多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的原理它是基于双抗夹心法的化学发光检测方法，在固相基质上包被12种肿瘤标志物的抗体，捕获被检者血清中对应的肿瘤标志物，结合其次抗体〔标有示踪标记物〕，然后催化化学反响产生光信号，用特地的芯片阅读仪读取光信号，对肿瘤标志物进展定量检测。多肿瘤标志物蛋白芯片的应用范围临床应用反映手术是否铲除，有无复发和转移等。筛查应用肿瘤高危人群的定期筛查，高危人群包括：45岁以上人群；各慢性炎症和慢性疾病患者、有肿瘤家族史者、肿瘤高发区居民等。争论应用肿瘤分子流行病学调查及肿瘤标志物生物学争论。多肿瘤标志物的临床意义肿瘤标志物是指肿瘤细胞分泌或脱落到体液或组织中的物质而产生并进入到体液或组织中的物质。目前临床上常用的肿瘤标志物大多是肿瘤相关抗原。这些肿瘤标志物并非肿瘤细胞所特有，而是肿瘤细胞的表达量明显增加，与正常细胞存在量的差异。〔广谱标志物〕，因此根本上不行以定位。同一种肿瘤可以有几种不同的肿瘤标志物，不同肿瘤可能有一样的肿瘤标志物。如CA125不仅是卵巢癌相关抗原，也是其他肿瘤〔肺癌、肝癌、胰腺癌、胃肠道癌等〕的相关抗原。瘤的消退、疗效及预后复发。12种肿瘤标志物集成在一张芯片上12次试验的操作一次完成。一次检测供给12种肿瘤标志物的信息，使医生可以更好的从相对全方位的信息角度做出准确推断。肿瘤标志物癌胚抗原〔Carcinoembryonicantigen，CEA〕甲胎蛋白〔alpha-fetoprotein，AFP〕参考值<5μg/L<20μg/L临床意义125〔Cancerantigen125，CA125〕<35kU/L点击15-3〔Cancerantigen15-3，CA15-3〕<35kU/L点击19-9〔Carbohydrateantigen19-9，CA19-9〕<35kU/L点击242〔Carbohydrateantigen242，CA242〕<20kU/L点击前列腺特异性抗原〔Prostate前列腺特异性抗原〔Prostatespecificantigen，PSA〕和游离型前列腺特异性抗原〔Free-PSA〕〔neuron-specificenolase，NSE〕PSA<5μg/Lf-PSA<1μg/L<13μg/L点击点击人绒毛膜促性腺激素〔humanchorionicgonagotropin，hCG、β-HCG〕β-HCG<3μg/L点击〔HGH〕铁蛋白〔Ferritin，Fe〕<7.5μg/L男性:<322μg/L;女性219μg/L点击点击如何合理应用肿瘤标志物是一些良性病变也能消灭程度不同的阳性反响阳性率最富有成效的方法与措施。一、影响肿瘤标志物测定的因素到目前为止还未觉察有抱负的具有100%灵敏度和100%特异性的肿瘤标志物，由于肿瘤的问题。1、引起假阳性的因素：良性疾病：炎症性疾病一些肿瘤标志物表达增加。肝脏良性疾病时AFP、CA19-9、CEA及肾功能衰竭时CA15-3、CA19-9、CEA和PSA水平均会上升。生理变化：妊娠时AFP、CA125、HGH和月经时CA125也会上升。肿瘤手术/放疗/化疗过程中：由于肿瘤组织受到破坏或肿瘤坏死时某些肿瘤标志物产生增加，从而影响肿瘤标志物的测定，造成假阳性。样本中的免疫球蛋白可通过与测定中所使用的特异性抗体发生反响而影响测定结果。如自身免疫疾病患者常有可与抗体反响的类风湿因子〔RF〕及针对动物免疫球蛋白的嗜异性抗体均会引起假阳性反响，表现为全部指标或除PSA、f-PSA外其他指标全部阳性。2、引起假阴性的因素：产生肿瘤标志物的肿瘤细胞数目少。细胞或细胞外表被封闭。机体体液中一些抗体与肿瘤标志物〔肿瘤抗原〕形成免疫复合物。肿瘤组织本身血循环差，所产生的肿瘤标志物不能分泌到外周血中。3、血标本的采集、储存不当也会影响肿瘤标志物的测定结果〔25℃左右137152023r/m5300μl〔100μl〕。