《Filamin A在亚砷酸钠诱导非酒精性脂肪性肝炎中作用研究（论文）》

正文前言砷主要是一种广泛存在于地壳的类金属元素，人们可以通过饮水、接触空气、触碰泥土、摄入食物以及暴露于职业环境而直接导致感染砷中毒REF_Ref15606\r\h[1]。砷中毒是人体在长久外界环境摄取过量的砷所引起的以多种系统侵害为首要特征的地方化学性疾病。砷中毒也是最普遍、散布最广大、损伤机体最为严峻的污染性化学疾病REF_Ref15811\r\h[2]。据统计，全世界至少2亿人有较高的机率感染砷中毒REF_Ref15880\r\h[3]。砷可以明显调节适应性免疫应答和固有免疫，其发病机制可能与以下因素相关，例如调节关键的免疫调节因子的表达、影响淋巴细胞的免疫活化、引导细胞发生凋亡、发生氧化应激反应和产生炎症反应和直接影响巨噬细胞功能等REF_Ref15945\r\h[4]。非酒精性脂肪性肝炎NAFLD是一种指除了大量饮酒史之外出现机体代谢性功能异常的慢性疾病，是目前为止全球肝患病率最高的慢性肝病(患者约占全球成年人口的25%)。NASH的主要临床特征是产生严重的炎症反应和引发肝内纤维化病变，同时可以恶化转变为肝硬化和肝细胞性肝癌。NAFLD的临床分类类型主要包括单纯性的非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化等慢性病变。目前，学者普遍认为上述NAFLD发病病程的机制为“双重打击学说”，总体上可以分为两步：第一重打击的目标是能够引起人群患脂肪性肝炎病，这主要与人体脂质细胞代谢功能障碍和对其胰岛素的直接抵抗有紧密联系；第二重打击的目标可直接推动促使NAFLD发展恶化成NASH，这主要与机体产生炎症反应、引发氧化应激、造成线粒体细胞功能代谢失调和引起脂质过氧化反应等多种致病因素有紧密联系。在上述多种因素中，发生炎症反应是机体通过直接联系上游因素和直接链接下游因素的一种核心疾病事件，所以在上述NAFLD所有致病因素中炎症最受关注。迄今为止，治疗NAFLD疾病的最佳治疗方式主要包括干预生活方式和进行药物疗法，干预生活方式包括帮助患者减轻体重、改善膳食和加强患者进行身体锻炼，但药物治疗仍仅仅局限在通过辅助减轻体重和改善饮食等生活方面，目前尚无能改善NASH发病机理的有效药物疗法，也还没有对于NASH的疗法，尚无特别批准的药物REF_Ref15988\r\h[5]。但是当患者经过一定的治疗后，NAFLD患者的病程和进度可以延迟甚至有逆转的可能。炎症反应是一种人类机体为了能够适应体内外界的各种刺激而发生的一种具有一定防御性作用的和保护机体功能的保护性质的自身免疫化学反应。人体内的免疫系统通常依赖自身感知到各种病原性微生物（PAMP）或体内体外产生的“危险信号”（DAMP），这取决于其细胞准确表达的各种模式识别受体（PRRs），然后促进该途径的各种后续促炎症信号的自动激活以及各种炎症因子的间接产生。上述过程会大幅度刺激激活机体的固有免疫系统，而引起人体的炎症反应REF_Ref16020\r\h[6]。炎症反应的正常发生与影响机体自身免疫系统的正常活化，特别是机体内固有免疫系统的活化之间存在着非常紧密的相互关系。NLRP3是一种多蛋白的复合物，它大量分布在肝细胞胞浆中的，通过受到细胞内外各种信号的刺激来调节细胞的生理状态。迄今为止我们在这个世界上已经发现证实了多种不同类型的炎症小体的典型家庭成员，主要包括NLRs（nucleotidebindingoligomerizationdomain-likereceptors）家族和AIM2（absentinmelanoma2）家族。目前，NLRP3炎症小体已经被确认为在研究炎症小体中是最为普遍且其机制最为庞杂的REF_Ref16099\r\h[9]。并且NLRP3（NOD-likereceptorprotein3）也是NLRs家族中最具有代表性和重要意义也是最值得研究的的一个成员。NLRP3炎症小体的主要组成部分是NLRP3、凋亡相关微粒蛋白（Apoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingaCARD，ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Cysteiny1aspartatespecificproteinase1，caspase-1）前体REF_Ref16151\r\h[7]REF_Ref16180\r\h[8]。