高中生物 2 微生物的培养与应用学案 新人教版选修1

【目标导航】1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。2.了解消毒和灭菌常用

的方法及二者的区别。3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。

知识清单•

一、培养基与无菌技术

1.培养基

⑴概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的

⑵成分：一般含有、、、，此外还要满足微生物对

（即生长因子）、以及氧气的需求。

拓展深化

营养物质定义作用主要来源

无机化合物：C02、NaH机3

构成生物体的一

能提供所需______的物等；有机化合物：糖类、

碳源和一些________,有些

质脂肪酸、花生粉饼、石

是异养生物的_

油等

无机化合物：岫、NL、

能提供所需——的物合成蛋白质、核酸以及镂盐、硝酸盐等；有机

氮源

质含氮的代谢产物化合物：尿素、牛肉膏、

蛋白膝等

特殊营养物

生长必不可少的维生素、氨基酸、碱基

质（生长因酶和核酸的组成成分

等

子）

在生物体内含量很高，不仅是优良的溶剂，而

水在低等生物体内含量更且可维持生物大分子结

高构的稳定

细胞内的组成成分，生

为微生物提供除碳、氮理调节物质，某些化能

无机盐

以外的各种重要元素自养菌的能源，酶的激

活剂

（3）培养基的种类

划分培养基种

特点用途

标准类

物理_培加凝固剂，如琼脂—

性质养基

半固体培

观察微生物的运动、分类、鉴定

养基

______培微生物一、—、活菌计数、

养基保藏菌种

—培含化学成分不明确的

工业生产

化学养基天然物质

成分—培培养基成分明确（用化学成分已知

分类、鉴定

养基的化学物质配成）

培养基中加入某种化学物质，以培养、；1;特定微生物（如培养酵母菌和霉菌，可

______培

—不需要的微生物的生长,—在培养基中加入青霉素或链霉素；培养固氮菌可用

养基

用所需要的微生物的生长无氮培养基，如阿须贝培养基）

途―不同种类的微生物，如可用伊红一美蓝培养基

,______培根据微生物的代谢特点,在培养基

鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落

养基中加入某种指示剂或化学药品

呈深紫色，并带有金属光泽）

论E意病毒目前不能利用人工培养基来培养，需・接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病

毒的是活鸡胚。

2.无菌技术

（1）概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。

注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是,。

（2）无菌技术的具体内容

①对实验操作的、操作者的进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的、接种用具和培养基等进行。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在进行。

④实验操作时应避免已_______处理的材料用具与周围的物品相接触。

（3）消毒和灭菌的概念

①消毒：消毒是指使用的物理或化学方法杀死物体表面或内部的（不包括

芽也和抱子）。

②灭菌：灭菌是指使用的理化因素杀死物体内外,包括o

③消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是。

拓展深化某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽胞。每个

细菌细胞仅形成一个芽抱，故它无繁殖功能。芽抱有极强的抗热、抗辐射.、抗化学药物和抗静水压的能力。

芽抱的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。

泡子是微生物产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利

环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。

(4)消毒与灭菌的常用方法

方法条件作用对象

100℃,煮沸5〜6min杀死微生物的营养细胞和一部分芽狗

—

—70〜75℃煮30min或80℃煮15min不耐高温的液体

消

毒70%的酒精对双手消毒

—50%的石炭酸、来苏水对空气消毒

一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒

紫外

紫外线照射30min物体表面或空气中的微生物

线法

对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以

在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧

—对试管口、瓶口灭菌

在干热灭菌箱内，160〜170℃条件下，加热耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属

—1〜2h用具等

灭

在高压蒸汽灭菌锅内，121℃,100kPa,灭

菌—

菌15〜30min

—30W照射30min小型接种室、接种箱等

二、9g验操作

(一)配制培养基

1.配制原则

(1)(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养

基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。

(2),注意各种营养物质的浓度和比例。

(3),各种微生物适宜生长的pH范围不同，细菌6.5〜7.5、放线菌7.5~8.5、真菌5.。〜

6.Oo

注意①不同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。

②营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各

营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。例

如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为4：1时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当