20230r/min3分钟以上，除去上层油脂后才可检测。1.52.0ml〔4℃冰箱保存；假设一周内不能检测则放置在-20℃贮存，冻藏血清溶化后，混合均匀即可检测，但不行以反复冻融。避开微生物污染。二、肿瘤标志物测定意义及周期1、动态记录肿瘤标志物的浓度变化，随着时间的推移浓度值渐渐上升，临床参考价值更1-2次。2、肿瘤患者定期测定肿瘤标志物：治疗前应测定每个患者肿瘤标志物的原始值。1-2年：1次/3-5年：1-2次/6年：1次/年。每次转变治疗方法前、肿瘤标志物浓度上升或疑心复发和转移时，均应准时测定肿瘤标志物的浓度。三、蛋白芯片检测消灭阳性时应考虑：1、假设是门诊患者：此结果可以作为医生临床诊断的参考依据，建议结合其他检查进展综合推断。2、假设为普查体检人群：建议2-6个月后再检测一次，如两次检测某些指标均高于参考值，在则可考虑定期随访。通常，肿瘤标志物上升意味着各种炎症疾病、慢性疾病及肿瘤常常超出临界参考值数倍，尽管良性疾病亦偶见此状况。3、假设为肿瘤治疗后患者：应高度疑心有否复发、转移等，应进展相应的检查和治疗。四、蛋白芯片检测消灭阳性时应依据被检者状况综合推断者中消灭某些指标阳性，应依据被检者状况综合推断。1、参考值确实定是承受该试剂盒对大量正常人群的检测结果统计，以95%的正常人群小临界值之下。2、血清〔溶血、脂血等〕的因素，被检者身体状况的波动〔如炎症〕等等干扰因素，有2期随访，2个月后复检，如维持原值或有下降，认为阴性，假设持续上升应高度警觉。CA12CA15-HCG等指标在男性患者中也可有不同程度的提高。PSA原来始终认为是前列腺癌完全特异性指标，但是争论200－300ng/mlPSA得到的结果与我们是全都的。4、Ferritin是一个非特异性指标。在正常人群中范围大，所以在Ferritin单独消灭阳性时无特别预警意义，只有结合其他指标才能做出推断。5、假设是有病症就诊的患者，检测指标消灭阳性，而且往往会消灭强阳性，则增加了恶性肿瘤的可能性。6、对于随访中的肿瘤治疗后病人，消灭原肿瘤指标的反弹或消灭的阳性指标，则应严密监控，乐观查找原发灶或转移灶。第五章临床报告[医生手册]首页通过对上海华山医院、上海曙光医院、上海华医院、上海长征医院、上海市第一人民医院、上海长海医院、二院等医院约6000/+假阳性>80/批间差：<15%；批内差<10%。个案分析个案一：〔乳腺癌早期觉察病例〕CA15352.78ng/ml61.84ng/ml。蛋白芯片检测结果如图：CA15-3--->CA19-9--->报告显示如下：*工程数据参考值浓度单位工程数据参考值浓度单位CA19-952.78<35.00U/mlAFP<1.00<20.00ng/mlNSE<1.00<13.00ng/mlFree-PSA<0.10<1.00ng/mlCEA<0.50<5.00ng/mlPSA<0.06<5.00ng/mlCA2429.13<20.00U/mlCA12512.71<35.00U/mlFerritin205.48*ng/mlHGH1.64<7.50ng/mlBeta-HCG<0.50<3.00ng/mlCA15-361.84<35.00U/ml*男性<322ng/ml，女性<219ng/mlCTCT0.5cm，0.1cm，隐局限性癌变，故进展了左侧乳房乳腺改进根治术。术后患者恢复良好。个案二：81NM4311。用多肿瘤标志物蛋白芯片2。指标1浓度放免结果(阴性)：参考ＣＡ７２４3<3.8U/mlＣＡ２４２16.78<20U/mlＣＥＡ4.57<5ng/ml表2 芯片结果(六个指标阳性)：指标浓度参考ＣＡ１９９65.18<35U/mlＣＡ２４２23.21<20U/mlβ－ＨＣＧ21.63<3ng/mlＡＦＰＡＦＰＣＡ１２５ＣＡ１５３25.06165.8691.42<20ng/ml<35U/ml<35U/ml个案三：45，10地医院就诊，胸片显示右肺下叶软组织阴影，用青霉素抗炎治疗二周，咳嗽少有好转，复查胸片1后低热，无胸痛，痰血、盗汗等病症。4-5cmCT、B蛋白芯片检测结果如图：<---CA125:146.84u/ml<---Beta-HCG:>60ng/ml12月进展手术切除。术后：病理报告右下肺腺鳞癌〔低分化肿瘤细胞HCG++,CA125+