细胞激活后，NLRP3利用剪切技术从而刺激对pro-caspase-1的活化，从而产生p20活性片段，引发切割促炎症因子白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）前体和IL-1β前体，并转化为成熟的IL-1和IL-1β，然后前体细胞外膜释放成熟的IL-1和IL-1β出来从而参与炎症反应REF_Ref16099\r\h[9]。上述可知，激活NLRP3的微细胞是必须通过启动信号与激活的途径来完成。对质谱检测结果的分析发现一个可能和NLRP3有相互作用的蛋白，Filamin家族。细丝蛋白A(FilaminA,FLNA)是一种肌动蛋白交联蛋白，通过与多种结合蛋白相互作用，对细胞迁移、分化、增殖、存活等过程产生重大的影响。研究表明，FLNA基因突变可以导致人类智力发育迟缓、发育畸形、心力衰竭等疾病。此外细丝蛋白A还被认定为是一种癌症的标志物。细丝蛋白在细胞质中与信号分子相互作用，通过影响细胞迁移和粘附，可以促进肿瘤的侵袭和转移。但是最新的研究表明：当细丝蛋白被确认为定位于细胞核时，可能与转录因子发生相互作用，抑制恶性肿瘤生长和转移。这些现象凸显了细丝蛋白在调控细胞信号通路中的重要性。材料和方法材料1.1实验对象在2020年在中国辽宁省大连市大连医科大学重大疾病基因工程模式动物研究所中购买SPF级Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠（平均每只300-350g）10只；人肝细胞L-02购于中国典型培养物保藏中心。1.2实验主要试剂NaAsO2亚砷酸钠（NaAsO2，纯度≥98%，Sigma-Aldrich公司，USA，）；LPS（Sigma-Aldrich公司，USA）；二抗山羊抗兔IgG（ThermoFisherScientific公司，USA）；Ripa裂解液（Millipore公司，USA）；胎牛血清（Hyclone公司，USA）；丙烯酰胺（UltraPureGrade公司，USA）；BCA蛋白含量检测试剂盒（ThermoFisherScientific公司，USA）；胰酶（索莱宝科技有限公司，China）；MCC950（HY-12815A，MCE公司）；甘氨酸（Gly，BiotechnologyGrade公司，USA）；过硫酸铵（AP，国药集团化学试剂有限公司，China）；甲叉双丙烯酰胺（UltraPureGrade公司，USA）；全蛋白提取试剂盒（南京凯基生物工程研究所，China）；Tween-20（Sigma公司，USA）；SDS蛋白上样缓冲液（4×buffer）（索莱宝科技有限公司，China）；PageRulerPrestainedProteinLadderMarker（ThermoFisherScientific公司，USA）；十二烷基磺酸钠（SDS，BiotechnologyGrade公司，USA）；脱脂奶粉（伊利集团，China）；聚偏二氟乙烯膜（PVDF，Millipore公司，USA）；四甲基二乙胺基（TEMED，国药集团化学试剂有限公司，China）；caspase-1p20（Affinity公司，USA）；BeyoECLPlus（碧云天生物技术有限公司，China）；IL-1（万类生物技术公司，China）；GAPDH（Proteintech公司，China）；FilaminA（abcam公司，UK）1.3实验仪器CO2培养箱（FORMA公司，USA）；摇床式水浴箱（江苏太仓科教仪器有限公司，China）；电子天平（梅特勒-托利多公司，USA）；掌上离心机（TOMY公司，Japan）；漩涡混匀器（ScientificIndustries公司，USA）；制冰机（SANYO公司，Japan）；荧光显微镜（OLYMPUS公司，Japan）；电泳仪（BIO-RAD公司，USA）；超净工作台（HITACH公司，Japan）；-80℃低温冰箱（ThermoFisherScientific公司，USA）；酶标仪（ThermoFisherScientific公司，USA）；冷冻离心机（HITACH公司，Japan）；转膜仪器（BIO-RAD公司，USA）；Bio-RadChemiDocTMMPimagingsystem凝胶成像系统（BIO-RAD公司，USA）；立式压力蒸汽灭菌器（TOMYKOGYO公司，Japan）；方法2.1实验动物饲养及处理根据SamadREF_Ref17898\r\h[11]和Ola-DaviesOREF_Ref17937\r\h[12]等课题组的实验研究，我们选取10只雄性SD大鼠（300-350g）随机分为两组，每组标记5只动物，一组为对照组（用蒸馏水喂养）和一组为染毒组（5mg/kgBW），为了建立NaAsO2诱导的非酒精性脂肪性肝炎的模型，给SD大鼠以灌胃的方式口服蒸馏水或含砷的水（5mg/kgBW），为期3个月。