碳源与氮源的比为3：1时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。

2.配制方法（以制备牛肉膏蛋白豚固体培养基为例）

（1）培养异养菌的牛肉膏蛋白陈固体培养基的营养构成

培养基组分提供的主要营养物质

牛肉膏5.0g碳源、磷酸盐和维生素

蛋白陈10.0g氮源和维生素

NaCl5.0g无机盐

HzO定容至1000mL氢元素、氧元素

⑵实验流程

J_：0.5g牛肉仔+lg蛋白陈+0.5gNaCl+2g琼脂

烧杯+100mL蒸储水

।|微火加热、不断搅拌

—＜溶化后加琼脂

I

熔化后，补水至100mL

培养J

基的11

配制JImol/L的NaOH、pH腌

———IpH为7.4-Z6

—：趁热分装到洁净锥形瓶中

加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水

I包扎：外包牛皮纸，且挂标签

（注入开水：与底架平齐

I

放待灭菌物品：竖放于灭菌桶中，不要太挤

加盖密封:排气软管插入排气槽，

|同时旋紧相对的两个螺栓

排冷空气:打开排气阀，排除锅内冷空气

I

高压灭菌：关上排气阀，压力升至100kPa,

温度为121七潍持15~30min

〔灭菌物品:断电后，压力降至0时,打开排气阀,

旋松螺栓，取出灭菌物品

_____:待培养基冷却至50七左右时，在酒精灯火焰

旁进行倒平板

提醒合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温1〜2d,若无菌落生长

则说明制备的培养基是合格的。

（二）纯化大肠杆菌

纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大

肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。

1.微生物接种的方法

微生物接种的方法最常用的是和两种。

（1）通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到

培养基的表面。

①将_______放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红。

②在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的O

③将试管口通过酒精灯的。

④将己冷却的接种环伸入菌液中，一环菌液。

⑤将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。

⑥将培养皿皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入,划三至五

条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。

⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、

四、五区域内划线。注意不要将的划线与相连。

⑧将,放入培养箱中培养。

(2)则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂

固体培养基的表面，进行培养。

①系列稀释操作

a.取盛有9mL水的6支试管灭菌，并按1(/〜10”的顺序编号。

b.用吸取1mL培养的菌液，注入10,倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹

吸三次，使菌液与水充分混匀。

c.从10,倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍液。依此

类推。

②涂布平板操作

a.将浸在盛有酒精的烧杯中。

b.取不超过0.1mL的，滴加到培养基表面。

c.将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8〜10s。

d.用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

2.注意事项

(1)平板划线法

①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行，划线操作结束时，仍需灼

烧。

②从第二次以后的划线操作总是从开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐

减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

(2)稀释涂布平板法

稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“"，应特别注意：

①酒精灯与培养皿的距离要合适。

②吸管头不要接触任何其他物体。

③吸管要在酒精灯火焰周围使用。

3.微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价

(1)培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。

(2)在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。

（3）培养12h和24h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越

多，菌落体积越大，而菌落的位置不动，只是菌落数增多。

（4）频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培

养基培养后，保存在4c冰箱中，第3〜6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产

生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在-20℃的冷冻箱中。

4.菌种的保存

为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用法;

对于需要长期保存的菌种，可以采用法。将菌种放在低温环境中保藏的目的是

但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种个月后需重

新接种。

对点训练•]

知识点一培养基与无菌技术

1.不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO?为唯一碳源的自养微生物营养的描

述中，不正确的是（）

A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素

B.碳源物质也是该微生物的能源物质

C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质

D.水是该微生物的营养要素之一

2.下列说法正确的是（）

A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基

C.除水以外的无机物只能提供无机盐

D..无机氮源不可能提供能量

知识点二大肠杆菌的纯化培养

3.有关平板划线操作的叙述，不正确的是（）

A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物

B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种

C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源

于菌液

D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

4.下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是（）

A.培养基中蛋白陈、牛肉膏溶化后，直接补充蒸镭水至100mL

B.培养基配制完毕可直接使用

C.加压至100kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气

D.将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种

达标测试•]

一、选择题

1.关于制备牛肉膏蛋白膝固体培养基，叙述错误的是（）

A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C.待培养基冷却至50C左右时进行倒平板

D.待平板冷却凝固约5〜10min后，将平板倒过来放置

2.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做

法错误的是（）

A.对接种环进行灼烧处理

B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉

C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉

D.接种后双手必须经肥皂洗净，再用75%的酒精棉球擦拭

3.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是（）

A.实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒

B.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

C.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染

D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境

4.下列叙述错误的是（）

A.右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近

B.倒平板整个过程应在火焰旁进行

C.打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖

D.为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置

5.有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是（）

A.用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目

的是使菌液与水充分混匀

B.移液管需经过灭菌

C.试管口与移液管应在离火焰1〜2cm处

D.涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀

6.以下关于制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的操作顺序正确的是（）

A.计算一称量一倒平板一溶化一灭菌

B.计算一称量一溶化一倒平板一灭菌

C.计算一称量一溶化一灭菌一倒平板

D.计算一称量一灭菌一溶化一倒平板

7.为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()

