CN1493273A-无水手消毒清洁剂制备方法配方专利技术

[19]中华人民共和国国家知识产权局[43]公开日2004年5月5日[11]公开号CN1493273A[22]申请日2003.9.18[21]申请号03158563.9[74]专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利本发明涉及一种液体清洁产品，它通过在很短时间内的擦洗就能够有效地降低手上微生物的数量，并且使用后皮肤很快就会变干，不会对皮肤造成损伤或使皮肤变得干燥。消毒清洁剂组合物含有有效量的醇，用来减少皮肤表面上的微生物，并含有添加剂，它可以将皮肤的pH值保持在4知识产权出版社出版21.一种无水手消毒清洁剂，其包括：约60wt.%到约90wt.%的一种或多种有机醇类，约5wt.%到约35wt.%的一种或者多种硅氧烷基物质，最多约5wt.%的一种或者多种湿润剂，最多约12wt.%的一种或者多种维持皮肤pH值的添加剂，以及还含有一种或者多种以某种浓度添加进去的增稠剂，以使本产品在约25℃的温度下保持100cp到100,000cp的粘度。2.权利要求1的手清洁剂，其中所含的醇选自无水乙醇，异丙醇、丙醇、丁醇；苯乙醇，苯甲醇和它们的组合。3.权利要求1的手清洁剂，其中所用的pH值保持添加剂可使皮肤的pH值保持在约4.0至6.0之间。4.权利要求3的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂选自热解法二氧化硅，乳酸、乳酸盐钠和它们的组合。5.权利要求3的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂是热解法二氧化硅。6.权利要求5的手清洁剂，其中所述热解法二氧化硅是以最多约5.0wt.%的浓度添加的。7.权利要求3的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂是乳酸。8.权利要求7的手清洁剂，其中所述乳酸是以最多约5.0wt.%的浓度添加的。9.权利要求6的手清洁剂，其中所述还包括以最多约5.0wt.%的浓度添加的乳酸。10.权利要求3的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂是乳酸钠。11.权利要求10的手清洁剂，其中所述乳酸钠是以最多约2.0wt.%的浓度添加进去的。12.权利要求1的手清洁剂，其中所述硅氧烷基物质是环甲基硅酮，13.权利要求1的手清洁剂，其中所述湿润剂是肉豆蔻酸异丙酯。14.权利要求1的手清洁剂，其中所述增稠剂是纤维素基的增稠剂。03158563.9权利要求315.权利要求14的手清洁剂，其中所述增稠剂是甲基纤维素。16.权利要求1的手清洁剂，其中所述增稠剂是热解法二氧化硅。17.权利要求16的手清洁剂，其中所述热解法二氧化硅是以最多约5wt.%的浓度出现的。18.权利要求1中的手清洁剂还含有一种芳香剂。19.权利要求18的手清洁剂，其中所述芳香剂是以最多约1.5wt.%的浓度添加的。20.权利要求1中的手清洁剂还包含有一种着色剂。21.权利要求1中的手清洁剂还包含有一种或多种润肤剂。22.权利要求21的手清洁剂，其中所述润肤剂是以最多约5wt.%的浓度添加的。23.权利要求22中的手清洁剂的润肤剂选自茶树油，大麻油、芦荟基油和它们的组合。24.权利要求1中的手清洁剂的粘度在温度为25℃时的范围是从约25.手消毒清洁剂，主要含有以下成分：a)醇混合物，它是由浓度约为60wt.%到约90wt.%的一种或多种醇与浓度约为5wt.%到约35wt.%的一种或者多种硅氧烷基物质，浓度最多约为5wt.%的肉豆蔻酸异丙酯，与浓度约为最多5.0wt.%的乳酸和浓度最多约为2.0wt.%的乳酸钠在环境温度条件下进行混合，并达到均匀后制成的，并且，b)增稠混合物，是通过将一部分所述醇混合物移到一个单独的混合容器中，并添加浓度最多约为1.5wt.