2.2细胞培养和处理L-02细胞是正常的肝脏细胞。L-02细胞可以广泛用于药物代谢和毒性研究。因此，我们选择L-02细胞作为体外暴露模型。对L-02细胞进行培养：用含有10%胎牛血清和1640和双重免疫抗体（100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素）的细胞培养基对L-02细胞进行细胞培养，并将其放入添加到一个培养盒中，并保证培养盒始终处于一个饱和湿度5%CO2的环境中，并且在37℃温度条件下保持恒温。细胞传代：首先取出培养瓶，将残夜弃干净，然后将磷酸盐缓冲液（PBS）倒入培养瓶中，然后用毛滴管伸进培养瓶中反复冲洗2次，通过清洗剩余培养基的方式来加强后续加入的胰酶的效能。冲洗后再加入胰酶（含EDTA），该胰酶浓度为0.25%，在温度为37℃条件下进行消化，时间为90s。消化后弃掉胰酶，依旧在37℃条件下进行二次消化，时间为2min，等待细胞呈现回缩的状态且细胞间出现明显的间隙时候，我们加入一定量的新培养液，然后使用毛滴管反复吹打培养液，通过上述方式达到贴壁细胞可以脱落并且能够均匀的分布在培养液中的目的。继上述步骤后对培养液分瓶，继续培养细胞。细胞处理：对L-02细胞进行FilaminA敲减处理，分别设置对照+空载质粒，对照+siFLNA，亚砷酸钠染毒+空载质粒，亚砷酸钠+siFLNA四个组，配置工作液（10μllipo3000+10μlsiFLNA/NC+800μl无血清培基）混匀后静置20min,加入更换过7.2ml1640培养基的大培养皿内，混匀后置入培养箱。2.3蛋白质表达分析2.3.1蛋白质提取和BCA法蛋白定量2.3.1.1全蛋白提取大鼠肝脏组织我们准备预冷的镊子、PBS、EP管和手术剪。两组分别选取冰冻过的肝脏组织各50mg放入EP管中，需注意用手术剪将肝脏组织尽可能精细修剪后形成一个个的小块，再倒入1ml的PBS，进行轻微的震荡，将PBS丢弃干净。然后将700μl提前预过冷的裂解液倒入每个EP管内，利用组织匀浆机对裂解液进行匀浆操作，每次10s，总共匀浆3次，每次间隔停顿时间为5s左右，然后在摇床上方放置，时间为5min，并保持温度处于4℃，等待EP管内裂解液充分液化并开始进行肝脏裂解后，我们在提前预冷过的离心机中放入液化后的裂解液，转速16000r/min，在温度为4℃条件下进行离心，时间为20min，离心结束后，将上层澄清液均匀地转移到已预冷完成标记好的各EP管中，此时得到的上层清液就是全蛋白，然后将蛋白放入温度-80℃冰箱中进行保存备用。L-02细胞用PBS三法洗净后迅速提取贴壁残余的细胞培养液,放置于低温冰上,迅速用预冷的低温细胞刮在水中轻轻刮下已经破裂贴壁的残余细胞,将其放置在预先标记的且预冷过的EP管中。转速1000r/min，在温度环境条件为4℃下进行离心，时间为5min；离心后丢弃分离后的上层清液，剩下沉淀过的下层细胞收集后，将提前配制好的裂解液（细胞压积：裂解液体积=1:1.5）迅速加入其中。使用涡旋振荡器，以该机器的最大振幅速度进行震荡，快速持续30s，转速15000r/min，在温度为4℃条件下进行离心，时间为15min，然后在摇床上方放置，时间为5min，并保持温度处于4℃，重复5次，震荡结束后，将上层澄清液均匀地转移到已预冷完成标记好的各EP管中，此时得到的上层清液就是全蛋白，然后将蛋白放入温度-80℃冰箱中进行保存备用。2.3.1.2蛋白浓度测定用于检测蛋白质浓度的定量BCA方法：我们在96孔板上放置标准的对照孔、样品的测量孔和标准孔，每组放置3个平行孔。将10μl三蒸水添加在每个空白孔中，将10μl标准品（0.2μg/μl）加入标准孔中，1μl待测样品和9μl三蒸水加入样品测量孔。将预先配制好的BCA工作液（工作A液:工作B液体积之比为50:1）在每个孔中加入100μl，充分混匀后，在温度37℃条件下进行孵育，时间为30min，孵育后，使用酶标仪对每个孔OD值（562nm）进行测定，通过得到的OD数值并根据标准品的蛋白浓度来计算待检样品中的蛋白质浓度。