(高清版)GBT 40348-2021 植物源产品中辣椒素类物质的测定 液相色谱-质谱质谱法

植物源产品中辣椒素类物质的测定液相色谱-质谱/质谱法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T40348—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。本文件起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、四川大学、甘肃中商食品质量检验检测有限公公司、甘肃省商业科技研究所有限公司。1GB/T40348—2021植物源产品中辣椒素类物质的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了植物源产品中辣椒素类物质含量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于辣椒及其制品中N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氢辣椒素含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。辣椒素类物质capsaicinoid在辣椒果实中产生辣味的N-香草基酰胺类生物碱物质的统称。注：其中辣椒素、二氢辣椒素两种物质的含量约占辣椒素类物质总量的90%,是影响辣度最[来源：GB/T21266—2007,3.3,有修改]4原理标法定量。5试剂或材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1.1无水硫酸钠(Na₂SO₄)。5.1.2甲酸(CHOOH):色谱纯。5.2标准品5.2.1N-壬酸香草酰胺标准品：纯度≥98%;分子式：C₁₇H₂₇NO₃;CAS号：2444-46-4。5.2.2辣椒素标准品：纯度≥99%;分子式：CigH₂₇NO₃2GB/T40348—20215.3.1单一标准储备液：分别准确称取N-壬酸香草酰胺、辣椒素、二氢辣椒素标准品适量(精确至0.1mg),用甲醇溶解并配制成质量浓度均为100mg/L的辣椒素类物质单一标准储备液，于4℃下避光保存备用，有效期为2个月。5.3.2混合标准溶液I:分别准确移取适量各辣椒素类物质单一标准储备液，用甲醇稀释配制成N-壬酸香草酰胺质量浓度为0.100mg/L,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为1.00mg/L的混合标准溶液I,现配现用。5.3.3混合标准溶液Ⅱ:分别准确移取适量各辣椒素类物质单一标准储备液，用甲醇稀释配制成N-壬酸香草酰胺质量浓度为0.100mg/L,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为10.0mg/L的混合标准溶5.3.4低浓度混合标准工作溶液：分别准确移取适量混合标准溶液I,用甲醇稀释配制成N-壬酸香草酰胺质量浓度为1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为15.0ng/mL、30.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、5.3.5高浓度混合标准工作溶液：分别准确移取适量混合标准溶液Ⅱ,用甲醇稀释配制成N-壬酸香草酰胺质量浓度为1.50ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度均为150ng/mL、300ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、0.22μm尼龙滤膜。温度可调20℃~80℃。6.5涡旋混匀器。6.6组织捣碎机。取鲜辣椒(辣椒酱或半固态辣椒制品)约1kg,用组织捣碎机制成匀浆，混匀，制备好的试样均分成取干辣椒(辣椒粉或固态辣椒制品)约250g,用电动粉碎机粉碎过425μm(40目)筛，制备好的试3GB/T40348—20217.3辣椒油等油状样品8试验步骤旋混匀，于60℃水浴下超声提取15min,然后在8000g下离心5min,将上清液转移至100mL容量液相色谱参考条件如下：时间/min0381148.2.2质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源(ESI源);b)扫描方式：正离子模式；c)其他质谱参考条件参见附录A。8.2.3定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物的色谱峰保留时间和标准工作溶液中对应峰的保留时间一致(相对误差在士2.5%以内),且样品谱图中待测物监测离子的相对丰度和浓度相当的标准品的相对丰度一致，允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的待测物。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差士25士308.2.4定量测定在相同实验条件下，依据样品中各辣椒素类物质的含量选择合适质量浓度范围的标准工作溶液由低到高浓度依次进样分析，以待测物的定量离子峰面积为纵坐标，溶液质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中各待测物的质量浓度在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样分析。在8.2.1和8.2.2条件下，各辣椒素类物质的参考保留时间参见附录A中表A.1,总离子流图及多反应监测图分别参见附录B中图B.1和图B.2～图B.4。8.3平行试验按8.1和8.2的规定对同一试样进行两次平行测定。9试验数据处理试样中待测物质含量按照式(1)计算：……(1)式中：w——试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);p——由标准工作曲线得到的待测物质质量浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);V——试样定容体积，单位为毫升(mL);f——试样溶液稀释倍数；计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。10精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。5GB/T40348—202111其他本方法测定N-壬酸香草酰胺、辣椒素和二氢辣椒素的检出限和定量限参见表3。表3三种辣椒素类物质的检出限和定量限单位为毫克每千克化合物名称检出限定量限鲜辣椒、辣椒酱及半固态辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固态辣椒制品及辣椒油等油状样品鲜辣椒、辣椒酱及半固态辣椒制品干辣椒、辣椒粉、固态辣椒制品及辣椒油等油状样品N-壬酸香草酰胺0.06350.3180.1270.635辣椒素0.06110.3050.1220.611二氢辣椒素0.06110.3050.1220.6116GB/T40348—2021(资料性)c)干燥气温度：350℃;化合物名称保留时间/min定量离子对定性离子对源内碎裂电压/V碰撞能量/VN-壬酸香草酰胺辣椒素二氢辣椒素GB/T40348—2021(资料性)三种辣椒素类物质的LC-MS/MS总离子流图和多反应监测图B.1三种辣椒素类物质的LC-MS/MS总离子流图见图B.1。310.8-0.6-0.4-r/min图B.1三种辣椒素的总离子流图B.