%的甲基纤维素，同时不停地搅拌，直到混合均匀而制成的，其中该增稠混合物在环境温度下，与该醇混合物混合，并且不停地搅拌，直到生成物的粘度在25℃的温度下约达到250cp到约450cp的范围；该醇混合物与该增稠混合物都是在不含水的条件下制成的。26.权利要求25中的手清洁剂，其中所述醇选自无水乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇；苯乙醇，苯甲醇和它们的组合。03158563.9权利要求427.权利要求25的手清洁剂，其中所述的硅氧烷基物质是环甲基硅酮，三甲基甲硅烷氧基硅酸盐和它们的组合。28.权利要求25的手清洁剂还含有浓度最多约5wt.%的热解法二氧化硅，它被添加到增稠混合物中。29.权利要求25中的手清洁剂还含有以最多约1.5wt.%的浓度添加30.权利要求25的手清洁剂还含有浓度最多约5wt.%的一种或多种润肤剂，这种润肤剂选自茶树油、大麻油、芦荟油和它们的组合物，该润肤剂被添加到该醇混合物中。31.一种制备手消毒清洁剂的方法，主要包括以下步骤：a)将浓度约为60wt.%到约90wt.%的一种或者多种醇类与浓度约为5wt.%到约35wt.%的一种或者多种硅氧烷基物质，与浓度最多约为5wt.%的肉豆蔻酸异丙酯，与浓度最多约为5.0wt.%的乳酸和浓度最多约为2.0wt.%的乳酸钠在环境温度下混合，直至混合均匀，b)将浓度最多约为1.5wt.%的甲基纤维素添加到上面“a)”步骤中所形成的混合物的一部分中去，调制成均匀的混合物，并且c)在环境温度下，将甲基纤维素混合物添加到上面“a)”步骤中所形成的混合物中，不断地搅拌，直至制成一种在25℃的温度下，粘度约为250cp到450cp的产品。32.权利要求31中的手清洁剂，其中所述醇类选自无水乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇；苯乙醇，苯甲醇和它们的组合中。33.权利要求31中的手清洁剂，其中所述硅氧烷基物质是环甲基硅酮，三甲基甲硅烷氧基硅酸盐和它们的组合。34.权利要求31中的手清洁剂还含有一种浓度最多约5wt.%的热解法二氧化硅，它被添加到增稠混合物中。35.权利要求31中的手清洁剂还含有以最多约1.5wt.%的浓度添加到该乙醇混合物中的芳香剂。36.权利要求31中的手清洁剂还含有浓度最多约5wt.%的一种或多种润肤剂，这种润肤剂选自茶树油、大麻油、芦荟油和它们的组合，该03158563.95浓度约为60wt.%到90wt.%的一种或多种醇类，浓度约为11wt.%到35wt.%的一种或多种硅氧烷基物质，浓度最多约为5wt.%的一种或多种湿润剂，浓度最多约为10wt.%的一种或多种抗微生物剂浓度最多约为12wt.%的一种或多种皮肤pH值保持添加剂；以及一种或多种以某种浓度添加进去的增稠剂，它使本产品在25℃的温度下产生100cp到100,000cp的粘度。38.权利要求37的手清洁剂，其中所述醇类选自无水乙醇，异丙醇、丙醇、丁醇；苯乙醇，苯甲醇和它们的组合。39.权利要求37中的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂能使皮肤pH值保持在约4.0到6.0的范围内。40.权利要求39中的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂选自包含有热解法二氧化硅，乳酸、乳酸钠和它们的组合。41.权利要求40中的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂是以最多约5wt.%的浓度添加的热解法二氧化硅。42.权利要求40中的手清洁剂，其中所述pH值保持添加剂是以最多43.权利要求41中的手清洁剂还含有以最多约5.0wt.%的浓度添加44.权利要求40中的手清洁，其中所述pH值保持添加剂是以最多约2.0wt.%的浓度添加进去的乳酸钠。45.权利要求37中的手清洁剂的硅氧烷基物质是环甲基硅酮，三甲基甲硅烷氧基硅酸盐和它们的组合。46.权利要求37中的手清洁剂，其中所说的湿润剂是肉豆蔻酸异丙47.