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DB45甘蔗黄叶病毒检测技术规程Technicalcriterionfordetectionofsugarcaneyellowleafvirus广西壮族自治区市场监督管理局发布I1甘蔗黄叶病毒检测技术规程本文件规定了甘蔗黄叶病毒检测技术规程的样品采集与存放，组织免疫印迹法检测和一步法3.14.1采样工具4.2采样方法4.2.1采样前和采样过程中应避免样本交叉污染，采样及样品前处理过程中应戴一次性手套。4.2.3甘蔗蔗种采样：取中部种茎，编号保存备用。4.3运送和存放4.3.1用于组织免疫印迹检测的样品采集后，用保温壶或保温桶加25.1原理5.2仪器与设备5.2.4硝酸纤维膜、酒精灯、手术刀、载玻片、培养皿。5.3试剂5.3.2甘蔗黄叶病毒单克隆抗体。5.3.3碱性磷酸酯酶标二抗。5.3.8标准样品：5.4操作步骤5.4.1样品制备5.4.2操作流程5.4.2.1封闭35.4.2.2第一次洗涤5.4.2.3第一次孵育将清洗后的膜转入含有1％脱脂奶粉的TBS-T缓冲液的培养皿中，同时在缓冲液中5.4.2.4第二次洗涤同5.4.2.2。5.4.2.5第二次孵育5.4.2.6第三次洗涤同5.4.2.2。5.4.2.7显色和终止5.5检测结果的判定5.5.1判定依据5.5.2阴性5.5.3阳性46.1原理6.2仪器与设备6.2.4组织研磨仪。6.2.5水平电泳系统。6.2.6凝胶成像系统。6.3试剂6.3.5检测引物:6.3.8标准样品:同5.3.7。6.4操作步骤5表1每个测试样本反应混合液配制的组分25μL反应体系终浓度5×反应缓存液5.00μL1×0.50μL0.25μL////6.4.3扩增产物的电泳检测6.4.4凝胶成像分析6.5

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