2.3.2SDS凝胶电泳采用配套的玻璃制做胶板，再按照产品使用说明书的要求进行凝胶组装。根据目标蛋白质的所需分子量，选择适量的8％，10％，15％分离凝胶，充分搅拌并混合，然后使用移液枪将分离凝胶直接均匀倒在制胶板上，注意此时凝胶应距上边缘3-4cm左右。再向制胶孔中加入一定量的无水乙醇，小心均匀地把它们压齐，通过这种方式排出分离胶内多余的气泡。在室温条件下静止放置40min，等候其完全凝固后，然后将无水乙醇倒掉，并且使用滤纸吸净残存。然后开始配置适量的浓缩胶，浓度为6%，充分的进行搅拌，混匀后，使用移液枪向制胶板中均匀的打入浓缩胶，再用与之相匹配的梳子迅速安装到制胶板中，此制胶过程中不允许板内有任何制胶气泡现象产生，在室温条件下，静止放置约40min。等待浓缩胶凝固，完全凝固后，全部拆开整个制胶板，直接放入安装到整个电泳槽中，然后向其中加入电泳缓冲液至刻度线，注意电泳缓冲液需要进行提前预冷的操作，开始上样，上样量为30μg，需注意上样前，提前在恒温沸水中煮样品5min，达到样品变性的目的。接通电压至80V。分离的蛋白Marker标记条带后，将电压增加至130V。完全分离目标蛋白带后，电泳即告完成。2.3.3转膜本次化学实验所有目的条带都主要是根据湿转转膜法对所有分离物凝胶进行干湿转膜将分离胶按照蛋白Maker分子量、目的蛋白分子量以及内参蛋白分子量（NLRP3、Caspase-1、IL-1β、β-Actin、FilaminA）相对应位置进行切割提取，将提取后的分离胶放置在转膜液中。我们提前将PVDF膜按照蛋白凝胶尺寸进行手工裁剪，在甲醇中放进裁剪好后PVDF膜，并直接持续浸泡30s，然后转移至转膜液中。按照如下顺序放置：夹板（黑）-海绵-三层滤纸-分离胶-PVDF膜-三层滤纸-海绵-夹板（白），需注意必须严格从负极到正极进行转膜。转膜的电流为300mA的恒流，当蛋白分子量<60kDa，转膜60min；当60kDa<蛋白分子量<100kDa，转膜90min；当100kDa<蛋白分子量<130kDa，转膜120min；当蛋白分子量>130kDa，转膜180min。2.3.4封闭及孵育抗体拔下电源，将取下来的PVDF膜在密封溶液（10％脱脂乳）中封闭浸泡。保持恒定温度37℃进行水浴摇床1h。同时，配置一抗（NLRP3（1:1000）、Caspase-1（1；500）、IL-1β（1：500）、β-Actin（1：5000）、FilaminA（1：40000））并混匀。待到封闭结束，使用TBST润洗刚取出的PVDF膜，时间5min，达到清洗干净残余的脱脂牛奶目的后，置于一抗中，在温度4℃条件下，采取摇床操作后再过夜。第二天，在TBST中再次浸泡取出的PVDF膜，放置恒温摇床上进行二次清洁，时间为5min，上述操作重复5次，同时配置二抗（1:5000）。清洗结束后，置于二抗中，在室温条件下，进行摇床孵育2h，孵育结束，再次洗膜，过程同上。2.3.5显色反应避光处理，准备适量的化学底物发光溶液（溶液A：溶液B=1：1），将其均匀地滴在PVDF膜上，注意膜正面朝上，避光30秒。使用Bio-RadChemiDocTMMPimagingsystem凝胶成像系统进行拍照。2.3.6结果分析结合使用ImageJ等图像灰度分析处理软件，分析目的蛋白的灰度值。β-Actin作为一种细胞内参表达蛋白，需分别依次测得用于计算不同的表达蛋白质在表达条带的相对蛋白灰度的数值,反映不同蛋白质在条带表达蛋白层次的不同变化。2.4统计分析本次统计试验我们至少重复做三次独立试验，使用SPSS17.0软件进行统计学分析，借助GraphpadPrism7软件制图，选用均值±标准误来表示实验数据。组间均数比较采用单因素方差分析（One-wayANOVA）方法，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。结果NaAsO2暴露诱导NLRP3炎症小体激活图1NaAsO2暴露诱导NLRP3炎症小体激活用0、5mg/kgBWNaAsO2处理雄性SD大鼠。（A）借助蛋白质免疫印迹法进行检测肝脏组织内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达*表示与对照组相比，P<0.05;**表示与对照组相比，P<0.01。NaAsO2暴露诱导FilaminA蛋白表达上调图2NaAsO2暴露诱导FilaminA蛋白表达上调用0、5mg/kgBWNaAsO2处理雄性SD大鼠。