权利要求37中的手清洁剂，其中所述增稠剂是纤维素基增稠剂。48.权利要求47中的手清洁剂，其中增稠剂是甲基纤维素。03158563.9权利要求649.权利要求37中手清洁剂，其中增稠剂是以最多约5wt.%的浓度存50.权利要求1中的手清洁剂还含有以最多约1.5wt.%的浓度添加的51.权利要求1的手清洁剂还含有一种或多种以最多约5wt.%的浓度52.权利要求51的手清洁剂，其中所述润肤剂是选自茶树油，大麻油、芦荟基油和它们的组合。53.权利要求37中的手清洁剂，所述所述粘度在温度为25℃时的范围是从约250cp到约450cp。54.权利要求37中的手清洁剂，其中所述抗微生物剂选自对氯间二甲芬酚，葡萄糖酸洗必泰，三氯生，季铵盐和它们的组合。55.权利要求37的手清洁剂，其中所述抗微生物剂是以约2wt.%到约3.75wt.%的浓度添加进去的对氯间二甲苯酚。56.权利要求37的手清洁剂，其中所述醇类是以约74wt.%到约77wt.%的浓度，其中的硅氧烷基物质是以约14wt.%到约17wt.%的浓度，以及抗微生物剂是以约1wt.%到约3.75wt.%的浓度分别存在的。57.权利要求1的手清洁剂还包括将本产品加到外科手术用擦洗刷58.权利要求37的手清洁剂还包括将本产品加到外科手术用擦洗刷59.权利要求1的手清洁剂还包括将本清洁剂加到手帕上。60.权利要求37的手清洁剂还包括将本清洁剂加到手帕上。03158563.97无水手消毒清洁剂申请前的相互参照本申请书请求把优先权给予序列号为09/973,327的美国专利申请，该申请要求2000年10月20日提交的序列号为60/241,900的美国专利申请的优先权，后者在本文件中则作为参考文件提供。发明领域本发明所涉及的是在应用到皮肤上时不需要用水来发挥抗微生物效果，可在局部产生持续作用的抗微生物组合物。具体地说，本发明的抗微生物组合物使用的是一种醇基溶剂，它能使皮肤上的微生物立刻实质性地减少，它所含有的硅氧烷添加剂有助于加快挥发过程，它所含有的润肤剂则可使皮肤感觉湿润。发明背景众所周知，用肥皂和热水洗手是减少皮肤表面微生物的一种非常有效的方法。不过，如果手洗过后没有擦干，微量的水残余物会藏匿微生物。当然，这种情况大体上不会给人们造成严重的威胁，但是在医院的环境里，人们非常容易被感染，所以希望尽可能减少任何被污染的危险。在过去的几年里，研究工作主要集中在如何研制出一种能够不使用水就能有效地对皮肤进行消毒的液体清洁产品上面。许多这种液体清洁产品都含有较高浓度或者较高重量百分比的酒精成分。酒精可以使清洁产品在使用时干得更快，但是同时也会造成皮肤干燥，让人难以忍受，并且还会使皮肤过敏，造成干裂和擦痛。发明内容本开发涉及的是不基于水的液体清洁产品。当用于局部时，清洁产03158563.9说明书第2/19页8品能在比较短的时间内有效地减少皮肤上的微生物。另外，本清洁剂可以快速挥发，反复使用也不会对皮肤造成伤害和使皮肤干燥。还有一个好处就是本清洁产品可以给皮肤带来湿润感觉。本发明提供了一种具有抗微生物消毒功能的清洁剂组合物，它包括可以减少皮肤表面微生物的有效量的酒精，一种可以维持皮肤的pH值约在4.0至6.0范围的添加剂。具体地说，可加入可以帮助平衡皮肤pH值的有效量的乳酸，热解法二氧化硅，乳酸钠或者它们的组合。本清洁剂组合物还可以包括使用时能加快挥发的硅氧烷和用于湿润皮肤的润肤剂或油脂。本发明还涉及到使用如下所述的有持续作用的抗微生物组合物来减少皮肤上微生物数量的方法。优选实施方案的详细描述本发明涉及到的是一种非水基的手消毒清洁剂组合物。本产品是基于酒精的，并且加入了添加剂，用来使皮肤的pH值保持在约4.0到6.0的范围内，这样就可以减少皮肤上的微生物总数，而使皮肤保持正常菌群。本清洁剂组合物中还含有硅氧烷，它有助于加快挥发过程，并且还可含有能使皮肤感到湿润和新鲜的润肤剂。本发明的抗微生物组合物对于减少皮肤上微生物的数量非常有效，同时还能湿润和保护皮肤。另外，由于本清洁剂不含有水分，与其他水基清洁产品相比，它还具有几个特殊的优点。