A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法

B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上

C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异

D.对于需要长期保存的菌种，可以采用低温一4℃保藏的方法

8.有关平板划线操作的叙述，正确的是()

A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞

C.把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可

D.最后将平板倒置，放入培养箱中培养

二、简答题

9.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行

清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下

列问题：

(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白陈固体培养基所需的

原料：、、、、其中提供氮源的是提供

碳源的主要物质是。

(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，故配制培养基时各成分要有合适的。在烧

杯中加入琼脂后要不停地_防止_

(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入

一中灭菌，压力_kPa,温度_时间灭菌完毕拔掉电源，待锅

内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管。

(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入,把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻

底排出后将锅密闭。

(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯(“内”或“外”)焰灭菌，并

且待接种环后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管放入℃冰箱中保藏。

10.下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白陈培养基的配方。请回答：

试剂用量

牛肉膏5.0g

蛋白陈10.0g

NaCl5.0g

琼脂20.0g

水1000mL

（1）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机.盐。上述培养基配方中能充当

碳源的成分是和-培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行

处理。

（2）分离纯化微生物最常使用的接种方法是和两种。在接种过程中，接

种针或涂布器的灭菌方法是。

（3）假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？

第5课时微生物的实验室培养

知识清单

一、1.（1）营养物质生长繁殖营养基质（2）水无机盐碳源氮源特殊营养物质pH

拓展深化

碳元素细胞物质代谢产物能源物质氮元素微量有机物

（3）液体固体工业生产分离鉴定天然合成选择抑制促进分离鉴别鉴别

2.（1）防止杂菌污染保证培养的纯度（2）①空间衣着和手②器皿灭菌③酒精灯火焰附近

④灭菌（3）①较温和部分微生物②强烈所有的微生物芽他和狗子③芽抱和徇子是否存活（4）

煮沸法巴氏消毒法化学药剂法灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌紫外线灭菌

二、（一）1.（1）目的要明确（2）营养要协调（3）pH要适宜2.（2）计算称量溶化调节pH分

装灭菌倒平板

（二）1.平板划线法稀释涂布平板法（1）平板划线法

①接种环②棉塞③火焰④沾取⑥左手右手平板内⑦最后一区第一区⑧平板倒置

（2）稀释涂布平板法①移液管②涂布器菌液

2.（1）①火焰灼烧灭菌接种环②上一次划线末端（2）无菌

4.临时保藏甘油管藏降低微生物的新陈代谢速率3〜6

对点训练

1.B［对于CO?来说，它为无机物，只能做碳源而不能作为能源物质。］

规律链接微生物代谢类型与营养的关系：

营养型微生物碳源氮源生长因子举例

自养型微生物C02、Nairn加3、钱盐、硝酸盐等i般不需要硝化细菌

异养型微生物糖类、脂肪酸等钱盐、硝酸盐、蛋白质等有些种类需要乳酸菌

2.A［根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加

入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH,HCO：“既可以是碳源，也可

以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NHs可以为硝化细菌提供能量。］

3.C［在第二区域内划线时，接种环上的菌种来源于第一次划线的末端。］

规律链接（1）无菌技术是微生物培养中的关键环节。掌握无菌技术操作的方法及所适用的条件。时

刻建立“有菌”观念，注意操作中的合理灭菌，以杜绝或防止杂菌污染。

（2）平板划线法和稀释涂布平板法都要求最终形成标准菌落。因此，划线或稀释要充分，如果培养基

上长出的菌落相互重叠，则说明划线或稀释不充分，应该重新操作。

4.C［培养基的配制应该先加水，后加热溶化，否则培养基会被烧焦；培养基配制完毕要经过灭菌

后才能使用；在高压蒸汽灭菌以前，如果高压蒸汽灭菌锅内的冷空气没有排尽，当压力上升到100kPa时,

锅内的温度就不会上升到应有的高度，导致灭菌不彻底；接种时，接种环放到酒精灯火焰上灼烧灭菌是应

该的，但不能立即伸入菌种试管内，否则会将菌种烫死。］

达标测试

1.A［制备牛肉膏蛋白陈固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉

膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50℃,用手触摸

锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时，进行倒平板。平板冷却5〜10min后还需倒置。］

2.C［金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接种后双手用肥皂洗

净，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也可以杀灭细菌，防止污染环境；

高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，

因为此菌的耐高温能力很强，会污染环境。］

3.B［对接种环等金属用具进行灼烧灭菌，应放在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰处。］

4.C5.D6.C

7.D［对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3mL甘油瓶中加入1ml.甘油后灭菌，

将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在一20℃的冷冻箱中保存。］