（A）借助蛋白质免疫印迹法进行检测肝组织内FilaminA蛋白的表达*表示与对照组相比，P<0.05。MCC950预处理对FilaminA蛋白表达无影响图3MCC950预处理对FilaminA蛋白表达无影响用0、4μMNaAsO2处理L-02细胞。（A）借助蛋白质免疫印迹法进行检测L-02细胞内FilaminA蛋白的表达*表示与对照组相比，P<0.05。敲减FilaminA后炎症小体激活受到抑制图4敲减FilaminA后炎症小体激活受到抑制用0、4μMNaAsO2处理L-02细胞。（A）利用蛋白质免疫印迹法检测L-02细胞内FilaminA、NLRP3、IL-1β和Caspase-1蛋白的表达**表示与对照组相比，P<0.01;***表示与对照组相比，P<0.001;****表示与对照组相比，P<0.0001;###表示与NaAsO2、siFLNA共处理组相比，P<0.001;####表示与NaAsO2、siFLNA共处理组相比，P<0.0001。讨论接触砷会导致多种疾病和其他病理损伤。REF_Ref18091\r\h[13]。目前，地方性砷中毒仍被认为是一个全球性的公共健康问题REF_Ref18133\r\h[14]。近年来,中国逐渐发展成为全球受地方性砷病影响最大的国家之一REF_Ref18159\r\h[15]。砷的毒性与化合价，剂量和靶器官密切相关。REF_Ref18244\r\h[16]。促进caspase-1的激活启动是通过借助NLRP3识别外源性危险相关分子模式（damage-associatedmolecularpatterns，DAMPs）和内源性危险相关分子模式（pathogen-associatedmolecularpatterns，PAMPs）的，同时释放促进炎症因子。NaAsO2是否可以充当DAMP，刺激NLRP3炎性小体的活性同时推动IL-1和IL-1β的成熟和释放仍需要实验进一步证实。在该体内实验中，将实验对象雄性大鼠按照是否暴露砷来设置蒸馏水对照组和NaAsO2染毒组，通过对肝组织提取蛋白来检测NLRP3相关蛋白的表达能力水平。在体外实验中，对实验对象人L-02细胞进行相关处理，当经特异性抑制剂MCC950预处理后，NaAsO2暴露对NLRP3相关蛋白表达水平无影响。当敲减NLRP3相关蛋白后，则NaAsO2暴露时，NLRP3激活受到抑制，以上证明了相关蛋白跟NLRP3发挥作用的前后顺序，体内外实验结果证明，NaAsO2暴露能够诱导细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白的高表达。经实验观察到，经NaAsO2染毒后，FilaminA蛋白表达上调，进而激活NLRP3炎症小体，诱导肝脏发生非酒精性脂肪性肝炎。五、结论NaAsO2通过造成FilaminA蛋白水平上升，激活NLRP3诱导肝脏发生非酒精性脂肪性肝炎。参考文献GramaticaP．OnthedevelopmentandvalidationofQSAＲmodels［J］．MethodsMolBiol，2013，930:499-526.BagisS,TamerL,SahinG.Freeradicalsandantioxidantsinprimaryfibromyalgia:mnoxidativestressdisorder?[J].RheumatolInt,2005,25(3):188-190.王宇泽,谭超,罗勇军,刘鑫源.我国砷中毒的医学地理分布特点及防治措施研究进展[J].解放军预防医学杂志,2020,38(01):103-105.ElliottEI,SutterwalaFS.InitiationandperpetuationofNLRP3inflammasomeactivationandassembly[J].Immunologicalreviews.2015;265(1):35-52.VILLANUEVAMT.ConsciousuncouplinginNASH[J].NatRevDrugDiscov，2017，16（4）：239.MatzingerP.Thedangermodel:arenewedsenseofself.Science,2002,296:301–305.StienstraＲ，vanDiepenJA，TackCJ，etal．Inflammasomeisacentralplayerintheinductionofobesityandinsulinresistance［J］．