鉴于本发明组合物成分中含有微不足道的，或者几乎不含有水分，清洁剂组合物从皮肤上的挥发率比水基清洁剂更均匀。外界空气的湿度会影响水分的挥发。所以，含有大量水分的清洁剂组合物在湿度较高的情况下将会从皮肤上挥发得很慢。这样，不仅要求消毒者使用更多的时间拂去皮肤上的清洁剂组合物，还会留下一种发粘和湿冷的感觉。本发明的清洁剂组合物就不会造成这些损伤，因为它的成分中不含有水分，并且酒精和易挥发的硅氧烷成分的蒸发率不受空气中湿度的影响。手消毒清洁剂含有一种或者多种醇类成分，它们可提供抗微生物功能，帮助挥发，并能用作溶剂。并且，这些醇类被证明可以用于人的皮肤，如乙醇，异丙醇或者它们的组合等。这些醇类是以约60wt.%-90wt.%03158563.9说明书第3/19页9手清洁剂还含有一种或多种添加剂，以使皮肤的pH值保持在大约4.0至6.0之间。这些添加剂包括例如热解法二氧化硅，乳酸，乳酸钠或者它们的组合。在上述的pH值范围内，皮肤上的微生物数量将会减少，而皮肤上的正常菌群将会保持正常水平，可为本清洁剂带来潜在的附加抗微生物效果。清洁剂中还含有有效量的添加剂成分，用来保持期望的皮肤pH值，根据配方中所包含的添加剂或者添加剂的组合，添加剂的含量范围可以在大约Owt.%至12wt.%之间。手清洁剂的配方中还含有一种或多种硅氧烷基物质，用来帮助加快挥发过程。在本发明的组合物中所使用的易挥发性的硅氧烷的蒸发所需热量比酒精要小，并且在皮肤上不产生如使用纯酒精成分配方所观察到的使人不爽的冷却作用。另外，使用硅氧烷基物质能够降低流体组合物的表面张力，这样可以提供更大的皮肤接触面，因而将会有更多的流体与有害微生物接触，以使全面的杀菌效果能得到更好地发挥。这种硅氧烷基物质，如环甲基硅酮(cyclomethicone),三甲基甲硅烷氧基硅酸盐 (trimethylsiloxysilicate)或者它们的组合，以大约4wt.%至50wt.%如业界所共知，添加湿润剂是为了帮助清洁剂中液体的保留，而添加增稠剂是为了调节清洁剂的粘度。在本发明中，任何不会明显改变配热法二氧化硅或者是它们的组合，如以大约Owt.%至1.5wt.%的浓度添加进组合物中的甲基纤维素；和以大约Owt.%至5.0wt.%的浓度添加进组合手清洁剂也可以任选包括另外的抗微生物剂以增强酒精的杀菌效果。典型的抗微生物剂包括：对氯间二甲苯酚(PCMX),葡萄糖酸洗必泰(chlorhexidenegluconate)(CHG),三氯生，以及季铵盐，如氯苄烷03158563.9说明书第4/19页铵、氯化苄乙氧铵和溴烷胺以及其他业界中公认的杀菌剂。这些杀菌剂在组合物中的含量可以在约25wt.%和约10wt.%之间进行选择，或者以一以作为一个有代表性和非限制性的例子，以一个被认为可以提供安全的抗微生物作用的，以约2wt.%到约3.75wt.%的浓度添加进本发明的组合作为选择，润肤剂和美化剂等添加剂，比如芳香剂，着色剂也可以添加到手消毒清洁剂配方中去。可以按消费者所需和可接受的浓度加入润肤剂或者湿润剂，芳香剂或者着色剂。例如，配方中可以包括浓度约为Owt.%到1.5wt.%的芳香剂，染色剂或者它羊毛脂、希蒙得木油、甘菊、花油、草本植物或者它们的组合，它们被本产品是这样制成的：把乙醇，硅氧烷基物质，湿润剂，乳酸、或者乳酸钠在环境温度下，放在一个大容量混合容器中，不断搅动直到它们完全混合在一起。然后将乙醇混合物一部分移到一个单独的混合容器中，并加入增稠剂，进行搅拌直到混合物稍微变稠。作为选择，热解法二氧化硅也可以添加到增稠剂混合物中，以使混合物更加粘稠。然后将增稠剂混合物与剩下的乙醇混合物混合在一起，同时继续不停地搅动。生成的产品将具有一定的粘度，使得产品可以通过手泵进行分配，就如常用的液体肥皂分配瓶一样。例如，在25℃的温度条件下，粘度范围约为100厘泊(cp)到100,000厘泊。芳香剂可以如添加到乙醇时一样，制成的清洁剂可以装入涂药器作为特殊应用。例如，本清洁剂可以加在外科手术时使用的擦洗刷子的海绵上使用。然后，这种浸有清洁剂的擦洗手刷就可以在施行手术前被外科手术人员用来给病人进行无菌消毒准备。