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1/1abo基因相关多态性位点在abo血型不合hsct移植后嵌合体定量中的研究ABO基因相关多态性位点在ABO血型不合HSCT移植后嵌合体定量分析中的研究博士研究生刘峰指导老师胡丽华教授中文摘要第一部分ABO常见等位基因相关NPs的模板筛选目的：

筛选出携带5个ABO等位基因相关的NPs（261,467,802,803,1061）的正常及突变纯合子和/或杂合子，为后续嵌合体分析方法的建立及方法学评价提供合适的研究模板。

方法：

收集76例体检者血样，用抗-A、抗-B、抗A，B、抗A1、抗H和ABO反定红细胞进行ABO血型鉴定，要求正反定型一致，非孟买型，其中A18人，B27人，O18人，AB13人；抽提全血基因组DNA，设计5个NPs相应的引物及PCR-SSP扩增体系进行分析。

结果：

筛选到的5个NPs按血型分布如下：

A（261杂合子、467正常纯合子）有7例，A（261杂合子、467杂合子、1061正常纯合子）有8例，A（261正常纯合子、467杂合子、1061正常纯合子）有3例；B（261杂合子、803杂合子）有23例，B（803突变纯合子）有4例，O（均为261突变纯合子）18例，AB（467杂合子、803杂合子、1061正常纯合子）有10例，AB（467正常纯合子、803杂合子）有3例,未能筛选出467突变纯合子，802杂合子或突变纯合子，1061杂合子或突变纯合子。

结论：

直接在表型确定的DNA标本进行NPs筛选而不需要进行基因分型是可行的，但受到筛选群体量及种群的ABO基因频率限制，我们无法获得467正常位点对应的阴性模板，802及803正常及突变位点对应的阳性模板或阴性模板，因此这些位点均不能进入ABO基因相关NPsSYBRgreenI实时荧光定量PCR方法的研究及方法学评价。

关键词：

ABO等位基因核酸多态性位点序列特异性引物PCR第二部分建立ABO基因相关NPsSYBRgreenI实时荧光定量PCR方法目的：

建立检测261突变位点、261正常位点、467突变位点，803突变及正常位点的SYBRgreenI实时荧光定量PCR反应体系。

方法：

以研究第一部分筛选到的261,467,803位点的模板为研究对象，分别建立依赖相应的正常及突变位点SYBRgreenI实时荧光定量PCR，包括白蛋白基因内参体系的建立，PCR反应体系的建立和设计最优的人为增加错配扩增引物。

对各位点的扩增产物进行融解曲线分析及电泳分析，各位点阴阳模板的△Ct值综合确定最优的人为增加错配扩增引物，再对其扩增产物通过测序分析来证实特异性。

结果：

建立的白蛋白基因内参体系标准曲线的回归方程为：

y=-3.04x+33.95,相关系数为1.00，此外在500

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