ProcNatlAcadSciUSA，2011，108(37):1532415329OzakiE，CampbellM，DoyleSL．TargetingtheNLＲP3inflammasomeinchronicinflammatorydiseases:currentperspectives［J］．JInflammＲes，2015，8(3):1527Alfonso-LoechesS,Urena-PeraltaJR,Morillo-BarguesMJ,Oliver-DeLaCruzJ,GuerriC.JournalofPharmaceuticalPractice，Vol.38，No.1，January25，2020SamadN,JabeenS,ImranI,ZulfiqarI,BilalK.Protectiveeffectofgallicacidagainstarsenic-inducedanxiety−/depression-likebehaviorsandmemoryimpairmentinmalerats[J].Metabolicbraindisease.2019.Ola-DaviesO,AjaniOS.SemencharacteristicsandspermmorphologyofPistiastratiotesLinn.(Araceae)protectedmalealbinorats(Wistarstrain)exposedtosodiumarsenite[J].Journalofcomplementary&integrativemedicine.李述刚,徐孟川,芮东升,徐上知,牛强,冯刚玲.无机砷诱导鼠类氧化损伤的Meta分析[J].毒理学杂志,2017,31(04):251-258.KrohnＲM，LemaireM，NegroSLF，etal．High-seleniumlenti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改善肝脂肪变性、纤维化,延缓NAFLD病情进展。四、小结NAFLD是一种复杂性的疾病,它由于肝脏、其它系统以及器官之间的相互作用所导致。肝脏在代谢综合征患者体内中起到调节体内血脂和平衡葡萄糖的作用。NAFLD的产生与肠道内菌群调控、饮食组织结构变化、胰岛素抵抗力增强、脂质异常症、肥胖有着一个密切而又无法分离的关系。随着目前世界上大范围内肥胖和其他相关慢性疾病的大流行,NAFLD的肥胖发病率必然地也会逐年向上递增,给整个社区和个体家庭造成了巨大的经济负担。糖尿病、肥胖、高血压等都是影响NAFLD的发病主要因素,它们都会严重增加罹患NAFLD的肝硬化、晚期慢性肝衰竭及肝癌复发风险。对这些疾病具有高风险性的群体定期进行筛查诸如NAFLD的筛查非常必要。另外,与糖尿病极其密切相关的NAFLD会大幅度提高慢性心血管疾病和恶性肿瘤的发生和死亡的风险,这类疾病的患者也应该时刻提高自己的警觉。目前,肝活检已经成为了诊断NAFLD的一项重要标准,但其侵袭特异性和采样误差等限制了广泛使用和实际应用。近年来,研究重点转向NAFLD的非侵入性诊断。预计TE技术等其他非侵入性工具将会逐渐成为医学和临床领域业务中用来诊断NAFLD的一种常规手段,然而要确认其治疗价值,还必须扩展到用于细致研究的患者数量。NAFLD的基本治疗原则包括:通过改变人们的生活习惯和减轻体重,选择针对各种病理状况的治疗药物,积极监测和管理有关的风险影响因素,防止NAFLD的发展延伸到肝硬化和肝癌。NAFLD的治疗技术需要通过不断开发和改善。综述参考文献郑昕，王亚平，张志银，等基于“体质可调”理论治疗非酒精性脂肪性肝炎临床研究［J］．世界中医药，2014，9(3):308-310．王金周．自拟消脂方治疗非酒精性脂肪性肝炎的42例临床观察［J］．世界中医药，2013，8(7):752-754．钟岚，范建高，王国良，等,非酒精性脂肪性肝炎发病机制的实验研究［J］．中华消化杂志，2001，21(8):484．武彦宁，蔡照华，孙海梅，等,非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏内源性H2S合成减少［J］．首都医科大学学报，2010，31(3):287-292．刘亮，肖延风，尹春燕，等．内质网应激在高脂饲料诱导幼年大鼠脂肪性肝损伤中的作用［J］．西安交通大学学报:医学版，2015，