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22TechnicalcodeofpracticeonisolationandpurificationofcommonpathogenicbacteriaofintestinalbacteriaforfreshwaterfishI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、王秋举、郭志欣、蔺丽丽、刘洪健、赵云龙、吴振1淡水鱼肠道常见致病菌分离与纯化技术规程GB4789.28食品微生物学检验培养基和试剂的质量SN/T2632—2010微生物菌种常3.1注：淡水鱼肠道中常见的致病菌有：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、嗜水气单胞菌（Aeromonas和温和气单胞菌（Aeromonassobria）等。2123456.2制备平板将LB培养基置于锥形瓶中经高压蒸汽灭菌(121℃灭菌206.2.2.1一只手拿锥形瓶，靠近酒精灯火焰，另一只手拔出棉塞；使锥形瓶瓶口迅速通过火焰，此步6.2.2.2将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，轻轻倒入厚度为3mm～5mmLB培养基，将培养6.2.2.3整个倒制平板过程均在超净工作台中3制备悬液（见7.3）接种（见7.4）培养（见7.5）纯化（见7.6）检验纯度（见7.7）保种（见7.8）记录（见8）7.2取样后，打开腹腔，再用75%酒精棉球7.3制备悬液7.3.1用约2倍肠道内容物体积的无菌生理盐水将肠7.3.2将7.3.1的细菌悬液在无菌条件下涂布在倍数的稀释菌液。建议稀释倍数为：10-3、10-47,4接种培养基上，至液体全部被培养基吸收,每个浓度的菌液做4在培养皿上盖表面标注样品名称、日期和采样地等信息。置于恒温培养箱中28℃~37℃倒7.6纯化在无菌条件下，采用接种环挑取同一培养皿中不同颜色和不同形态的单个重复7.6.1操作2～3次。待培养基上均匀的长出颜色和形态相同的单个菌落时便可以进行细采用无菌的接种环将挑取的单个菌落接种于装有无菌的LB液体培品名称、日期和采样地等信息，然后将试管置于恒温振荡器中，在温度2

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