本产品还可以浸在织物或者非织物的手帕上。这样的手帕既可以单独包装也可以几张包装在一起。这种浸有消毒清洁剂的手帕可以成为一种非常方便的产品，用于清洁医生的手或者在对患者进行检查前或03158563.9说明书第5/19页下面这些实施例是根据本发明制成的手清洁剂的有代表性的例子。还提供了一些清洁剂的抗微生物性能数据，所提供的清洁剂配方只为说实施例1:该手消毒清洁剂是这样配制成的：它含有约70wt.%的无水乙醇(3%是异丙醇),约18.6.wt%的DowCorning@345Fluid(环甲基硅酮),约4.5wt.%的肉豆蔻酸异丙酯，约1.5wt.%的乳酸，约1.5wt.%的乳酸钠(40%处于活化状态),约1.3wt.%的DowCorning®749(环甲基硅酮和三甲基甲硅烷氧基硅酸盐产品),约0.6wt.%的DowMethocel®OS(甲基化纤维素),以及约2.0wt.%的CabosilM5热解法二氧化硅，这些境温度下，将无水乙醇，345Fluid,肉豆蔻酸异丙酯，乳酸、乳酸钠，以及DowCorning749放在一个装备了至少一个搅拌器，或者混合叶片的醇混合物移到一个单独的，装配有混合叶片的混合容器中，添加Methocel°,搅拌直到混合物稍微变稠。然后，将热解法二氧化硅添加到/Methocel混合物与剩下的乙醇混合物混合到一起，不停地搅拌，直到热解法二氧化硅混合物完全溶合在乙醇混合物中。制成的产品的pH值为4.5,并且在温度为25℃左右时的粘度约为350cp。实施例2:该手消毒清洁剂是这样配制成的：它含有约77.6wt.%的无水乙醇(3%是异丙醇),约15.5.wt%的DowCorning345Fluid(环甲基硅酮),约1.5wt.%的肉豆蔻酸异丙酯，约3.6wt.%的乳酸钠(40%处于活化状态),约1.0wt.%DowCorning749(环甲基硅酮和三甲基甲硅烷氧基硅酸盐产品，约0.5wt.%的DowMethocel®OS和约0.3wt.%的芳香剂。合罐里至少要装备一个搅拌器，或者一个混合搅拌叶片，一直搅拌到乙说明书第6/19页将Methocel与剩下的乙醇混合物混在一起，继续搅拌均匀，直到Methocel@混合物完全溶合在乙醇混合物中。制成的产品的pH值为4.3,并且在温度为25℃左右时的粘度约为340cp。实施例3.除了在使用约1.5wt.%的茶树油替代约1.5wt.%的无水乙醇(3%为异丙醇)这一点不同外，本手消毒清洁剂的制备方法与实施例2中的产品制备方法完全一样。它如在实施例2所示，是用茶树油添加到乙醇混合物中制成的。制成的产品的pH值为4.4,并且温度为25℃左右时的粘度约为360cp.实施例4:除了在使用大约1.8wt.%的大麻油替代约1.8wt.%的无水乙醇(3%为异丙醇)这一点不同外，本手消毒清洁剂的制备方法与实施例2中的产品制备方法完全一样，它如实施例2所示是用大麻油添加到乙醇混合物中制成的。制成的产品的pH值为4.3,并且在温度约为25℃时的粘度为350cp.实施例5:除了在使用大约1.0wt.%的茶树油和大约0.5wt.%的大麻油替代约1.5wt.%的无水乙醇(3%为异丙醇)这一点不同外，本手消毒清洁剂的制备方法与实施例2中的产品制备方法完全一样。如实施例2所示，它是用茶树油和大麻油添加到乙醇混合物中制成的。制成的产品的pH为4.3,并且在温度约为25℃时的粘度是365cp.补充实施例：在这里按照上述程序准备了几个手消毒清洁剂的补充成分配方，详见表1.有关配方的外观美学品质的组成和评论请见下面的表格。单位为总量的wt.%。我们很感兴趣地注意到E29,E31,E32和E33的配方产生了一个单独的产品。