。我国的丙型肝炎病毒核酸检测方法主要是柱提取法,试剂灵敏度为1000国际单位/毫升。令人担忧的表现,专家呼吁,乙肝病毒五种核酸荧光定量检测试剂盒的比较,中国传染病杂志,2009年第3期,吴星,黄伟晋,周成,庄辉等。(中国药品生物制品检定所,北京大学卫生科学中心)陆教授,“乙型和丙型肝炎诊断和临床监测研究”,国家重大“十一五”科技项目,北京大学肝炎试剂研究中心,专家呼吁:面对当前的肝病毒核酸检测技术的现状,我们真的别无选择吗?解决方案,第1部分国内
4、外肝病聚合酶链反应检测的需求和现状第2部分肝病聚合酶链反应检测的最新解决方案第3部分肝病聚合酶链反应检测的发展趋势,临床核酸提取技术的发展:煮沸法,核酸检测的发展要求,高精度和高质量的高科技,磁珠技术,磁珠(电子显微镜),磁珠分离器,磁珠法核酸诊断领域的一个新方向。技术原理-通过超顺磁性粒子富集核酸以实现样品的高纯度和高灵敏度检测。磁珠法提取核酸的原理、技术性能、效率高、纯度高、特异性好。采用最新一代磁珠提取核酸技术,无需加热、高速离心和高灵敏度,能够很好地满足临床诊断和治疗的需要。抗干扰能力强,能够检测高脂血症、溶血和药物治疗标本,是临床疾病检测的有力手段。易于自动化。灵敏度可达10IU/m
5、l,是国内主流试剂的50-100倍。准确定量的线性范围为20 iu/ml和2.0109 iu/ml,可检测出8种HBV基因型。设置监控内部标准集成电路,有效避免假阴性。设置内部参考荧光ROX使定量更加准确。以湖南盛翔乙肝磁珠法为例,进行临床验证和比较,以湖南盛翔乙肝磁珠法为例,* 9例均在1250 IU/ml之间,a,Sansure-HBV:盛翔HBV磁珠法罗氏-HBV:罗氏扩增子-Cobas TaqMan HBV试验X-HBV: HBV国内上市公司产品(浓缩煮沸法),发展趋势,第1部分国内外肝病聚合酶链反应检测的需求和现状第2部分肝病聚合酶链反应检测的最新解决方案第3部分肝病聚合酶链反应检测
6、的发展趋势和发展趋势,(2533 2883)15=?简单性要求,发展趋势,一步技术:最简单的聚合酶链反应技术,可以实现核酸的一步提取。一步法的发展趋势、技术优势:快速,处理96个样品只需30分钟。成本低,实现病毒检测只需要一个移液器。操作步骤少,降低了错误率,提高了准确性。易于掌握,对操作人员要求低,便于部门人员安排。发展趋势、准确度要求、内部标准监控系统、假阴性的克星。内标的作用,内标参与核酸提取和扩增,通过检测内标是否正常来监测核酸提取和核酸扩增的有效性,检测结果是否有效,避免假阴性的聚合酶链反应。FAM:525nm、HEX:555nm、目标基因、内标、真阴性、HEX曲线、FAM曲线,设置参考荧光ROX,用于校正电子枪误差、耗材质量造成的光损失(如管盖厚度和光传输性能不一致)以及仪器孔之间的差异,从
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