免疫组化多肿瘤标志物蛋白芯片检测采血要求空腹，不饮水。采静脉血２ｍｌ，无需加抗凝剂。离心2023rpm×5min，吸出血清转移至另一干净的EP管内，待测。溶血、黄疸血的样品会影响结果，不宜检测。脂血的样品可以离心10000rpm×5min，去除上层油脂后，取下层血清检测。2-820℃保存。冻融之后，应马上检测，不宜反复冻融。避开微生物污染。当样本量较多时，严格按编号登记样本，以免混淆。大量的临床数据显示，该系统的假阳性率为1-10%，假阴性率为5%-20%问： 多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统适用于哪些人群？答： 恶性肿瘤疑诊患者的临床早期关心检查如临床病症可疑、有肿瘤家族史及肿瘤高发地区人群的检查。测，高通量，且早期觉察对癌症筛检极具价值，同时可降低普查费用，提高普查的工作效率。发、转移的随访。问： 消灭溶血、脂血或黄疸血，是否会影响试验结果？答： 会。由于血清中某些成分的特别增高会转变抗原和抗体反响的体一般不宜进展检测。问： 此检测系统对样品质量和采血时间有什么要求？答： 血不宜；血清在2-8摄氏度保存不超过7天为宜。2-3后再做检测。当此检测系统检测出某个肿瘤标志物浓度高于参考临界值，被问：者该怎么办？答：需要视被测者的个人病理状况而定。考临界值，建议被测者应当一个月后再〔用本检测系统或仅对相应标志物〕进展复查，或询问医生是否需要做相关器官的身体检查。浓度高于参考临界值，应当引起被测者的高度重视，建议病人马上B,CT,核磁共振等，使医生可快速对病情进展诊断。于参考临界值，应当疑心有肿瘤复发的可能性，建议病人做进一步的跟踪检测或用其它方法进展检测，以便医生更好确实诊。问： 志物蛋白芯片检测系统可检测哪些肿瘤标志物？答： 该检测系统可同时检测以下12种肿瘤标志物：CA15-3〔15-3〕,CA242〔242〕,CEA〔癌胚抗原神经元特异性烯醇化酶游离前列腺特异性抗原〕,β-HCG〔绒毛膜促性腺β〕,Ferritin〔铁蛋白〕,HGH〔人体生长激素〕。问： 多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统适用于哪些人群？答： 恶性肿瘤疑诊患者的临床早期关心检查如临床病症可疑、有肿瘤家族史及肿瘤高发地区人群的检查。测，高通量，且早期觉察对癌症筛检极具价值，同时可降低普查费用，提高普查的工作效率。发、转移的随访。问：多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的检测原理是什么？答： 多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统利用抗原与其抗体特异性结合的免疫学原理，在固相基质上结合多种肿瘤标志物的抗体，捕获被检者血清中的对应肿瘤标志物，并促成特定的化学反响产生光信号，通过对光信号强度的定量测定〔HD-2023A生物芯片检测仪〕来实现对各肿瘤标志物定量检测的目的。癌胚抗原〔CEA〕§参考值：0-5μg/L1965GoldFreedman首先从胎儿及结肠癌组织中觉察的。CEA22KD的多糖蛋白复合物，45％为蛋白质。CEA19号染色体。一般状况下，CEA是由胎儿胃肠道6CEA96%-97%CEA2.5μg/L20%-40%CEA>2.5μg/L，少数CEA>5.0μg/L。CEACEA的肿瘤大多位于空腔脏器，如胃肠道、呼吸道、泌尿道CEACEACEA特别增高，CEACEA60μg/L时，可见于结肠癌、直肠癌、胃癌和肺癌。