8.I）［平板划线操作时要时刻注意两个问题：一是防止杂菌污染；二是要尽可能地将菌种分离。］

9.⑴牛肉膏蛋白陈水无机盐琼脂蛋白陈牛肉膏（2）比例搅拌琼脂糊底引起烧杯

破裂（3）高压蒸汽灭菌锅100121c15-30min废弃（4）适量水（5）外冷却4

10.（1）牛肉膏蛋白膝灭菌

（2）平板划线法稀释涂布平板法蘸取酒精；引燃灭菌（3）菌液浓度过高；培养过程中被杂菌污染;

利用接种针划线时，划下一个区域前没有对接种针进行灭菌处理

解析牛肉膏和蛋白腺都是从天然物质中提取出来的，都含有丰富的有机物，可以为微生物提供碳源

和氮源。平板划线法和稀释涂布平板法都能使菌体分散开，但如果操作不当，会使分离效果不理想。

第6课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数

【目标导航】1.研究培养基对微生物的选择作用。2.进行微生物数量的测定。

知识清单•

一、研究思路

1.筛选菌株

(1)实验室中微生物筛选的原理

人为提供有利于________________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或

其他微生物生长。

(2)选择培养基

在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时或其他种类微生物生长

的培养基，称做选择培养基。

(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基

①在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是,提供氮源的是,琼脂的

作用是凝固剂。

②该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是才能在该培养

基上生长。

③土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成,将尿素分解的反应式是

细菌能忍受93℃左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明，在寻找目的

菌株时，要根据。

2.统计菌落数目的方法

(1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法)

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的

,通过统计平板上的,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作

第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择—

稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，

放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平

板上，培养并计算出。

第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差

太远，意味着操作有误，需重新实验。

c

③计算公式：每克样品中的菌株数=7><M,其中C代表,V代表

_________________________________(mL),M代表。

(2)显微镜直接计数法

①原理：此法利用特定的或.，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物

的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1mm，和高0.1mm

的计数室，在1mm，的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小

格，计数室由个小格组成。

②操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4~5个中格中的细菌数，

并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。

③计数公式：每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数。

(3)设置重复和对照

①设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布个平板，才能增强实验的说服

力与准确性。

②设置对照：实验中应设置对照，主要目的是对实验结果的影响，提高实

验结果的可信度。如对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置_______培养基，观察选择

培养基是否具有作用。

二、实验设计

实验步骤

1.土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3cm左右，迅速取土壤并装入

密封或事先准备好的中。

2.制备培养基：①制备培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为.，

用来判断选择培养基是否具有。

②放宽稀释范围，如稀释倍数为IO,〜10,范围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要_____个选择培

养基、_______个牛肉膏蛋白陈培养基，因此需要15个选择培养基和5个牛肉膏蛋白腺培养基。

③两种培养基应各有一个作为对照，此外还需准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管。

3.样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水

的锥形瓶中(锥形瓶体积为250mL),充分摇匀，吸取上清液1mL,转移至盛有mL生理盐水的无

菌大试管依次等比稀释至10,稀释度，并按照由10,〜10,稀释度的顺序分别吸取mL进行平板涂布操

作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。

1mL1mL1mLImL1mL

回一向

国□U口U

9mL无菌水

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说明：图中的1、2、3平板是4为作对照，判断选择培养基是

否具筛选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白陈培养基，验证培养

基中是否。

4.将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。

5.挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应。

6.细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在_______的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行

重复计数，然后求出____________,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。同时仔细观察

所分离到的菌落，并记录菌落特征。

7.统计表格

\«落隆起颜色

种小、形状大小...............