这可能是因为酒精的浓度太低，只有40%03158563.9说明书第7/19页表1CHG(水中浓度为20%)三氯生(100%)(水中浓度为50%) E【::··::事事:··::03158563.9说明书第8/19页CHG(水中浓度为20%)三氯生(100%)氯化苄乙氧铵(水中浓度为50%)氯苄烷铵乳酸钠香料0.29::一一::一一1:1:……·--03158563.9说明书第9/19页异丙醇丙醇丁醇苯乙醇苯甲醇CHG(水中浓度为20%)三氯生(100%)氯化苄乙氧铵(水中浓度为50%)丙二醇甘油乳酸钠肉豆蔻酸异丙酯香料一■一■一一~**::::●●8.10】】一一:::0.300.30::外观澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液03158563.9说明书第10/19页CHG(水中浓度为20%)三氯生(100%)氯化苄乙氧铵(水中浓度为50%)氯苄烷铵甘油 ……………··::0.30……………··::一一外观澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液澄清溶液03158563.9说明书第11/19页异丙醇丙醇丁醇CHG(水中浓度为20%)三氯生(100%)氯化苄乙氧铵(水中浓度为50%)氯苄烷铵甘油乳酸钠肉豆蔻酸异丙酯香料外观 一一0.30澄清溶液分层分层澄清溶液澄清溶液------澄清溶液03158563.9说明书第12/19页一一CHG(水中浓度为20%)-三氯生(100%)(水中浓度为50%)液11■■1中中0.301一-1一-03158563.9说明书第13/19页的方法来评估。例如，可以用最低抑制浓度研究来确定可以抑制微生物生长的清洁剂的最低抑制浓度，也可以用一种快速杀菌研究来测定清洁剂快速杀灭已知微生物数量的能力。这些研究可以利用在表2中列出的表2有机体有机体黑曲霉(Aspergillusniger)蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)表皮葡萄球菌(Staphyloccus金黄色葡萄球菌(staphyloccus单核细胞增生斯特氏菌(Listeria空肠弯曲杆菌(Campylobacter金黄色葡萄球菌(Staphyloccus最低抑制浓度(MIC)是一个抗微生物剂可以抑制微生物生长的最低03158563.9说明书第14/19页浓度。对抗微生物实验物质的一系列的稀释是在肉汁或者琼脂中进行的，然后将一个标准浓度的有机体放入含有稀释实验物质的琼脂培养皿中。针对这个物质用多种有机体进行了实验，以确定该物质在保持抗微生物功效的情况下的最大稀释程度。具体地说，为测出最小抑制浓度对实施例2中的产品(“产品2”)进行了实验，这个实验是按照某个程序在实验物质稀释度为1:2(按重量)肉汁中进行的。一份容量为200μL的等份的稀释液被添加到微量滴定板的一排孔的第一个孔中。然后，产品的稀释从第一个孔开始，所有其他1:2,1:4,1:8,1:10,1:20,1:50,1:80,1:100,1:150及1:200。微生物和介质的对照孔也包括在内。将目标微生物有机体从培养皿中刮下来，然后以密度约为1.0×10⁵细胞再悬浮于磷酸盐缓冲液中。然后将每个实验有机体的一种约为5×10⁴CFU(菌落形成单位)的接种体都放入微量滴定板的排成一列的实验孔中，并且进行混合，微量滴定板在37±2℃的温度下被孵化23小时左右。表3总结了实验孔中微生物的生长，以“(+)表示生长了，(0)表示没有生长”。MIC被认为是重复试验显示其中微生物的生长完全被抑制03158563.9说明书第15/19页表3对照物介质100+++++++++0200++++++十++0100+++++++++0200+++++++++01000++++++++02000++++++++0100+0+++++++02000++++++++01000++++++++020000+++++++0100+++++++++020++++++++++0100+++++++++0200++++++++十010000+++++++020000+++++++01000++++++++02000++++++++0100+++++++++0200+++++++++0100+++++++++0200+++++++++010000+++++++020000+++++++0100+0+++++++0200+0+++++++010