CEACEA量会明显上升，大多显示为肿瘤浸润，其中约70％为转移性癌。一般来说，手术切除后6周，CEA水平恢复正常，否则提示有残存肿瘤，假设CEA5-6倍者均提示预后不良。连CEA含量，对肿瘤病情推断更具有意义。CEA定量可用于诊断胰腺或胆道癌；浆液性渗出液的CEACEACEA定量结合甲状腺降钙素测定，有助于甲状腺髓样癌的诊断和复发的估量。癌胚抗原〔CEA〕一度被认为是消化道癌肿尤其是结肠癌的特异性免疫学表现。但以后觉察某些良性疾患CEACEA常上升；各种原发癌〔特别是结肠、肺和乳房〕肝转移时，CEA水平较无肝转移者为高，近年争论觉察各种来源的肝转移性癌肿组织内均有大量CEA存在。⑵良性肝病也常有CEA上升，一般为2.5~5毫微克/毫升，罕有超过10毫微克/毫升者，在各种肝病中，以酒精性肝病时上升者最多，特别是伴有活动性肝细胞损害病例；胆道疾CEA也可上升。CEA上升的原理和临床意义。目前认为，正常肠粘膜和有炎症、癌肿的肠粘膜均能产生CEA。CEACEA即上升；如病人系肠癌伴肝转移，则一CEA产生增多，另一方面被癌肿损害的肝不能摄取、降解CEA，则血清CEA更加上升。因此，在某CEACEACEA明显上升，应疑及肝内转移可能。原发性小肠癌是少见的消化道肿瘤，临床表现与发生部位、生长方式等有关。甲胎蛋白〔AFP〕§参考值：0-25μg/L甲胎蛋白是1956年Bergstrandh和Czar1963年G.I.AbelevAFP主要是由胎盘层〔其次是卵黄囊〕合成，由胃肠道粘膜和肾脏合成较少。1964年Tatarinov觉察肝细胞癌患者血清中检测到AFPAFP是一种在电场中泳动于α-球蛋白区的单一多聚体肽链的糖蛋白，70KD4％，AFP44q11-12，与血清白蛋白、维生素D结合蛋白同属一大家族。近年来已觉察了AFP的异质体。妊娠妇女的血和尿中的AFP含量会持续增高，从12-15AFP3mg/ml，随后即渐渐降低，诞生后，AFP合成很快受抑制，其含量降至50μg/L，周岁末婴儿的浓度接近成人水平，一般安康成人血浆AFP浓度低25μg/L。AFP是原发性肝癌的最灵敏、最特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上，或含量有不断增含量变化的速率和程度与肿瘤组织分化程度凹凸有肯定相关性，AFP200μg/L。4周；②AFP由低浓度渐渐上升不降；③AFP200ng/ml8周。AFP的动态变化与病情有肯定的关系。AFP含量上升提示病情恶化，其动态变化是显示治疗效果的一项敏感指标。通常手术切除肝癌后二个月，AFP20ng/ml以下，假设降的不多或降而复升，提示切除不彻底或有复发可能。至关重要。假设此值订得偏高，虽可增加诊断的特异性，但可能造成过多病例漏诊；又假设此值订得偏低，虽可增加敏感性，但可能增加误诊。作为统一的诊断标准，制定此值应当慎重，值得探讨。1977年的肝癌诊断标准中确曾有一个单纯依靠AFP诊断肝癌的标准，其表述为AFP＞400μg/L4周，并能排解妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎源性肿瘤及转移性肝癌者，即可诊断为原发性肝癌。(>400ng/ml)AFP值偏低(<400ng/ml)。因此，依据AFP浓度难以鉴别良恶性肝病。AFP异质体测定的目的是推断AFP的来源，用于鉴别原发性肝癌、生殖细胞肿瘤、转移性肝癌以及良性肝病。AFP含量可以上升。某些非恶性肝脏病变，如病毒性肝炎、肝硬化，AFP水平亦可上升，故必需通过动态AFPALT酶活性的变化予以鉴别诊断。癌抗原CA125§参考值：0-35U/L1983Bast等从上皮性卵巢癌抗原检测出可被单克隆抗体OC125结合的一种糖蛋白--CA125200KD，加热至100CA125的活性破坏。正常人血清CA125中的〔RIA〕阳性临界值为35ku/L。