程度

1

2

3

注：一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），表现出

的菌落特征。

三、操作提示

1.取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要______。

2.应在旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入中，塞好棉塞。

3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_____旁操作.

4.实验时要对做好标记。注明等。

5.为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_____o

四、结果分析与评价

内容结论分析

对照的培养皿中_______菌落生长一未被杂菌污染

有无杂菌污染的

培养物中菌落数_______-被杂菌污染

判断

菌落形态多样，菌落数偏高一培养物中混入

选择培养基的筛牛肉膏蛋白腺培养基的菌落数目_______选择培养基的数目f选择培养基具

选作用筛选作用，己筛选出一些菌落

得到2个或2个以上菌落数目在_______的平板一操作成功，能进行菌落的

样品的稀释操作

计数

若选取同一种土样，统计结果应.；如果结果相差太远，说明实验操

重复组的结果

作过程中出现操作失误，需要找出产生差异的原因

五、课题延伸

在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱性

增强，升高。因此，我们可以通过检测培养基___________来判断该化学反应是否发生。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将

,这样，我们就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。

对点训练•]

知识点一研究思路

(2)按物理性质划分该培养基属于.一培养基，理由是培养基中含有一—；该类培

养基常用于微生物的等。

(3)由于,

所以该培养基只能用于能够合成的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中

筛选出________的细菌。

(4)在微生物学中，将_________________________________________________________

的培养基，称作选择培养基。

2.广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的C植物，单位面积产量很高，种植面积日益

扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗一

榨汁(蔗糖)一酵母发酵一蒸储一成品(燃料酒精)。

(1)具有耐高糖和耐酸特性的醉母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以

得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：

步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。

步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意和，加琼脂

后灭菌，制成固体平板。

步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。

步骤4：根据,筛选出突变

菌。

（2）上述步骤2、3和4的依据分别是_____________________________________________

知识点二实验设计

3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为IO，'的培养基中，得到以下几

种统计结果，正确的是（）

A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230

B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260,取平均值238

C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163

D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和250,取平均值233

4.在本实验操作中对使用的平板和试管要进行标记，以下说法正确的是（）

A.对培养皿仅需注明培养基的种类即可

B.一般在使用之后进行标记

C.由于试管用的较多，只需对试管进行标记即可

D.标记的目的主要是为了防止实验中平板、试管等的混淆

达标测试•]

一、选择题

1.在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌

的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生

物群体中分离出（）

A.乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌

B.固氮细菌、大肠杆菌、放线菌

C.固氮细菌、霉菌、放线菌

D.固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌

2.请选出下列正确的操作步骤（）

①土壤取样②称取10g土壤，取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL土壤溶液进

行平板涂布④依次稀释至10'、十、『3、IO"、枝、1011。7稀释度

A.①一②f③一④

B.①f③f②f④

C.①一②f④f③

D.①一④f②-»③

3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（）

A.筛选出能分解尿素的细菌

B.对分离的菌种作进一步鉴定

C.作细菌的营养成分

D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素

4.下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解，不正确的是（）

A.防止杂菌污染

B.消灭全部微生物

C.稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作

D.灭菌必须在接种前进行

5.下列不属于菌种记数方法的是（）

A.平板划线法B.稀释涂布平板法

C.显微镜检法D.滤膜法

6.下列有关配制培养基的叙述中，正确的是（）

A.制作固体培养基必须加入琼脂

B.加入青霉素可得到乳酸菌

C.培养自生固氮菌不需要氮源

D.发酵工程一般用固体培养基

7.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个

平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是（）

A.菌落数最多的平板

B.菌落数量最少的平板

C.菌落数量适中的平板

D.取若干个平板菌落数量的平均值

8.土壤中分解尿素的微生物所需氮源为（）

A.硝酸B.氨C.尿素D.蛋白陈

二、简答题

9.在现代农业中，常在饲料中加入一定量的尿素去饲养牛等牲畜•因其有特殊的器官一一瘤胃，在

瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物以尿素作唯一氮源。某一同学设计了如下实验，对能分解尿素

的细菌进行分离和计数。

I.取样：到屠宰场，在刚宰杀的牛的瘤胃中取样，将样品装入事先准备好的信封中密封。

【1.制备培养基：制备牛肉膏蛋白陈培养基和选择培养基。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白陈

培养基上生长的菌落数应明显多于选择培养基上的数目。由于初次实验，选择了一个较宽的稀释范围，并

且每个稀释度下需要3