女97.1%,23.1%，宫颈癌、子宫内7%～49%CA125CA125水平可有效推断病人的病情，本争论的目的在于明确子宫内膜癌病人术前CA125水平CA125>20U/mL和/387%。CA125>35U/mL时提示子宫外疾病，但是在确定病人是否需要分期的过程中，其敏感性较低。CA125始终被认为是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物。浆液性子宫内膜样癌、透亮细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者的CA125含量可明显上升。当卵巢癌复发时，在临床确诊前几个月便可呈现CA125CA125CA125测定和盆腔检查的结合可提高试95％的残存肿瘤患者的血清CA125浓度大于孕期起始3个月、行经期、子宫内膜异位、子宫纤维变性、急性输卵管炎、肝病、胸腹膜和心包感染等。在大量使用蛋白芯片检测以后，CA125作为肿瘤标志物的广谱性越来越突出。在肺癌、肝癌、消化道肿瘤CA125均有很高比例的表述，而且无性别的区分，可作为一个肿瘤筛查中的广谱指标。癌抗原CA15-3§参考值：0-28U/LCA15-3含量〔RIA法〕28kU/L。CA15-3明显上升，它也是监测乳腺癌患者术后复发的最正确指标，当CA15-3100kU/L时，可认为有转移性病变，其含量的变化与治疗结果亲热相关。与CA125相像，肺癌、胃肠癌、卵巢癌及CA15-3也可上升，应予以鉴别，特别要排解局部妊娠引起的含量上升。糖链抗原CA19-9§参考值：0-37U/LCA19-9是1979年Koprowski等用结肠癌细胞免疫小鼠，并与骨髓瘤杂交所得116NS19-9单克隆抗体。它是一种分子量为5000KDLea血型抗原物质与唾液酸Lexa的结合物。CA19-9为消化道癌相关抗原，是胰腺癌和结、直肠癌的标志物。血清CA19-9阳性的临界值为37KU/L。会下降；如再上升，则可表示复发。结直肠癌、胆囊癌、胆管癌、肝癌和胃癌的阳性率也会很高。假设同时检测CEA和AFP可进一步提高阳性检测率。蛋白芯片检测结果觉察，不但是消化道肿瘤，乳腺癌、卵巢CA19-9的上升。糖链抗原〔CA242〕§参考值：0-12U/LCA242也是一种唾液酸化的鞘糖脂类抗原，几乎总是和CA50CA19-9，9.09%，说明该项标志物检测不适用于鳞状细胞癌的检测。CA24220230u/L。7/8．前列腺特异性抗原〔PSA、f-PSA〕§参考值：0-4μg/L1971年，Hara等首先觉察PSA是由前列腺上皮细胞合成分泌至中，是精浆的主要成分之一；1979由Wang34KD，编码基因定位于清PSAPSAf-PSA。PSA在正常男性〔RIA法、ElA法〕2.5μg/L。PSA是前列腺癌的特异性标志物，也是目前少数器官特异性肿瘤标志物之一。前列腺癌是男性泌尿系统的PSA10μg/L90％-97％。最近的试验说明，在前列腺癌中f-PSA/t-PSA〔PSA〕比正常状况下要低。一般认为F/T〔f-PSA/t-PSA〕临界值0.200.20以下均需考虑前列腺癌的问题。PSA4-10ng/ml时，F/T比值可在良性和恶性前列腺疾DRE检查能够提高前列腺癌检测的特异性，而不降低其灵敏度。血清PSA90%PSA不能检出的痕量水平。假设术后血清PSA值上升，提示有残存肿瘤。放疗后疗效显著者，502个月内血清PSA降至正常。值<1.0ng/ml3年承受一次检查；假设PSA1.0~4.0ng/ml，则应每年检查一次。前列腺癌阳性率10年中呈稳定增加的趋势，尤其在PSA2.0~4.0ng/ml的人群中。争论者认为这些人是患前列腺癌的高危人群。最争论说明，在肝癌、肺癌等肿瘤中，PSA在基因水平就有高表达，提示PSA在前列腺肿瘤以外的其他肿瘤中也会有上升的可能，有待进一步调查。[留意]：采集病人的血清标本前，假设进展前列腺按摩，将导致血清PSA上升。神经原特异性烯醇化酶〔NSE〕§参考值：0-15μg/L33种免疫学性